目的:分析微小RNA-23a（miR-23a）与磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）调控轴在结直肠癌（colorectal cancer，CRC）LS513细胞中的表达情况，并探讨二者对CRC发生发展的影响。方法:将LS513细胞分为空白对照组（NG组，细胞不做特殊处理）、阴性对照组（NC组，加入5 μl Lipofectamine3000和50 pmol/μl NC）、抑制miR-23a表达组（miR-23a-inhibitor组，转染miR-23a-inhibitor序列）。采用实时荧光定量PCR法检测LS513细胞miR-23a、PTEN mRNA水平；MTT法检测LS513细胞增殖能力；Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力；蛋白质印迹法检测增殖、迁移侵袭及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）通路相关蛋白水平变化。结果:与NG组、NC组比较，miR-23a-inhibitor组LS513细胞中miR-23a水平显著降低（ P<0.05），PTEN mRNA及蛋白表达水平均显著升高（ P<0.05）。MTT法检测结果显示与NG组、NC组比较，miR-23a-inhibitor组增殖抑制率显著升高[（16.62±3.21）% vs（16.65±3.26）% vs（47.55±13.61）%]（ P<0.05），PCNA蛋白表达显著降低（ P<0.05）。与NG组、NC组比较，miR-23a-inhibitor组LS513细胞迁移数[（287.25±58.32）vs（285.37±58.43）vs（136.87±36.53）]、侵袭数[（242.53±50.95）vs（239.87±50.62）vs（103.77±30.06）均显著减少（ P<0.05），且MMP-9、E-cadlerin蛋白表达显著降低（ P<0.05）。与NG组、NC组比较，miR-23a-inhibitor组LS513细胞中p-PI3K/PI3K、p-ATK/ATK蛋白表达量显著降低（ P<0.05）。 结论:抑制miR-23a表达可能上调PTEN基因表达抑制PI3K/Akt通路活化，进而抑制LS513细胞增殖、迁移及侵袭。

目的:探讨通腑解毒汤调控结直肠癌细胞凋亡的潜在机制.方法:纳入2019年3月～2020年3月于我院收治确诊为结直肠癌患者30例,年龄66～78岁.通过实时荧光定量PCR检测30例结直肠癌组织和30例癌旁组织中CCAT1的表达情况.敲低CCAT1后,检测结直肠癌细胞的凋亡情况.通腑解毒汤处理结直肠癌细胞HCT116、RKO、HT-29、LS513、SW620,LoVo、SW480后,检测细胞中CCAT1的表达量和凋亡情况.通腑解毒汤处理并过表达CCAT1后,检测结直肠癌细胞的凋亡情况.结果:30例结直肠癌患者癌组织中CCAT1的表达高于癌旁组织(P＜0.05).通腑解毒汤处理结直肠癌细胞HCT116、RKO、HT-29、LS513、SW620、LoVo、SW480后,结直肠癌细胞中CCAT1的表达均下降(P＜0.05).通腑解毒汤处理结直肠癌细胞HCT116、RKO、HT-29、LS513、SW620、LoVo、SW480后,结直肠癌细胞中的凋亡水平上升(P＜0.05).敲低CCAT1后,结直肠癌细胞HCT116、RKO、HT-29、LS513、SW620、LoVo、SW480的凋亡水平上升(P＜0.05).过表达CCAT1并用通腑解毒汤处理后,结直肠癌细胞HCT116、RKO、HT-29、LS513、SW620、LoVo、SW480的凋亡水平无明显变化(P＞0.05).结论:通腑解毒汤通过降低CCAT1的表达水平促进了结直肠癌细胞的凋亡.

目的 探讨结直肠癌小鼠结直肠中的韦荣氏球菌Veillonellaparvula对结直肠癌细胞的影响. 方法 AOM/DSS诱导C57BL/6小鼠形成结直肠癌后,收集结直肠内容物并涂布于LB平板进行培养.挑取平板上的单克隆菌落进行摇菌培养,取韦荣氏球菌Veillonellaparvula菌液上清处理结直肠癌细胞HT-29,微量滴定板法检测其活力;质谱分析上清中的蛋白质并进行纯化.用纯化的蛋白处理结直肠癌细胞HT-29,检测其活力和相关通路. 结果 取结直肠癌小鼠结直肠中的韦荣氏球菌Veillonellaparvula培养上清处理HT-29细胞,细胞活力显著增强(P＜0.05).收集Veil-lonellaparvula培养上清作质谱分析,评分大于150的分泌蛋白有12个,分别是RIW09983.1、EQC65645.1、WP_004692917.1、SNU97803.1、EQC64312.1、SNU98422.1、PKZ92195.1、EQC65720.1、WP_174892117.1、WP_060919644.1、KXB83763.1和EQC67766.1.将上述蛋白纯化后以10 μg/ml的浓度处理结直肠癌细胞HT-29后,其中EQC65720.1能够显著增强结直肠癌细胞HT-29的活力(P＜0.05).同时,将EQC65720.1 (GroEL)以10 μg/ml的浓度处理结直肠癌细胞SW620、COLO 205、HCT 116、LoVo、RKO、SW480、CT26.WT和LS513,细胞活力均显著增强(P＜0.05).用10 μg/ml GroEL处理结直肠癌细胞HT-29,JNK、ERK、p-JNK、p-ERK和AKT的表达水平无显著变化(P＞0.05),p-AKT的表达水平显著增强(P＜0.05).加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002后再用GroEL和LY294002同时处理,结直肠癌细胞HT-29的活力无显著变化(P＞0.05). 结论 韦荣氏球菌通过分泌GroEL蛋白激活结直肠癌细胞PI3K/AKT通路,并能促进结直肠癌细胞的活力.

目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)/p27轴参与结直肠癌(CRC)发生发展的分子机制,并初步研究其对CRC细胞LS513增殖、迁移侵袭及裸鼠成瘤能力的影响.方法 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Skp2和p27在CRC组织、癌旁组织以及人正常结肠上皮细胞CCD841CoN、不同CRC细胞株LS513、SW480、HT29和SW620中的表达.取生长密度达50％～60％的LS513癌细胞转染pSUPER-siRNA NC或pSUPER-siRNA Skp2,分别记为siRNA NC组和siRNA Skp2组,另取未转染LS513癌细胞(LS513组).转染或培养24小时后,CCK-8法检测细胞增殖活性;Transwell小室法检测细胞迁移侵袭能力;裸鼠成瘤实验检测细胞在动物体内成瘤能力;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中Skp2、p27、p21、p57和CKS1蛋白表达水平.结果 与癌旁组织、CCD841CoN细胞相比,CRC组织、LS513、SW480、HT29和SW620癌细胞中Skp2 mRNA和蛋白表达水平显著升高,p27 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05).与LS513组、siRNA NC组相比,siRNA Skp2组细胞Skp2、CKS1蛋白表达水平、细胞增殖、迁移、侵袭及动物体内成瘤能力显著降低(P<0.05),p27、p21、p57蛋白表达水平显著升高(P<0.05).结论 Skp2/p27轴参与CRC发生发展,干扰Skp2可增高CRC细胞中p27等抑癌蛋白表达,降低CKS1蛋白表达,抑制CRC细胞生长及迁移侵袭.