目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) CCAT1对膀胱癌细胞增殖、迁移和耐药的影响及其机制。方法:选取2019年6月到2021年6月新乡市中心医院收治的71例膀胱癌标本作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织lncRNA CCAT1表达水平。采用浓度梯度递增法建立顺铂耐药细胞株T24/顺铂(DDP)，分别采用对照lncRNA和lncRNA CCAT1敲降慢病毒感染T24和T24/DDP细胞系，分别为T24/对照组，T24/CCAT1 KD组，T24/DDP对照组和T24/DDP CCAT1 KD组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析细胞的增殖能力；采用划痕实验和Transwell实验分析细胞的迁移能力；采用流式细胞术分析细胞的耐药能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA CCAT1靶基因，采用荧光定量PCR分析靶基因表达水平，组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织中lncRNA CCAT1表达水平(1.03±0.18)明显低于膀胱癌组织(2.78±0.48)，差异有统计学意义( t＝28.341， P<0.05)。T24-对照组细胞24、48、72 h吸光度值(0.92±0.03、1.49±0.06、2.00±0.03)明显高于T24-CCAT1 KD组(0.70±0.06、1.17±0.04、1.56±0.10)，差异均有统计学意义( F＝3.108， P<0.05)。T24-对照组细胞划痕愈合率[(87.75±3.50)%]明显高于T24-CCAT1 KD组[(1.03±0.18)%]，差异均有统计学意义( t＝8.555， P<0.05)。T24-对照组细胞迁移数量[(123.25±17.08)个]明显高于T24-CCAT1 KD组[(90.75±11.32)个]，差异均有统计学意义( t＝3.172， P<0.05)。T24/DDP对照组经顺铂处理后24、48、72 h吸光度值(0.73±0.09、1.27±0.10、1.84±0.12)明显高于T24/DDP CCAT1 KD组细胞(0.52±0.03、0.91±0.03、1.36±0.04)，差异均有统计学意义( F＝4.094， P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示lncRNA CCAT1是微小RNA(miR)-490-3p的海绵。T24/对照组细胞miR-490-3p表达水平(1.21±0.10)明显低于T24/CCAT1 KD组细胞(2.30±0.20)，差异有统计学意义( t＝9.699， P<0.05)。 结论:lncRNA CCAT1在膀胱癌中呈高表达，通过miR-490-3p调节着膀胱癌细胞的增殖、迁移和耐药等过程。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录物2（CCAT2）在宫颈癌（CC）患者血清中的表达水平及辅助诊断价值。方法:收集2016年1月至2017年6月南通市肿瘤医院确诊的100例CC患者、60例宫颈上皮内瘤变（CIN）患者、80名健康者的血清标本。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）的方法分别检测CC患者及对应的术后患者、CIN患者及健康对照者血清CCAT2的表达水平，分析其与临床病理特征和CC传统辅助诊断指标糖类抗原125（CA125）、鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）之间的相关性，用受试者工作特征（ROC）曲线评价CCAT2对宫颈癌的辅助诊断价值。结果:宫颈癌患者、术后患者、CIN患者和健康对照者血清CCAT2的相对表达量分别为1.689（0.616，4.776）、1.018（0.227，3.328）、0.815（0.453，1.266）和0.740（0.271，1.670）。宫颈癌患者CCAT2的相对表达量显著高于术后患者、CIN患者和健康对照者，差异有统计学意义（ t=6.999、8.193、9.345， P<0.001）。CIN患者与健康对照者CCAT2的相对表达量差异无统计学意义（ t=0.327， P>0.05）。宫颈癌患者血清CCAT2相对表达量在不同年龄[1.636（1.000，2.370），1.705（1.095，2.243）（χ 2=0.137， P=0.712）]、绝经期与否[1.672（1.059，2.342），1.659（1.068，2.298）（χ 2=0.000， P=1.000）]差异无统计学意义，在不同肿瘤大小[1.189（0.916，1.725），2.019（1.537，2.497）（χ 2=17.508， P=0.000）]、国际妇产科联合会（FIGO）分期[0.993（0.779，1.266），2.056（1.547，2.549），3.987（3.699，4.275）（χ 2=36.075， P=0.000）]、淋巴结转移与否[1.434（1.007，2.251），2.019（1.731，3.098）（χ 2=8.634， P=0.003）]中的差异有统计学意义。宫颈癌患者血清CCAT2相对表达量与CA125之间无相关性（ r2=0.003， P=0.563），与SCC之间有相关性（ r2=0.128， P=0.000）。用ROC曲线分析血清CCAT2、CA125及SCC对宫颈癌患者的诊断效能，宫颈癌患者与CIN患者比较时，其曲线下面积分别为0.890、0.549、0.744；宫颈癌患者与健康者比较时，其曲线下面积分别为0.857、0.650、0.758。 结论:宫颈癌患者血清CCAT2含量显著高于宫颈癌术后患者、CIN患者和健康对照者，血清CCAT2可能成为宫颈癌的一个重要的诊断及预后标志物。

