目的 探讨抑制黏着斑激酶(FAK)-蛋白激酶B(Akt)通路磷酸化对中心静脉导管(CVC)留置诱导的兔颈外静脉损伤的保护作用及其机制.方法 按照体重将新西兰兔随机分为3组:正常组、模型组和实验组,每组5只.经兔右颈外静脉插入CVC至右心房与上腔静脉交汇处,建立颈外静脉损伤模型.实验组用50μmol·L-1的黏着斑激酶小分子抑制剂(Y15)溶液浸润CVC插管.插管后2,4和6周,苏木精-伊红染色观察颈外静脉病理改变,酶联免疫吸附法检测兔血清中活性氧簇(ROS)水平,蛋白质印迹法测定兔颈外静脉中磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)Tyr 397的相对表达水平.结果 干预4周后,模型组静脉腔内肉芽组织形成,大量炎细胞浸润;实验组血管内膜脱落.正常组、模型组和实验组的ROS水平分别为(32.65±1.97),(346.46±5.67)和(163.42±5.37)U·mL-1;这3组的p-FAK Tyr 397相对表达水平分别为0.13±0.02,3.41±0.04和0.49±0.03.模型组的上述指标与正常组比较、或实验组的上述指标与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.001).结论 Y15可减轻CVC留置诱导的颈外静脉损伤.

局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种非受体细胞内酪氨酸激酶,其同时具有激酶依赖和非激酶依赖的支架功能,在肿瘤的发生发展及转移侵袭中均起到重要作用,被认为是抗肿瘤药物研发的重要靶点.然而,传统的小分子抑制剂只能抑制其激酶活性,难以靶向非激酶依赖的支架功能.因此,迫切需要新颖的策略来研究FAK靶点,为FAK靶点的成药性及其相关药物的研发奠定基础.蛋白水解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimera,PROTAC)技术是一种新兴的药物研发策略,其能招募E3泛素连接酶,特异性泛素化靶蛋白并通过蛋白酶体系统靶向降解目的 蛋白.PROTAC的独特作用机制能靶向降解FAK蛋白,从而消除FAK的支架功能,极大吸引了科研人员的兴趣.本文简述了FAK蛋白、信号通路及小分子抑制剂,系统综述了基于PROTAC技术靶向降解FAK蛋白的最新研究进展,最后总结并展望了基于PROTAC技术靶向FAK蛋白的发展前景.

目的 研究黏着斑激酶(FAK)抑制剂(Y15)降低中心静脉导管(CVC)给药诱导的血管内皮细胞与单核细胞黏附的分子机制.方法 将体外EA.hy926细胞随机分为3组:正常对照组、模型组和实验组.模型组:EA.hy926细胞划痕后与截取好的CVC和THP-1细胞共培养,培养液中加入5-氟脲嘧啶(40μg·mL-1);实验组:在模型组基础上加入Y15(50μmol·L-1).蛋白质印迹法测定磷酸化黏着斑激酶Y397(FAKpY397)和锌指转录因子4(GATA4)的表达水平;细胞黏附实验测定THP-1细胞黏附情况.结果 干预72 h后,正常对照组、模型组和实验组的FAKpY397的相对表达量分别为0.14±0.03,2.31±0.09和1.27±0.04;这3组的GATA4蛋白相对表达量分别为0.33±0.01,4.75±0.36和1.70±0.08;这3组的THP-1细胞黏附数分别为(2.00±0.71),(41.20±3.03)和(6.00±1.58)个.上述指标:模型组与正常对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001).结论 黏着斑激酶抑制剂Y15可能通过抑制FAK活化,降低GATA4水平,抑制THP-1细胞的黏附.

目的 从已知化合物中挖掘出新型的对局部黏着斑激酶(FAK)具有较强作用的化合物,并结合体外的药理活性检测作为初筛方法,以期得到选择性更高、效果更好的FAK小分子抑制剂.方法 首先采用Auto-dock vina从SPECS数据库进行FAK小分子抑制剂的计算机虚拟筛选再通过RDKit操作环境进行类药五原则筛选后,采用Ward方法对化合物进行分层聚类,然后选出6类得分最高的化合物进行FAK抑制活性检测和进一步的实验验证.结果 计算机辅助药物虚拟筛选得到的6个代表化合物在MDA-MB-231-FAKwT细胞上均具有一定的FAK激酶抑制活性,其中以CY308的活性最优,IC50为6μmol/L.利用表面等离子共振(SPR)技术证实了活性化合物CY308与FAK有较强的结合,并采用分子对接对其结合位点进行了预测.