目的:探究长非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)GA结合蛋白转录因子β亚基 1的反义RNA(antisense RNA of GA binding protein transcription factor β subunit 1,GABPB1-AS1)靶向微小 RNA-497-5p/热休克蛋白 8(microRNA-497-5p/heat shock protein 8,miR-497-5p/HSPA8)轴调控急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖、侵袭迁移及凋亡的作用和机制.方法:HL-60细胞分为正常对照组、si-NC组、si-GABPB1-AS1组、si-GABPB1-AS1+NC inhibitor组、si-GABPB1-AS1+miR-497-5p inhibitor组.qRT-PCR检测LncRNA GABPB1-AS1、miR-497-5p和HSPA8表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GABPB1-AS1、miR-497-5p和HSPA8的靶向关系;MTT检测细胞活力;Edu检测细胞增殖;Transwell小室实验检测侵袭和迁移;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、HSPA8、肿瘤转移相关蛋白 2(metastasis-associated proteins,MTA2)、酵母Atg6同系物(homolog of yeast Atg6,Beclin-1)和Caspase-3蛋白水平;建立小鼠移植瘤模型验证LncRNA GABPB1-AS1对AML移植瘤生长的影响.结果:与人骨髓单核细胞相比,不同AML细胞系 THP-1、NB4、U-937、HL-60中 LncRNA GABPB1-AS1高表达[(1.29±0.10)、(1.58±0.12)、(2.02±0.17)、(3.17±0.24)vs.(1.02±0.07)]、miR-497-5p低表达[(0.94±0.07)、(0.75±0.03)、(0.57±0.03)、(0.25±0.01)vs.(1.05±0.09)].由于HL-60细胞中LncRNA GABPB1-AS1表达最高,故选择该细胞系进行功能验证实验.敲低LncRNA GABPB1-AS1能降低HL-60细胞活力、Edu阳性率、细胞侵袭数、迁移数、HSPA8 mRNA及HSPA8、PCNA和MTA2蛋白表达,增加凋亡率、miR-497-5p及Caspase-3和Beclin-1蛋白表达(P<0.05).miR-497-5p与LncRNA GABPB1-AS1、HSPA8之间分别存在靶向关系;抑制miR-497-5p表达能逆转LncRNA GABPB1-AS1敲低对HL-60细胞恶性生物学行为的抑制作用;抑制LncRNA GABPB1-AS1表达可抑制移植瘤生长.结论:LncRNA GABPB1-AS1敲低对AML细胞进展抑制作用,可能与上调miR-497-5p表达,下调HSPA8表达有关.

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)GABPB1-AS1调控miR-150-5p表达对高糖诱导人肾小球系膜细胞(HMC)纤维化的影响.方法 采用qRT-PCR法检测高糖诱导的HMC细胞中LncRNAGABPB1-AS1、miR-150-5p表达情况,将对数期HMC细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30mmol/L葡萄糖)、高糖+pcDNA3.1-NC组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1 组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+mimic NC组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+miR-150-5p mimic组,培养48h后,CCK-8法检测各组细胞增殖率;qRT-PCR法检测细胞中纤维连接蛋白(FN)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、纤维结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平;ELISA法检测细胞上清液白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western blot法检测FN、ICAM-1、CTGF蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因验证LncRNA GABPB1-AS1、miR-150-5p靶向关系.结果 对照组HMC细胞呈卵圆形;高糖组HMC细胞经培养后呈长梭形,细胞间隙增大、数目增多;高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1组HMC细胞较高糖组,部分恢复卵圆形;高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+miR-150-5p mimic组HMC细胞形态学改变较高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1组严重.与对照组比较,高糖组 GABPB1-AS1 水平降低(t=13.403,P＜0.05);增殖率、miR-150-5p水平,FN、ICAM-1、CTGF mRNA 与蛋白水平,上清液 IL-6、TNF-α 水平升高,差异均有统计学意义(t=7.960、12.307、12.137、13.707、12.970、17.757、13.964、15.724、15.645、12.065,P均＜0.05);与高糖组比较,高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1 组 GABPB1-AS1 水平升高(t=11.103,P＜0.05),增殖率、miR-150-5p水平,FN、ICAM-1、CTGFmRNA与蛋白水平,上清液IL-6、TNF-α水平降低,差异均有统计学意义(t=3.371、12.346、7.873、7.542、5.977、4.413、6.950、4.848、10.117、11.470,P 均＜0.05);与高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1 组比较,高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+miR-150-5p mimic 组 GABPB1-AS1 水平降低(t=4.529,P＜0.05),增殖率、miR-150-5p水平,FN、ICAM-1、CTGF mRNA与蛋白水平,上清液IL-6、TNF-α水平升高,差异均有统计学意义(t=2.487、7.405、6.333、5.233、3.313、3.693、3.777、4.017、7.026、7.276,P均＜0.05).结论 LncRNA GABPB1-AS1 可能通过下调miR-150-5p表达,抑制高糖诱导的HMC细胞纤维化.