目的:观察结肠癌相关转录因子1(CCAT1)在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响。方法:收集2017年8月至2019年8月河南省人民医院手术摘除的102例非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析非小细胞肺癌组织和癌旁组织中CCAT1表达水平。采用RNA干扰技术在A549细胞(购自中国科学院上海细胞库)建立CCAT1敲降稳定细胞株和对照细胞株，命名为CCAT1 KD组和对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)测定两组细胞增殖；采用Transwell分析两组细胞迁移；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞增殖和迁移相关蛋白的表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:与癌旁组织CCAT1水平(1.26±0.28)比较，非小细胞肺癌组织中CCAT1水平(3.47±0.31)显著增加，差异有统计学意义( t＝3.091， P<0.05)。与对照组A549细胞CCAT1表达水平(1.09±0.15)比较，CCAT1 KD组细胞CCAT1表达水平(0.37±0.09)显著下调，差异有统计学意义( t＝4.100， P<0.05)。与对照组细胞吸光度( A)值(1.84±0.26)比较，CCAT1 KD组细胞 A值(0.98±0.14)显著下降，差异有统计学意义( t＝3.719， P<0.05)。与对照组细胞EdU阳性率[(70.26±8.92)%]比较，CCAT1 KD组细胞EdU阳性率[(30.41±5.89)%]显著下降，差异有统计学意义( t＝3.201， P<0.05)。与对照组细胞迁移数量[(128.44±9.17)个]比较，CCAT1 KD组细胞迁移数量[(59.19±8.01)个]显著下降，差异有统计学意义( t＝3.172， P<0.05)。与对照组细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)和黏着斑激酶(FAK)表达水平(1.18±0.16、1.21±0.20、1.08±0.19)比较，CCAT1 KD组细胞Ki-67、PCNA和FAK表达水平(0.25±0.14、0.38±0.09、0.31±0.13)显著下降，差异有统计学意义( t＝3.207、3.801、3.510， P<0.05)。 结论:CCAT1在非小细胞肺癌组织中呈高表达，并参与非小细胞肺癌的增殖和迁移。

目的:探究鼻咽癌来源外泌体中含有的长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录本（CCAT2）对鼻咽癌血管生成的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分为鼻咽癌细胞（CNE2）上清共培组与正常鼻咽上皮细胞（NP69）上清共培组，CCK8法检测两组HUVEC增殖能力。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测CNE2上清与HUVEC共培后lncRNA CCAT2的表达。将HUVEC分为鼻咽癌患者血清共培组、健康人血清共培组，CCK8法检测两组HUVEC增殖能力，qRT-PCR检测两组HUVEC中lncRNA CCAT2的表达。超速离心法提取CNE2、NP69细胞上清外泌体。将HUVEC分为CNE2上清外泌体共培组与NP69细胞上清外泌体共培组，CCK8等血管生成实验比较两组HUVEC功能差异。在HUVEC中转染短发夹RNA（shRNA）抑制lncRNA CCAT2表达，CCK8等血管生成实验比较不同表达lncRNA CCAT2的HUVEC功能差异。通过shRNA转染CNE2，提取上清外泌体RNA，qRT-PCR检测不同表达lncRNA CCAT2的CNE2上清外泌体中lncRNA CCAT2的差异，将上述两组外泌体分别与HUVEC共培，qRT-PCR检测共培后HUVEC中lncRNA CCAT2的表达差异，同时迁移实验检测HUVEC的功能差异。用GraphPad Prism 8作图及统计分析。结果:与NP69上清共培组相比，CNE2上清共培组HUVEC增殖能力较高。CNE2上清与HUVEC共培48 h与0 h相比，lncRNA CCAT2表达较高（1比1.40±0.01， t=42.43， P=0.000）。与健康人血清共培组相比，鼻咽癌患者血清共培组HUVEC增殖能力较高，48 h lncRNA CCAT2表达较高（1比1.25±0.03， t=14.43， P=0.001）。