目的:检测甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(Mus81)在肝细胞癌中的表达，并观察Mus81对人肝癌细胞迁移、侵袭及转移能力的影响。方法:32例组织标本选自2020年1月至2021年6月在暨南大学附属广州红十字会医院进行手术切除的肝细胞癌患者的肝癌组织及相应癌旁组织。分析Mus81在32例肝癌标本、癌症基因组图谱数据库的374例肝癌样本、人正常肝细胞系HL-7702和人肝癌细胞系JHH-7、Huh-7、Hep3B中的表达水平，构建Mus81敲减的JHH-7、Huh-7和过表达的Hep3B肝癌细胞系，通过划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验和裸鼠尾静脉注射转移实验观察Mus81对肝癌细胞的影响。结果:Mus81在肝癌组织或细胞系中的表达量高于癌旁组织或正常肝细胞系，差异有统计学意义(均 P<0.05)。Mus81敲减的Huh-7肝癌细胞的迁移率、转移及侵袭细胞数分别为22.24%±2.16%、49.04±5.62、3.81±1.08，阴性对照组分别为26.89%±1.15%、86.81±4.79、19.78±3.30，两组比较差异有统计学意义( t＝4.24、26.59、23.92，均 P<0.01)；Mus81过表达的Hep3B肝癌细胞迁移率、转移及侵袭细胞数分别为80.57%±5.12%、18.74±8.07、33.81±8.44，均高于空载体组的64.17%±7.20%、10.96±5.32、3.04±1.13，差异有统计学意义( t＝4.15、4.18、18.78，均 P<0.01)。裸鼠尾静脉转移实验显示，注射Mus81敲减组JHH-7细胞的裸鼠总荧光量、转移瘤重量均低于对照组，且肾、脊柱、颈部、腋下及皮下的转移率均低于对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:Mus81基因在肝癌中表达上调，且可促进肝癌细胞的迁移、侵袭、转移能力，提示Mus81可能是一个潜在的肝细胞癌治疗靶点。

目的:检测锌指蛋白22(ZNF22)基因在肝癌组织中的表达水平并观察ZNF22对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭、转移能力的影响。方法:收集2020年1月至2021年6月在暨南大学附属广州红十字会医院行手术切除的32例肝细胞癌患者的肝癌组织及癌旁肝组织标本。分析ZNF22基因在32例肝癌标本以及癌症基因组图谱数据库371例肝癌样本中的表达水平。构建ZNF22基因敲减的SNU-449和JHH-7肝癌细胞系。通过细胞增殖实验、平板克隆形成实验、细胞凋亡实验、划痕愈合实验、Transwell侵袭实验、裸鼠皮下成瘤、尾静脉注射转移和小动物活体成像实验，观察ZNF22对肝癌细胞的影响。结果:ZNF22基因在肝癌组织中表达量高于癌旁组织，差异有统计学意义( P<0.001)。ZNF22敲减的SNU-449和JHH-7细胞的生长速度均低于相应的对照组细胞，差异有统计学意义(均 P<0.001)。相比阴性对照组，ZNF22敲减的SNU-449细胞形成的克隆数目减少(26±8比59±5)，细胞凋亡水平增加(6.60%±0.22%比2.38%±0.30%)，细胞的迁移率降低(14.47%±6.42%比68.84%±8.01%)，侵袭细胞数也降低(48.00±2.23比179.00±4.81)，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。ZNF22敲减的JHH-7细胞注射于裸鼠皮下后未见明显肿瘤生长，全身荧光表达量低于阴性对照组，差异有统计学意义( P<0.05)，裸鼠解剖观察亦未见转移瘤。 结论:ZNF22在肝癌组织中的表达升高，ZNF22基因敲减抑制了肝癌细胞的生长、增殖、侵袭、转移和成瘤能力，并可诱导肝癌细胞的凋亡。

