目的:检测甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(Mus81)在肝细胞癌中的表达，并观察Mus81对人肝癌细胞迁移、侵袭及转移能力的影响。方法:32例组织标本选自2020年1月至2021年6月在暨南大学附属广州红十字会医院进行手术切除的肝细胞癌患者的肝癌组织及相应癌旁组织。分析Mus81在32例肝癌标本、癌症基因组图谱数据库的374例肝癌样本、人正常肝细胞系HL-7702和人肝癌细胞系JHH-7、Huh-7、Hep3B中的表达水平，构建Mus81敲减的JHH-7、Huh-7和过表达的Hep3B肝癌细胞系，通过划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验和裸鼠尾静脉注射转移实验观察Mus81对肝癌细胞的影响。结果:Mus81在肝癌组织或细胞系中的表达量高于癌旁组织或正常肝细胞系，差异有统计学意义(均 P<0.05)。Mus81敲减的Huh-7肝癌细胞的迁移率、转移及侵袭细胞数分别为22.24%±2.16%、49.04±5.62、3.81±1.08，阴性对照组分别为26.89%±1.15%、86.81±4.79、19.78±3.30，两组比较差异有统计学意义( t＝4.24、26.59、23.92，均 P<0.01)；Mus81过表达的Hep3B肝癌细胞迁移率、转移及侵袭细胞数分别为80.57%±5.12%、18.74±8.07、33.81±8.44，均高于空载体组的64.17%±7.20%、10.96±5.32、3.04±1.13，差异有统计学意义( t＝4.15、4.18、18.78，均 P<0.01)。裸鼠尾静脉转移实验显示，注射Mus81敲减组JHH-7细胞的裸鼠总荧光量、转移瘤重量均低于对照组，且肾、脊柱、颈部、腋下及皮下的转移率均低于对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:Mus81基因在肝癌中表达上调，且可促进肝癌细胞的迁移、侵袭、转移能力，提示Mus81可能是一个潜在的肝细胞癌治疗靶点。

PGC-1α是影响脂肪沉积的重要候选基因,广西南丹瑶具有皮薄肉好的特点.因此,本研究的目的通过克隆和分析广西南丹瑶鸡PGC-1α基因全序列来阐述广西南丹瑶鸡优质肉品质形成的分子机理.根据GenBank上公布的参考序列(NM_001006457.1)设计引物,PCR扩增并克隆PGC-1α基因编码区全序列.结果显示,与参考序列(NM_001006457.1)相比,存在T51C、T81C、T90C、C111T、T465C、G646A、C741T、C1572G、T1579G、T1720C10处碱基突变,其中T51C、T81C、T90C、C111T、T465C、C741T、C1572G 7处为同义突变,无氨酸改变.G646、T1579G、T1720C 3处为错义突变,分别造成天冬氨酸突变为天冬酰胺,丝氨酸突变为丙氨酸,丝氨酸突变为脯氨酸.同源性分析结果显示,广西南丹瑶鸡与家鸡、家鸽、小鼠、猪、人的同源性分别为99.62％、96.5％、83.7％、85.1％、85.9％.本研究的结果提示,广西南丹瑶鸡PGC-1α基因存在多处错义突变,这些突变可能是造成南丹瑶鸡优质的原因之一.

Endothelin-1主要通过促进血管平滑肌细胞增殖引起血管结构和功能的改变,从而刺激血管收缩,Endothelin-1在动物血管生成和低氧适应等关键发育和生理过程中发挥重要的作用.为了进一步探讨高原动物脑Endothelin-1对其极端低氧适应调控的分子机理,本研究对牦牛(Bos grunniens)脑Endothelin-1基因CDS全长序列进行了克隆及其真核表达载体的构建.结果表明,牦牛Endothelin-1基因的CDS全长序列含有一个609 bp的开放阅读框,编码202个氨基酸,该蛋白分子量为22.98 kDa,理论等电点(pI)为9.63;成功构建出带有CMV启动子,绿色荧光蛋白标记的牦牛Endothelin-1真核表达质粒pEGFP-C 1-Endothelin-1;牦牛Endothelin-1基因CDS全长序列编码的氨基酸序列与黄牛(Bos taurus)、藏羚羊(Panthotop shodgsoni)、绵羊(Ovis aries)、野猪(Sus scrofa、小鼠(Mus musculus)、人(Homo sapiens)的同源性分别为100％、95％、93％、81％、77％、70％;且该氨基酸序列的系统进化情况与其亲缘关系远近一致.因此,我们认为高原动物牦牛Endothelin-1的结构和功能在进化上均具有高度保守性,其在低氧适应中的作用可能是通过表达差异或转录后修饰实现的,且本研究构建的真核表达质粒为进一步探讨该基因在青藏高原动物脑对极端低氧生境适应中的生物学功能及其调控机理提供了支持.

MUS81-EME1是结构特异性核酸内切酶,在维持基因组的稳定性中起重要作用.MUS81-EME1能促进同源重组修复、链间交联修复,也能促进染色体普通型脆弱位点的表达,还能处理复制过程中停滞的复制叉,重新启动复制.MUS81-EME1可与其他结构特异性核酸内切酶SLX1-SLX1、XPF-ERCC1形成合适的多聚体结构,能增强其作为分解酶的活力.MUS81-EME1的活性受细胞周期蛋白、复制检查点的调控.最新一些研究表明,MUS81-EME1能处理复制应激下的反向复制叉,从而促进肿瘤细胞的DNA复制,起到潜在致癌作用.

