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金槐ISSR-PCR反应体系的优化和引物筛选
编辑人员丨2023/8/6
目的 优化和建立稳定的金槐ISSR-PCR反应体系并筛选出稳定的ISSR-PCR引物.方法 采用L16(45)正交设计方法,以dNTP、Tap酶、ISSR引物、Mg2+浓度和模版DNA 5个影响因素进行4水平优化试验,并对反应体系进行验证;采用优化所得的最佳反应体系进行引物筛选.结果 确立了金槐的最佳ISSR-PCR反应体系:即在25μl总体积反应体系中包含10×Buffer2.5μl,MgCl2 2.5mmol·L-1,ISSR引物0.6μmol·L-1,dNTPs0.25mmol·L-1,Taq酶1.0U,模板DNA约50ng.通过最佳体系进行引物筛选,获得11条适宜金槐扩增的ISSR引物.结论 经过12份金槐样品的验证,证明所建立的体系稳定可靠,可用于金槐遗传多样性、指纹图谱和标记辅助育种等方面的研究.
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编辑人员丨2023/8/6
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淡豆豉异黄酮通过上调Nrf2/HO-1发挥对EA.hy926细胞氧化损伤的保护作用
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨淡豆豉异黄酮(isoflavones from semen sojae preparatum,ISSP)对人脐静脉内皮细胞融合细胞(human umbilical vein cell fusion cell,EA.hy926)氧化损伤的保护作用及其可能机制.方法 体外培养EA.hy926细胞,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导形成氧化损伤细胞模型后随机分为空白组、模型组(ox-LDL)、雌二醇组(ox-LDL+ E2)、Nrf2激动剂组(ox-LDL+ tBHQ)、淡豆豉异黄酮组(ox-LDL+ ISSP).采用CCK-8法检测细胞生存率,二硝基苯肼显色法检测LDH活性,ELISA法检测ET-1水平,WST-1法检测SOD活力,TBA法检测MDA含量;通过STITCH数据库分析淡豆豉有效成分与Nrf2蛋白的相互作用关系;免疫荧光检测细胞内Nrf2蛋白荧光表达,Western Blot检测HO-1和核内Nrf2蛋白表达情况,qRT-PCR检测Nrf2和HO-1 mRNA表达情况.结果 与模型组相比,在ISSP干预下,细胞存活率升高,LDH活性、ET-1水平和MDA含量均降低,SOD活力升高(P＜0.01或P＜0.05);STITCH分析结果显示,异黄酮及其主要成份染料木素与Nrf2均有密切联系,可通过多种途径对Nrf2产生作用;正常状态下,Nrf2蛋白主要表达于细胞质中,ox-LDL单独或合并E2、ISSP、tBHQ干预后,细胞核内Nrf2蛋白荧光表达增多;与模型组相比,ISSP干预可显著增加细胞中Nrf2、HO-1的蛋白和mRNA表达(P＜0.01或P＜0.05).结论 淡豆豉异黄酮可以显著降低ox-LDL引起的EA.hy926细胞氧化损伤,其作用机制可能与细胞内Nrf2信号通路有关.
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编辑人员丨2023/8/5