目的 探讨E6、E7可能通过长链非编码RNA GA结合蛋白1-AS1(LncRNA GABPB1-AS1)/miRNA-497-5p实现对程序性死亡配体1(PD-L1)在人乳头瘤病毒(HPV)16阳性原代宫颈癌细胞株(H16CC)中的免疫调控作用.方法 使用免疫共沉淀法(Co-IP)验证宫颈癌细胞中HPV E6、E7蛋白和PD-L1蛋白是否有直接作用.基于癌症基因组图谱(TCGA)的宫颈癌数据分析hsa-miR-497-5p与预后的关系.构建miR-497-5p mimics和in-hibitor转染H16CC后,通过western blot方法检测PD-L1的表达情况;构建E6、E7 siRNA,经脂质体转染H16CC,通过qRT-PCR方法检测细胞中LncRNA GABPB1-AS1、miR-497-5p表达的情况,同时构建E6、E7基因表达质粒,在HPV阴性细胞株(HNCC)表达E6、E7,qRT-PCR法检测其细胞中LncRNA GABPB1-AS1、miR-497-5p的表达;通过软件及双荧光素酶活性实验确定miR-497-5p与PD-L1、LncRNA GABPB1-AS1与miR-497-5p有无直接靶向关系.结果 HPV E6、E7和PD-L1蛋白无直接作用;通过TCGA的数据发现hsa-miR-497-5p高表达的宫颈癌患者预后较好;PD-L1的表达与miR-497-5p呈负相关(P＜0.05);抑制H16CC细胞株中E6、E7表达后,LncRNA GABPB1-AS1表达下调,miR-497-5p与之反向变化(P＜0.05);而过表达HNCC细胞株中E6、E7后,LncRNA GAB-PB1-AS1表达上调,miR-497-5p表达下调,差异有统计学意义(P＜0.05);双荧光素酶活性实验证实miR-497-5p与PD-L1、miR-497-5p与LncRNA GABPB1-AS1存在靶向结合关系.结论 miR-497-5p能抑制PD-L1蛋白的表达水平,E6、E7蛋白与LncRNA GABPB1-AS1表达呈正向调控关系,与miR-497-5p表达呈负向调控关系,LncRNA GABPB1-AS1/miR-497-5p可能介导HPV E6、E7对PD-L1在HPV感染宫颈癌中的免疫调控作用.

目的 探讨GA结合蛋白转录因子亚基β1 的反义RNA(GABPB1-AS1)对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠脑微血管内皮细胞损伤的影响及可能机制.方法 体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,分为对照(Con)组、模型(Model)组、A组(Model加用si-NC)、B组(Model加用si-GABPB1-AS1)、C组(Model加用si-GABPB1-AS1 及anti-miR-NC)和D组(Model加用si-GABPB1-AS1及anti-miR-101-3p).RT-qPCR检测细胞中GABPB1-AS1和miR-101-3p表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、活化的半胱天冬酶 3(Cleaved-caspase 3)和活化的半胱天冬酶 9(Cleaved-caspase 9)蛋白表达,试剂盒检测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平及细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平.采用双荧光素酶报告基因实验验证GABPB1-AS1 和miR-101-3p靶向调控关系.结果 Con组、Model组、A组及B组GABPB1-AS1、miR-101-3p、细胞凋亡率、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9、MDA、SOD、IL-1β和TNF-α水平差异均有统计学意义(F=724.541、450.866、368.481、154.595、107.850、103.824、62.514、371.871、210.219、1726.871、488.217,P<0.05).与Con组比较,Model组细胞中GABPB1-AS1 表达升高,miR-101-3p表达降低,细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3 和Cleaved-caspase 9 蛋白水平、MDA含量及IL-1β和TNF-α水平升高(P<0.05),Bcl-2 蛋白水平和SOD活性降低(P<0.05).与A组和Model组比较,B组GABPB1-AS1 表达、细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3 和Cleaved-caspase 9 蛋白水平、MDA含量及IL-1β和TNF-α水平降低,miR-101-3p表达、Bcl-2 蛋白水平和SOD活性升高(P<0.05).GABPB1-AS1 靶向负调控miR-101-3p表达.与C组比较,D组细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3 和Cleaved-caspase 9 蛋白水平、MDA含量及IL-1β和TNF-α水平升高(t=13.360、9.779、5.644、5.156、13.545、37.810、25.132,P<0.05),Bcl-2 蛋白水平和SOD活性降低(t=9.311、12.752,P<0.05).结论 干扰GABPB1-AS1 可能通过上调miR-101-3p表达抑制H2O2 诱导的大鼠脑微血管内皮细胞凋亡、氧化应激反应及炎症因子表达.