目的 研究甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(methyl methanesulfonate and UV sensitive gene clone 81,Mus81)沉默对Hep3B人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响.方法 采用慢病毒介导的小干扰RNA技术沉默Mus81基因的表达并以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Mus81基因的沉默效率.噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,平板克隆实验、碘化丙锭(PI)染色法和膜联蛋白V(Annexin V)-APC染色法分别检测Mus81沉默对Hep3B细胞系增殖、细胞周期及凋亡的影响.结果 慢病毒感染效率高于80％,Mus81基因干扰效率为76.42％(P<0.001).MTT生长曲线和平板克隆实验的结果显示,Mus81沉默的Hep3B细胞系的生长速度明显下降(P<0.001),增殖能力也明显减弱[细胞克隆数:(2±1)比(54±3),P<0.001].Annexin V-APC和PI染色检测显示Mus81沉默Hep3B细胞系的凋亡率明显升高[(20.87±0.82)％vs.(0.69±0.09)％,P<0.001]并出现G1期细胞比例轻微降低[(33.77±1.61)％vs.(42.06±0.40)％,P<0.05].结论 Mus81基因沉默可明显抑制人肝癌细胞系Hep3B的生长增殖并促进其凋亡.

目的 探讨MUS81基因多位点单核苷酸多态性与EB病毒(EBV)相关肿瘤的关系.方法 采用飞行时间质谱技术,分别检测鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌等肿瘤组织和正常对照人群外周血MUS81基因rs13817、rs648732、rs659857位点基因型,并分别分析EBV阳性肿瘤、EBV阴性肿瘤、正常对照人群MUS81基因上述位点基因型和等位基因频率的差异.结果 EBV阳性胃癌rs13817位点基因型AA、等位基因A和rs648732位点等位基因T频率均明显高于正常对照(χ2=4.917～6.802,P<0.05);EBV阳性胃癌和鼻咽癌rs659857位点TC基因型频率明显低于正常对照和(或)相应的EBV阴性肿瘤(χ2=14.759～28.741,P<0.01),EBV阳性和阴性淋巴瘤rs659857位点TC基因型频率明显低于正常对照(χ2=14.124、16.455,P<0.01).结论 MUS81基因rs13817、rs648732和rs659857位点多态性与EBV相关肿瘤存在相关性,是其潜在的风险因素.

目的:分析甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(Mus81)在乳腺癌组织中的表达水平,观察Mus81基因敲减对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和裸鼠移植瘤形成能力的影响.方法:从TCGA数据库下载乳腺癌样本基因表达数据,应用perl及R软件整理数据筛选出每个样本Mus81基因表达量.通过慢病毒介导的小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)技术构建Mus81基因敲减的MDA-MB-231乳腺癌细胞系(即Mus81敲减组)和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞系,以实时定量PCR法检测Mus81基因的敲减效率,再以MTT检测实验、克隆形成实验、细胞流式检测及实时定量PCR法检测两组MDA-MB-231细胞的生长、增殖、细胞周期分布、凋亡水平及Mus81下游基因表达水平.最后,向BALB/c裸鼠右侧腋下注射Mus81基因敲减组和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞,观察Mus81基因沉默对MDA-MB-231细胞在裸鼠中成瘤能力的影响.结果:Mus81基因在乳腺癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织(P<0.05).Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞中Mus81基因的表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05),Mus81基因的敲减效率达70.7％.较之阴性对照组,Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞的生长速度明显减缓(P<0.05);形成的细胞克隆数也明显下降(P<0.05);细胞凋亡水平、G2/M期细胞比例则明显升高(P<0.05).STC2等Mus81下游基因的表达水平在两组MDA-MB-231细胞间也有明显差异(P<0.05).裸鼠成瘤实验显示,Mus81基因敲减组形成的裸鼠瘤体体积和重量均明显低于阴性对照组(P<0.05).结论:Mus81基因在乳腺癌组织中的表达明显升高,且可能通过调控STC2等下游基因的表达促进三阴性乳腺癌细胞的生长增殖及裸鼠体内成瘤能力并抑制其凋亡,提示其可能是一个潜在的乳腺癌治疗靶点.

目的 研究Mus81基因沉默对MCF?7人乳腺癌细胞系增殖、凋亡和化疗敏感性的影响并初步探讨其调控机制.方法 首先构建Mus81沉默的MCF?7乳腺癌细胞系,使用噻唑蓝(MTT)法和平板克隆实验检测细胞生长和增殖,碘化丙锭(PI)染色法和膜联蛋白V(Annexin V)?APC染色法检测细胞周期及凋亡的变化.qRT?PCR检测Mus81沉默后下游基因的表达,MTT法检测化疗药物的50％抑制浓度(IC50)及逆转指数(RI).结果 (1)MTT生长曲线和平板克隆实验显示Mus81基因沉默后MCF?7细胞系增殖显著减缓(P<0.001),细胞克隆数明显下降(P<0.001).(2)Annexin V?APC和PI染色检测显示MCF?7细胞凋亡率升高(P<0.001),并出现明显的G2/M期阻滞.(3)MTT检测结果显示,Mus81沉默后MCF?7细胞对顺铂、阿霉素、表阿霉素和5?氟尿嘧啶的IC50值明显降低,RI依次为5.118、3.070、3.027及8.997.(4)qRT?PCR及Western blot检测下游信号通路表达的结果显示,Mus81沉默后MCF?7细胞中的APAF1、APC和PTEN基因表达升高,MAPK3和MAPK1基因表达降低.结论 Mus81基因沉默可明显抑制MCF?7人乳腺癌细胞系的生长增殖并诱导G2/M期阻滞及细胞凋亡,还可提高MCF?7细胞对顺铂、阿霉素、表阿霉素和5?氟尿嘧啶的敏感性,其机制可能与调控APAF1、APC、PTEN、MAPK1及MAPK3等下游基因的表达有关,提示Mus81可能是一个潜在的乳腺癌治疗靶点.