局部黏着斑激酶(FAK)是一种细胞质内的蛋白酪氨酸激酶(PTK)，在多种癌细胞中过度表达和激活，与肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关。FAK可以转移到癌细胞的细胞核，调节炎症基因表达，释放趋化因子和细胞因子，改变肿瘤微环境(TME)，促进免疫逃避和免疫治疗抵抗，可以作为肿瘤靶向治疗的潜在靶点。FAK的研究与应用为肿瘤治疗带来了新的曙光。

目的:探讨CXC趋化因子配体11(CXCL11)/CXC趋化因子受体3(CXCR3)生物轴对胆囊癌细胞侵袭迁移的调控作用及其机制。方法:将胆囊癌细胞株GBC-SD与外源性CXCL11共培养处理后，蛋白质印迹法(Western blot)检测局部黏着斑激酶(FAK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB/Akt)的表达及磷酸化水平，Transwell实验检测细胞的侵袭迁移能力。采用RNA干扰技术沉默CXCR3基因表达，观察其对CXCL11介导FAK/PI3K/Akt信号通路活化的影响。评估CXCR3基因敲减、FAK抑制剂PF573228对CXCL11诱导胆囊癌细胞侵袭迁移的影响。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:Western blot实验结果表明，CXCL11共培养组磷酸化FAK(p-FAK)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)的相对表达量(0.849±0.082、0.824±0.084、0.865±0.081)均显著高于空白对照组(0.186±0.034、0.195±0.038、0.191±0.033)，差异有统计学意义( t＝12.917、11.821、13.286， P<0.05)；CXCR3敲减+CXCL11共培养组p-FAK、p-PI3K、p-Akt的相对表达量(0.215±0.048、0.223±0.057、0.217±0.052)均显著低于CXCL11共培养组(0.849±0.082、0.824±0.084、0.865±0.081)，差异有统计学意义( t＝11.578、10.234、11.605， P<0.05)。Transwell实验结果显示，CXCL11共培养组细胞的侵袭迁移能力显著高于空白对照组[(168.2±18.4)个比(70.8±9.1)个， t＝10.635， P<0.05]；CXCR3敲减+CXCL11共培养组细胞的侵袭迁移能力显著低于CXCL11共培养组[(79.6±10.1)个比(168.2±18.4)个， t＝9.445， P<0.05]；PF573228预处理+CXCL11共培养组细胞的侵袭迁移能力显著低于CXCL11共培养组[(86.4±11.8)个比(168.2±18.4)个， t＝8.375， P<0.05]。 结论:CXCL11/CXCR3生物轴通过激活FAK/PI3K/Akt信号通路促进胆囊癌细胞的侵袭迁移能力。

目的:探究快速生长发育期SD大鼠颅骨的生长发育及其与颅骨和硬脑膜中局部黏着斑激酶(FAK)/Twist1信号通路的关系。方法:选取幼龄大鼠，从出生后1周开始，使用软尺记录颅骨长度(颅长)及宽度(颅宽)；分别使用电子秤和电子天平称量体质量和脑质量；使用量筒称量脑组织的容积；蛋白质免疫印迹法(WB)检测颅骨FAK和硬脑膜Twist1的表达变化；免疫组织化学(简称免疫组化)和免疫荧光染色法观察颅骨与硬脑膜组织的细胞形态及FAK/Twist1在不同部位的表达差异。结果:(1)大鼠颅长、颅宽在1～7周内均逐渐增加( F颅长＝420.20、 F颅宽＝47.27，均 P<0.001)，与第1周相比，第2周时颅长和颅宽均明显增加(均 P<0.05)，第7周时颅长和颅宽增长分别占整个发育过程(1～12周)的94.4%和90.0%。(2)大鼠的体质量和脑质量在1～7周内逐渐增加( F体质量＝485.20、 F脑质量＝126.00，均 P<0.001)，与第1周相比，第2周时体质量和脑质量均明显增加(均 P<0.05)，第7周时增加的体质量和脑质量分别占整个发育过程的60.4%和51.2%。(3)大鼠的脑容积在1～7周内逐渐增加( F＝852.80， P<0.001)，1～3周增长迅速，3周以后较为平缓，第7周时增加的脑容积占整个发育过程的60.5%。(4)WB结果显示，第1～7周时颅骨组织中FAK表达水平逐渐升高( F＝15.80， P<0.001)，第7周时FAK表达水平较第1周明显升高( P<0.01)；硬脑膜组织中FAK表达水平呈现先降低后升高的趋势，第4周FAK表达水平达到最高值，与第1周相比，差异有统计学意义( P<0.05)；颅骨组织中FAK的表达水平与颅长、颅宽的相关系数分别为0.95、0.96(均 P<0.001)，呈正相关。(5)颅骨颅缝观察结果显示，出生后第1、4、7周，大鼠的颅骨生长以纵向生长为主，且颅缝逐渐清晰，在第7周时已完全闭合。(6)免疫组化及免疫荧光结果显示，Twist1主要在硬脑膜中表达，在第1周时表达水平最高，随后逐渐下降( F组化＝22.10、 F荧光＝36.82，均 P<0.01)；FAK主要在颅骨中表达，第4周较第1周表达降低( P<0.01)，后逐渐升高。 结论:大鼠出生后1～7周，FAK在颅骨中的表达水平与颅骨的生长发育正相关，而Twist1在颅骨和硬脑膜中的表达水平则随着颅骨生长和骨缝闭合而降低，颅骨及硬脑膜中FAK/Twist1可能共同调节了幼龄大鼠颅骨的生长发育。

