保幼激素结合蛋白(JHBP)是存在于血淋巴和细胞内的一类载体蛋白,与保幼激素结合运送到靶标组织.本文研究舞毒蛾JHBP基因特性及其对高浓度CO2胁迫的响应,为明确全球气候变化下舞毒蛾适应性机制提供理论依据.通过舞毒蛾转录组文库分析结合RT-PCR克隆鉴定出7个JHBP基因,并进行基因特性和发育阶段特异性分析,同时利用密闭式CO2人工气候箱在不同CO2浓度(397μL/L、550μL/L和750μL/L)下将舞毒蛾卵饲养至3龄幼虫,利用qRT-PCR技术测定3龄幼虫JHBP基因表达量变化.结果表明,舞毒蛾JHBP家族7个基因全长开放阅读框大小为714～756 bp,编码237～251个氨基酸,分子质量为28.22～28.54 kDa,理论等电点为5.33～8.47.7个基因在不同发育阶段的表达存在差异,幼虫期LdJHBP1、2、5、6基因表达量较高,而LdJHBP3、4和7在蛹期和成虫期高表达.进化树分析表明舞毒蛾LdJHBP1、LdJHBP2、LdJHBP6分别与棉铃虫Helicoverpa armigera、 家蚕Bombyx mori、 冬尺蛾Operophtera brumata的JHBP亲缘关系较近.高浓度CO2下舞毒蛾3龄幼虫的LdJHBP表达量下降.JHBP基因表达可能影响JH结合与运输从而调节生长发育.

[目的]克隆沙葱萤叶甲Galeruca daurica保幼激素结合蛋白基因(Juvenile hormone binding protein,JHBP) cDNA全长序列,分析其分子特征和表达特性,为进一步明确其在沙葱萤叶甲生长发育及滞育中的作用奠定基础.[方法]基于本实验室组装的沙葱萤叶甲转录组数据库,采用RACE技术,克隆沙葱萤叶甲GdJHBP基因cDNA全长序列;运用ORF Finder、SignaIP、DNAMAN和TMHMM等软件分析其分子特征;利用MEGA6.0软件中的邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建系统发育树;应用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)技术分析GdJHBP在沙葱萤叶甲不同发育时期、成虫不同组织及高温胁迫下的表达模式.[结果]克隆获得了沙葱萤叶甲保幼激素结合蛋白基因GdJHBP cDNA全长序列(GenBank登录号:MG460309),cDNA全长为826 bp,开放阅读框(ORE)为714 bp,编码237个氨基酸;蛋白质预测分子量为26.58 ku,等电点为4.37;包含1条信号肽,无跨膜区,且在第27-189位氨基酸之间存在一个保幼激素结合蛋白家族JHBP保守结构域.序列比对分析表明,不同昆虫JHBP间氨基酸序列一致性较低,沙葱萤叶甲GdJHBP与棕榈象Rhynchophorus ferrugineus RfJHBP和马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata JHBP 3p2的氨基酸序列一致性最高也仅为30％.系统发育分析表明,GdJHBP与棕榈象血淋巴JHBP亲缘关系最近.RT-qPCR结果显示,GdJHBP在沙葱萤叶甲不同发育阶段均有表达,在幼虫期表达量最高,在卵和蛹期微量表达;在成虫滞育期间低表达,在滞育前与滞育结束后则有较高表达;在成虫发育过程中,头部的表达量显著低于腹部和胸部;高温(30-40℃)可诱导GdJHBP上调表达,在35℃时表达量达到最高值.[结论]沙葱萤叶甲GdJHBP属于血淋巴JHBP,在沙葱萤叶甲生长发育和成虫夏滞育中可能发挥着重要作用.

[目的]克隆意大利蜜蜂Apis mellifera Takeout(AmTO1)基因并进行生信分析.[方法]取蜜蜂样品,提取总RNA,反转录制备cDNA.设计特异性引物,PCR扩增AmTO1基因的ORF序列,利用ProtParam、SignalP和MEGA 6.0等多种生物信息学软件对其理化性质、信号肽、系统进化树等进行预测分析.[结果]获得意大利蜜蜂AmTO1基因的cDNA序列.ORF序列长738 bp,共编码245个氨基酸,蛋白分子量为27.07 kDa,理论等电点PI为8.40.信号肽位于第1-17位氨基酸,无跨膜结构域,剪切位点位于第17和18位氨基酸之间,有相对清晰的疏水区,且含有一个JHBP超家族保守结构域.[结论]AmT01属于昆虫TO蛋白家族,是一种分泌蛋白.