与NP69细胞上清外泌体共培组相比，CNE2上清外泌体共培组HUVEC增殖能力较高，迁移实验中穿过小室的细胞数较多（53.12±2.13比154.74±4.17， t=37.73， P=0.000），小管生成实验中结点数较多（10.72±1.02比53.65±3.21， t=22.63， P=0.000）。与sh-NC组相比，sh-CCAT2组HUVEC增殖能力较低，迁移实验中穿过小室的细胞数较少（401.34±22.15比138.25±6.85， t=23.19， P=0.000），裸鼠皮下基质胶栓塞实验中微血管计数较少（41.00±0.32比27.15±0.23， t=61.53， P=0.000）。与正常表达lncRNA CCAT2的CNE2上清外泌体（sh-NC外泌体组）相比，低表达lncRNA CCAT2的CNE2上清外泌体（sh-CCAT2外泌体组）中lncRNA CCAT2表达较少（1比0.65±0.02， t=30.31， P=0.000）。与sh-NC外泌体组相比，sh-CCAT2外泌体组HUVEC中lncRNA CCAT2的表达较低（1比0.73±0.01， t=46.77， P=0.000），sh-CCAT2外泌体组迁移实验中穿过小室的细胞数较少（389.73±26.34比190.54±8.36， t=12.47， P=0.001）。 结论:鼻咽癌来源外泌体中含有的lncRNA CCAT2促进鼻咽癌血管生成。

Background::Long non-coding RNA colon cancer-associated transcript 1 (CCAT1) is involved in transforming multiple cancers into malignant cancer types. Previous studies underlining the mechanisms of the functions of CCAT1 primarily focused on its decoy for miRNAs (micro RNAs). However, the regulatory mechanism of CCAT1–protein interaction associated with tumor metastasis is still largely unknown. The present study aimed to identify proteome-wide CCAT1 partners and explored the CCAT1–protein interaction mediated tumor metastasis.Methods::CCAT1–proteins complexes were purified and identified using RNA antisense purification coupled with the mass spectrometry (RAP-MS) method. The database for annotation, visualization, and integrated discovery and database for eukaryotic RNA binding proteins (EuRBPDB) websites were used to bioinformatic analyzing CCAT1 binding proteins. RNA pull-down and RNA immunoprecipitation were used to validate CCAT1–Vimentin interaction. Transwell assay was used to evaluate the migration and invasion abilities of HeLa cells.Results::RAP-MS method worked well by culturing cells with nucleoside analog 4-thiouridine, and cross-linking was performed using 365 nm wavelength ultraviolet. There were 631 proteins identified, out of which about 60% were RNA binding proteins recorded by the EuRBPDB database. Vimentin was one of the CCAT1 binding proteins and participated in the tumor metastasis pathway. Knocked down vimetin ( VIM) and rescued the downregulation by overexpressing CCAT1 demonstrated that CCAT1 could enhance tumor migration and invasion abilities by stabilizing Vimentin protein. Conclusion::CCAT1 may bind with and stabilize Vimentin protein, thus enhancing cancer cell migration and invasion abilities.