目的:探究高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)对肝内胆管癌干细胞特性的影响及其机制。方法:利用TCGA数据库(35例胆管癌组织和9例正常组织)分析GOLPH3在胆管癌中的表达。免疫组织化学分析25例胆管癌根治手术患者癌组织和癌旁组织中GOLPH3的表达模式。将GOLPH3敲低质粒和对照质粒转入肝内胆管癌细胞系(HuCCT1)，荧光显微镜和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。集落形成实验检测细胞增殖能力。肿瘤球形成实验和Western blot检测干细胞样特性。样本数据采用非配对 t检验。 结果:TCGA数据库中胆管癌组织的GOLPH3表达高于正常组织(P< 0.001)。敲低GOLPH3抑制了HuCCT1细胞的增殖能力和干细胞特性，对照组的细胞克隆数目高于敲低组[(175.72±16.04)个比(67.33±5.69)个， t＝11.024， P<0.01]；对照组的肿瘤球平均直径高于敲低组[(244.43±38.82) μm比(131.32±19.86) μm， t＝4.593， P<0.01]；单层细胞中对照组的SOX2蛋白表达水平高于敲低组(0.75±0.07比0.39±0.08， t＝4.304， P<0.05)；单层细胞中对照组的CD44蛋白表达水平与敲低组比较，差异无统计学意义(0.31±0.11比0.23±0.09， t＝0.916， P>0.05)；球形细胞中对照组的SOX2蛋白表达水平高于敲低组(0.85±0.04比0.54±0.02， t＝12.357， P<0.01)；球形细胞中对照组的CD44蛋白表达水平高于敲低组(0.81±0.09比0.57±0.06， t＝7.841， P<0.05)。京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析和基因本体论(GO)注释提示GOLPH3的致癌作用与整合素通路激活有关。GOLPH3敲低后整合素(ITG)/局部黏着斑激酶(FAK)通路活性下降，单层细胞中对照组的ITGA2蛋白表达水平高于敲低组(0.70±0.07比0.42±0.09， t＝30.404， P<0.01)；单层细胞中对照组的ITGB1蛋白表达水平高于敲低组(0.68±0.10比0.42±0.04， t＝6.735， P<0.05)；单层细胞中对照组的p-FAK蛋白表达水平高于敲低组(0.61±0.04比0.39±0.04， t＝22.084， P<0.01)；球形细胞中对照组的ITGA2蛋白表达水平高于敲低组(0.82±0.08比0.56±0.05， t＝13.485， P<0.01)；球形细胞中对照组的ITGB1蛋白表达水平高于敲低组(0.85±0.06比0.64±0.03， t＝6.672， P<0.05)；球形细胞中对照组的p-FAK蛋白表达水平高于敲低组(0.77±0.11比0.51±0.08， t＝9.019， P<0.05)。 结论:GOLPH3在肝内胆管癌中高表达，其致癌机制可能与整合素通路激活有关。

目的:通过分析大鼠颅盖骨生长发育过程中头颅各径线、颅骨厚度和脑容积的变化，以及局部黏着斑激酶(FAK)的表达规律，探寻颅骨快速生长期的标志物。方法:实验采用SD大鼠，自出生后1~12周，测量其头颅各径线(A线为鼻尖至枕后粗隆的连线，B线为两侧眶内缘垂直于A线的连线，C线为两下颌角的连线，D线为两侧眶外缘的连线)；将大鼠安乐死后剥离其两侧颅盖骨，分别使用量筒和游标卡尺测量其脑容积和颅骨厚度；应用实时定量PCR和蛋白质免疫印迹方法检测颅盖骨组织中FAK的mRNA和蛋白表达水平。结果:(1)头颅径线：A线变化最为明显，第1~7周时的增长速度较快；第2~7周时，与前一周相比差异均有统计学意义(均 P<0.05)，而第7周后A线的增长趋于平缓。B线的增长较为平稳。第2周时C线和D线较上一周均明显增长(均 P<0.05)，第2周后两线的增长趋于平稳。(2)颅盖骨的厚度：第1~2周时颅盖骨几乎无增厚，但在第3~8周时较前一周增厚(均 P<0.05)，而且第8周后颅盖骨的厚度增长趋于平稳。(3)脑容积：1~3周的脑容积增长较快( P<0.001)，第3周后趋于平稳。(4)脑容积与颅盖骨厚度的相关性分析结果：脑容积的增长与颅盖骨变厚呈正相关( R＝0.90， P＝0.001)。(5)FAK mRNA与蛋白表达变化情况：在大鼠脑发育过程中，FAK的mRNA和蛋白的表达量均逐渐升高，且均在第10周时达到最高值(均 P<0.05)，随后逐渐趋于平稳，蛋白与mRNA的表达趋势相一致。 结论:大鼠在出生后1~12周，FAK在颅骨组织中的表达趋势与颅骨的生长发育规律相一致。在脑完成快速生长后，FAK可能参与了大鼠颅骨的生长发育。