目的 探讨重楼皂苷Ⅵ通过调控小核核糖核蛋白D1(SNRPD1)抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法 ①21只雄性裸鼠,采用皮下注射人肝癌Huh7细胞建立裸鼠肝癌移植瘤模型.裸鼠随机分为模型组(药物溶剂)、5 mg/kg重楼皂苷Ⅵ组、10 mg/kg重楼皂苷Ⅵ组,每组7只.连续腹腔注射给予相应干预10 d,观察各组裸鼠瘤体体积变化.②将人肝癌Huh7和JHH7细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅵ组,采用重楼皂苷Ⅵ(0～15 μmol/L)给予相应干预后,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期情况,Western blot法和实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测SNRPD1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白和基因的表达情况.采用分子对接技术预测重楼皂苷Ⅵ和SNRPD1蛋白的潜在靶向结合情况.结果 ①与模型组比较,10 mg/kg重楼皂苷Ⅵ能抑制Huh7细胞裸鼠移植瘤生长(P＜0.05).②与对照组比较,重楼皂苷Ⅵ能抑制人肝癌Huh7和JHH7细胞的增殖(P＜0.05)、细胞克隆形成(P＜0.05)及诱导细胞周期的阻滞(P＜0.05).分子对接结果显示,重楼皂苷Ⅵ潜在靶向SNRPD1蛋白;Western blot和RT-qPCR结果显示,与对照组比较,重楼皂苷Ⅵ可以下调SNRPD1的蛋白表达水平(P＜0.05),但不能下调SNRPD1 mRNA表达水平(P＞0.05).与对照组比较,重楼皂苷Ⅵ能下调SNRPD1的下游细胞周期蛋白Cyclin D1和CDK4的表达水平(P＜0.05).结论 重楼皂苷Ⅵ可能通过调控SNRPD1发挥抗肝癌作用.

目的 观察华蟾酥毒基(CBF)对肝癌细胞增殖的抑制作用,采用转录组学测序技术揭示相关基因及信号通路,探讨CBF抗肝细胞癌(HCC)的可能作用机制.方法 用不同浓度的CBF(0、2、4、8、16和32 μmol·L-1)处理人HCC细胞SMMC-7721和JHH7,时间梯度为24、48和72 h,WST-1试剂盒检测细胞增殖情况.根据WST-1试剂盒检测结果,用CBF 2 μmol·L-1干预SMMC-7721和JHH7细胞24 h,然后进行转录组学基因表达测序分析差异表达基因,并行生物信息学分析.基于文献报道及TCGA数据库观察部分差异表达基因在HCC组织中的表达情况,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测并验证CBF靶基因的表达情况.结果 ①CBF对SMMC-7721和JHH7细胞具有抑制增殖作用,且呈浓度-时间依赖性.②转录组学测序结果显示,经CBF干预后,SMMC-7721细胞获得差异表达基因共计578个(其中上调基因309个、下调基因269个),JHH7细胞获得差异表达基因共计611个(其中上调基因349个、下调基因262个),两组细胞获得的交集基因共有106个(差异倍数>2,P<0.05).③生物信息学分析显示,激活转录因子3(ATF3)、羰基还原酶1(CBR1)、细胞骨架相关蛋白4(CKAP4)、生长停滞和DNA损伤可诱导蛋白β(GADD45B)、钾二孔域通道亚科K成员5(KCNK5)、起源识别复合亚基5(ORC5)基因的转录水平在HCC组织中呈异常表达并与患者预后相关.④RT-qPCR结果显示,CBF能促进ATF3、KCNK5和GADD45B基因的表达,抑制CBR1、CKAP4和ORC5基因的表达,与测序结果一致.结论 CBF具有抑制HCC细胞增殖的作用,其机制可能与调控ATF3、KCNK5、GADD45B、CBR1、CKAP4和ORC5基因表达有关.

目的 研究石榴汁含样血清对肝癌细胞JHH-7凋亡与迁移的影响,并探讨其可能的机制.方法 雄性SD大鼠随机分为石榴汁组(灌胃石榴汁20 mL/(kg·bw))和空白组(灌胃等量生理盐水),连续灌胃7 d,2次/d.末次灌胃后腹主动脉采血,离心获得含样和空白血清,分别干预肝癌细胞JHH-7,并以胎牛血清作为对照.MTT法检测细胞活性,计算细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞的凋亡情况,Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3、Cytochrome-c(Cyt-C)和 Caspase-9以及迁移相关蛋白 MMP2、MMP9和 TIMP2的表达;划痕实验检测细胞的迁移能力.结果 与空白血清相比,含样血清可抑制JHH-7细胞的增殖,具有时间依赖性,且空白血清和含样血清对人正常肝细胞L02未表现出抑制作用;与空白血清相比,含样血清干预JHH-7细胞后,细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),激活了 Bcl-2家族蛋白,进一步导致线粒体损伤,诱发了线粒体途径诱导的细胞凋亡,相关蛋白p53、Caspase-3、Cyt-C和Caspase-9表达上调,Bcl-2的表达下调,Bax/Bcl-2比值增加(P＜0.05);与空白血清相比,含样血清抑制了 JHH-7细胞的迁移,且相关蛋白MMP2和MMP9的表达下调,TIMP2的表达上调,TIMP2/MMP2比值增加(P＜0.05).结论 石榴汁含样血清通过线粒体途经诱导肝癌细胞JHH-7的凋亡,并且通过调节MMP2/TIMP2和MMP9表达的平衡抑制JHH-7的迁移,从而发挥抗肝癌作用.