目的:探讨组蛋白甲基转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2（EZH2）调控脓毒症T淋巴细胞功能失调的作用及机制。方法:按随机数字表法将24只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、脓毒症模型组〔盲肠结扎穿孔术（CLP）+二甲基亚砜（DMSO）组〕及EZH2选择性抑制剂干预组（CLP+GSK126组），每组8只。采用CLP法制备脓毒症小鼠模型；假手术组小鼠不结扎穿刺盲肠，其余操作同CLP+DMSO组。CLP+DMSO组及CLP+GSK126组小鼠术后立即分别腹腔注射DMSO或GSK126（10 mg/kg）。术后24 h处死小鼠取肠系膜淋巴结，采用流式细胞仪检测T淋巴细胞EZH2表达、T淋巴细胞凋亡率、细胞增殖标志物ki-67抗原阳性T淋巴细胞（ki-67 +）比例、γ-干扰素阳性T淋巴细胞（IFN-γ +）比例、程序性死亡受体-1阳性T淋巴细胞（PD-1 +）比例及程序性死亡配体-1阳性T淋巴细胞（PD-L1 +）比例。 结果:与假手术组相比，CLP+DMSO组小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞EZH2表达升高。与CLP+DMSO组相比，CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结CD3 +比例升高（0.70±0.02比0.50±0.07， P<0.01），表明抑制EZH2可增加脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞数量；同时，CLP+GSK126组淋巴结CD4 +及CD8 +细胞中ki-67 +比例显著上升（CD4 +：0.74±0.05比0.63±0.04，CD8 +：0.82±0.06比0.70±0.04，均 P<0.05），表明抑制EZH2可增加脓毒症小鼠淋巴结增殖活性较高的T淋巴细胞比例；另外，CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞凋亡率与CLP+DMSO组比较差异无统计学意义〔CD4 +：（21.53±2.87）%比（20.48±3.21）%，CD8 +：（8.34±1.02）%比（7.71±1.38）%，均 P>0.05〕，表明抑制EZH2对脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞凋亡无明显影响。与CLP+DMSO组相比，CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结IFN-γ +CD4 +、IFN-γ +CD8 +比例也显著增加（IFN-γ +CD4 +：0.31±0.11比0.14±0.06，IFN-γ +CD8 +：0.30±0.10比0.13±0.06，均 P<0.05），表明抑制EZH2可增强脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞IFN-γ分泌能力；同时，CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结PD-1 +CD8 +比例较CLP+DMSO组显著下降（0.092±0.006比0.135±0.004， P<0.01），表明抑制EZH2可降低脓毒症小鼠淋巴结CD8 +细胞PD-1的表达量，但对PD-L1 +比例无明显影响。 结论:EZH2参与了脓毒症诱导的T淋巴细胞功能障碍的调控，该作用可能部分通过调节PD-1表达介导。

[目的]研究Zeste基因增强子人类同源2(EZH2)选择性抑制剂GSK126对激素性股骨头坏死患者骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响.[方法]选取20例激素性股骨头坏死患者和20例股骨颈骨折患者,无菌条件下抽取患者股骨骨髓,密度梯度离心法体外分离培养MSCs,取第三代细胞实验.实验分为三组:ONFH组为骨坏死患者MSCs,GSK126组为ONFH的MSCs经GSK126干预72h,对照组为股骨颈骨折患者MSCs.MTT检测24、48、72 h三组细胞的增殖能力变化并确定GSK126的最适浓度.测定各组细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)的表达水平.实时定量PCR检测PCNA、cyclinD1、cyclinE1表达,Western blot检测H3K27me3的表达.[结果]与对照组相比,ONFH组细胞增殖能力下降、ROS水平增高,MMP下降,差异有统计意义(P＜0.05).10 μmol/LGSK126干预培养72 h后(GSK 126组)能明显促进激素性骨坏死组MSCs增殖,降低ROS水平,提高MMP水平,与ONFH组间的差异有统计学意义(P＜0.05),但仍不及对照组,尽管差异无统计学意义(P＞0.05).实时定量PCR结果显示:ONFH组PCNA、cyclinD1、cyclinE1 mRNA水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);10 μmol/L GSK126处理后逆转上述mRNA,使其接近对照组水平(P＞0.05).Western blot示ONFH组H3K27me3蛋白水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),GSK126处理后蛋白含量明显降低.[结论]H3K27me3修饰异常可能与激素性股骨头坏死的发病相关,10 μmol/L GSK126可逆转其表达,能显著促进MSCs增殖.