目的 探究芦可替尼能否在外泌体层面通过抑制血管新生减缓原发性骨髓纤维化(PMF)发展.方法 采集3例初诊PMF患者治疗前(初诊组)和芦可替尼治疗3个月后(芦可替尼组)及3例原发免疫性血小板减少症患者(对照组)的骨髓液,提取外泌体.采用蛋白质印迹法检测外泌体中促血管新生相关因子的蛋白质表达水平.将外泌体与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养24 h后,采用CCK-8法检测HUVEC的增殖活力,采用流式细胞术检测HUVEC细胞周期分布,采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测HUVEC的迁移和侵袭能力,采用qPCR和蛋白质印迹法检测HUVEC中侵袭增殖相关因子的mRNA和蛋白质表达水平.结果 与对照组相比,初诊组外泌体中血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体1(VEGFR1)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧合酶-2(COX-2)表达水平均增加(均P<0.01);芦可替尼组VEGF、VEGFR1、HIF-1α、COX-2表达水平均低于初诊组(均P<0.01).与初诊组外泌体共培养的HUVEC增殖、迁移和侵袭能力相较于对照组均增强(均P<0.05),而与芦可替尼组外泌体共培养的HUVEC增殖、迁移和侵袭能力较初诊组下降(均P<0.05).与初诊组外泌体共培养的HUVEC中S期细胞占比高于对照组,与芦可替尼组外泌体共培养的HUVEC中S期细胞占比低于初诊组.与对照组相比,与初诊组外泌体共培养的HUVEC中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、局部黏着斑激酶(FAK)、增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA和蛋白质表达水平均较高(均P<0.01);与芦可替尼组外泌体共培养的HUVEC中MMP-2、MMP-9、FAK、PCNA mRNA和蛋白质表达水平均较初诊组下降(均P<0.01).结论 体外实验中,PMF初诊患者骨髓源性外泌体可通过血管新生机制促进PMF进展,芦可替尼能够在外泌体层面抑制血管新生从而发挥PMF治疗作用.

[目的]评估炙马钱子胶囊医治硼替佐米相关性周围神经病(bortezomib induced peripheral neuropathy,BIPN)的有效性,初步探究其基于长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)X失活特异性转录本(X inactive specific transcript,XIST)/锌指结构反义转录本1(ZNFX1 antisense RNA 1,ZFAS1)干预BIPN的机制.[方法]通过前瞻性非随机对照的研究方法,共收集20例符合多发性骨髓瘤中西医诊断并接受硼替佐米(bortezomib,BTZ)治疗而且发生BIPN接受炙马钱子胶囊治疗的患者,与未接受马钱子治疗的患者进行中医症候积分、神经毒性评分、周围神经病变(peripheral neuropathy,PN)分级、部分周围神经传导速度的比较.通过自身对照,采集治疗组患者的外周血液样本,使用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症相关因子表达.培养DRG 50B11细胞,通过细胞增殖毒性检测筛选马钱子最佳作用浓度和时间及BTZ最佳作用时间,随机分为正常对照组、BTZ 组、马钱子+BTZ 组,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测炎症相关因子及细胞总RNA相关指标表达,分析差异性及相关性.[结果]临床研究显示,与对照组比较,患者治疗后PN、中医证候积分、神经毒性评分降低,周围神经传导速度增加(P＜0.05),无明显不良反应.实验研究显示,与治疗前比较,白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达均降低(P＜0.05),且与时间存在显著负相关性(P＜0.01).与BTZ 组比较,马钱子+BTZ组IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、lncRNA XIST、纤维粘连蛋白 1(fibronectin 1,FN1)、磷酸化局部黏着斑激酶(phospho-focal adhesion kinase,p-FAK)表达降低(P＜0.05),miR-96-5P、miR-1271-5P表达升高(P＜0.05),lncRNA ZFAS1 表达量差异无统计学意义(P＞0.05);lncRNA XIST表达与 IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、FN1、p-FAK表达显著正相关(P＜0.01),与miR-96-5P存在中等负相关性(P＜0.05),与miR-1271-5P存在极弱相关或无相关性(P＞0.05).[结论]炙马钱子胶囊在一定程度上可缓解BIPN且较为安全,其机制可能与调控lncRNA XIST,促进miR-96-5P/FN1表达,抑制p-FAK介导的神经炎症有关.

目的 探讨吉马酮(GMC)调节局部黏着斑激酶(FAK)/Yes相关蛋白(YAP)通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响.方法 将A549/DDP细胞分为CK组、低剂量GMC组(GMC-L组,5μmol/L)、中剂量GMC组(GMC-M组,10μmol/L)、高剂量GMC组(GMC-H组,20μmol/L)、GMC-H+pcDNA组(20μmol/L+转染pcDNA)、GMC-H+pcDNA-FAK组(20μmol/L+转染pcDNA-FAK).检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况;检测多药耐药基因1(MDR1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化的FAK(p-FAK)、YAP蛋白表达情况.结果 与CK组比较,GMC-L组、GMC-M组、GMC-H组A549/DDP细胞OD450值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,且呈浓度依赖性(P＜0.05);与GMC-H组、GMC-H+pcDNA组比较,GMC-H+pcDNA-FAK组A549/DDP细胞OD450值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 GMC可能通过抑制FAK/YAP信号通路减弱NSCLC细胞DDP耐药性.

目的 观察4周模拟失重大鼠股动脉血管整合素 (integrin) αvβ3信号通路重要分子表达和黏着斑 (focal adhesion, FA) 形成的变化及间断人工重力(intermittent artificial gravity,IAG)对抗的影响.方法 42只雄性SD大鼠按体质量随机分为3组(每组14只):尾部悬吊模拟失重组(HU组),间断人工重力组(IAG组)和对照组(CON租).采用免疫蛋白印迹和免疫组化(荧光)方法检测各组大鼠股动脉integrin αvβ3、存在于胞浆的非受体酪氨酸激酶(Src)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)和细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated-kinase1/2,ERK1/2)的蛋白表达变化;免疫荧光检测股动脉FAK形成的变化.结果 免疫蛋白印迹显示,HU组大鼠股动脉integrin αv、integrinβ3、p-FAK Y397、p-Src Y418和p-ERK1/2的表达较CON组显著减少(P<0.05);IAG组大鼠股动脉以上蛋白的表达较HU组显著增加(P<0.05),与CON组比较差异无统计学意义.FAK、Src和ERK1/23组差异无统计学意义.免疫组化结果显示,HU组大鼠股动脉血管平滑肌细胞上integrin αvβ3、p-FAK Y397、p-Src Y418和p-ERK1/2的阳性表达较CON组显著减少(P<0.05);而IAG组较HU组显著增加(P<0.05),与CON组差异无统计学意义.总FAK、Src和ERK1/2的阳性表达在各组差异无统计学意义.免疫荧光结果显示,HU组大鼠股动脉的黏着数目较CON组明显减少,而IAG组大鼠股动脉FAK的数目较HU组明显增加(P<0.05).结论 模拟失重使得股动脉integrin αvβ3以及其下游信号转导通路中p-FAK Y397、p-Src Y418和p-ERK1/2的蛋白表达量降低,FAK形成减少,而1 h/d的IAG能逆转这种变化.提示,integrin αvβ3及其下游的信号通路转导分子可能参与了失重所致的动脉重塑以及IAG对抗作用中的机械力信号转导过程.

内质网膜蛋白复合物亚单位6(endoplasmic reticulum membrane protein complex subunit 6,EMC6),也称穿膜蛋白93 (transmembrane protein 93,TMEM93)是我们首次报道的一个人类自噬相关分子.EMC6基因进化保守,表达广泛,在胃癌组织中表达下调或缺失.本研究利用构建的重组腺病毒5型EMC6(Ad5-EMC6)载体,感染胃癌细胞系BGC823和SGC7901,分析了其在肿瘤细胞的表达以及抗肿瘤活性.研究证明,Ad5-EMC6能够显著抑制胃癌细胞的克隆形成、细胞划痕修复、以及迁移和侵袭的能力.进一步的研究提示,Ad5-EMC6能够降低胃癌细胞局部黏着斑激酶(FAK)的Y576/577磷酸化水平,FAK下游的基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的蛋白质水平也同时下调.在裸鼠的腹膜扩散模型中,Ad5-EMC6处理组的小鼠腹膜结节数量明显减少或缺失.这些研究数据提示,Ad5-EMC6介导的FAK信号灭活可能是其抑瘤活性的机制之一,其分子机制还需要进一步探讨.