目的 观察Zeste基因增强子同源物2(EZH2)选择性抑制剂GSK126对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响.方法 体外分离培养BMSCs,取第3代细胞进行实验.噻唑蓝(MTT)检测确定GSK126的最适浓度.将细胞消化、悬浮后,以5×106/ml的细胞密度进行高密度培养,用含有或不含GSK126的软骨诱导液诱导培养3周.免疫组织化学、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖的表达.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖和性别决定区Y框蛋白9 (SOX9) mRNA的表达.Westem blot检测H3K27me3的蛋白含量.结果 5μmol/LGSK126无明显细胞毒作用,被选为本实验最适浓度.组织学染色显示实验组微团中的细胞体积较对照组稍大,细胞密度稍低.两组微团均有Ⅱ型胶原、蛋白多糖的合成与分泌,且实验组的表达最为强烈,实验组Ⅱ型胶原吸光度(A)值为0.3685±0.0405,对照组A值为0.1322±0.021 1.Real-timePCR检测显示,GSK126干预3周后实验组Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达量明显高于对照组(P＜0.01).Western blot检测显示对照组H3 K27me3蛋白水平显著高于实验组,GSK126的干预使得H3 K27 me3含量明显降低,实验组A值为0.3265 ±0.0302,对照组A值为0.6742±0.0562.结论 GSK126通过降低细胞内H3K27me3蛋白水平,有效地促进BMSCs成软骨方向分化.

目的 探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126体外对急性白血病和淋巴瘤细胞增殖和细胞凋亡的作用.方法 采用CCKˉ8法测定不同浓度GSK126作用不同时间对人T淋巴细胞白血病CEM细胞、人急性单核细胞白血病U937细胞和人伯基特淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,采用Annexin V／PI双染法测定GSK126对细胞凋亡的影响,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测GSK126对EZH2、bclˉ2、bclˉxL基因表达的影响.结果 作用24、48、72 h后,与相应阴性对照组(0 μmol／L)比较,5、10、15、20、25 μmol／L GSK126 对 CEM 细胞,5、10、15、20 μmol／L GSK126 对U937细胞和5、10、15、20、25、30 μmol／L GSK126对Raji细胞的增殖均具有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性(均P＜0.05). GSK126作用于CEM、U937、Raji细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(13.46±0.83)、(11.65±1.02)、(15.00±0.19)μmol／L.与相应阴性对照组(0 μmol／L)比较,8、12、16 μmol／L GSK126均可不同程度促进CEM、U937细胞凋亡,凋亡率差异均有统计学意义(F＝167.995, P＜0.01;F＝158.400,P＜0.01);而Raji细胞,16 μmol／L GSK126较阴性对照组有更高的细胞凋亡率,差异有统计学意义(t＝47.998,P＜0.05). 8、12、16 μmol／L GSK126均较阴性对照组降低CEM、U937、Raji细胞EZH2 mRNA的表达水平(F＝82.035,P＜0.05;F＝252.712,P＜0.05;F＝690.536,P＜0.01)和凋亡相关基因 bclˉ2、bclˉxL mRNA 的表达水平(bclˉ2:F＝1 900.525,P＜0.01;F＝431.324,P＜0.01;F＝216.184,P＜0.01;bclˉxL:F＝256.751,P＜0.01;F＝147.019,P＜0.01;F＝209.325,P＜0.01).结论 EZH2对急性白血病和淋巴瘤的发生发展有重要作用,GSK126作为EZH2高选择性小分子抑制剂之一,可为血液系统恶性肿瘤临床用药提供新的可能.