目的:探讨肺腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)、锌指结合蛋白1(ZEB1)表达及与患者临床病理参数和预后的关系.方法:选取2017年2月至2020年2月期间我院收治的138例肺腺癌患者.取手术切除的癌组织以及癌旁组织(距离癌组织边缘2cm以上).采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织及癌旁组织中lncRNACCAT1、ZEB1 mRNA表达.分析癌组织lncRNACCAT1、ZEB1 mRNA表达之间的相关性及与肺腺癌患者临床病理参数的关系.Kaplan-Meier法分析lncRNA CCAT1(高低表达)、ZEB1 mRNA(高低表达)肺腺癌患者的预后.多因素Cox比例风险模型分析影响肺腺癌患者预后因素.结果:肺腺癌癌组织lncRNACCAT1、ZEB1 mRNA相对表达量分别高于癌旁组织(P＜0.05).肺腺癌患者癌组织lncR-NA CCAT1与ZEB1mRNA相对表达量呈正相关(r=0.532,P＜0.05).肿瘤TNM分期Ⅲa期、淋巴结转移肺腺癌患者lncRNA CCAT1、ZEB1 mRNA相对表达量高于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P＜0.05).lncRNA CCAT1高表达组和低表达组3年总生存例数分别为39(60.00)、65(92.86);ZEB1 mRNA高表达组和低表达组3年总生存例数分别为41(62.12)、63(91.30).与lncRNA CCAT1低表达组、ZEB1 mRNA低表达组相比,lncRNACCAT1高表达组、ZEB1 mRNA高表达组3年累积生存率更低(P＜0.05).lncRNA CCAT1高表达、ZEB1 mRNA高表达以及淋巴结转移是肺腺癌患者不良预后的独立危险因素(P＜0.05).结论:肺腺癌组织中lncRNACCAT1、ZEB1 mRNA表达上调,两者表达上调与淋巴结转移有关,且可导致不良预后,有望成为评估肺腺癌患者预后的潜在标志物.

目的 探讨lncRNA CCAT1通过miR-490-3p对膀胱癌细胞化疗耐药的影响.方法 构建膀胱癌细胞T24耐顺铂细胞株.荧光素酶报告实验检测lncRNA CCAT1与miR-490-3p的结合、miR-490-3p与KDM7A mRNA-UTR的结合.敲低lncRNA CCAT1或敲低KDM7A或过表达miR-490-3p后,检测耐顺铂细胞株的凋亡水平.结果 顺铂处理后,相对于对照膀胱癌细胞系T24,膀胱癌顺铂耐药细胞系T24的凋亡水平显著下降(P＜0.05).敲低LncRNA CCAT1后顺铂使膀胱癌顺铂耐药细胞系T24的凋亡水平显著上升(P＜0.05).过表达miR-490-3p后,相比于LncRNA CCAT1突变型,荧光素酶报告实验发现LncRNA CCAT1野生型的荧光素酶活性下降(P＜0.05).过表达miR-490-3p后,顺铂使膀胱癌顺铂耐药细胞系T24的凋亡水平显著上升(P＜0.05).过表达miR-490-3p后,相比于KDM7A-3 UTR突变型,荧光素酶报告实验发现KDM7A-3UTR野生型的荧光素酶活性下降(P＜0.05).过表达miR-490-3p后,膀胱癌顺铂耐药细胞系T24中KDM7A的mRNA和蛋白表达水平均下降(P＜0.05);敲低miR-490-3p后,膀胱癌顺铂耐药细胞系T24中KDM7A的mRNA和蛋白表达水平均上升(P＜0.05).敲低KDM7A后,顺铂使膀胱癌顺铂耐药细胞系T24的凋亡水平显著上升(P＜0.05).结论 lncRNA CCAT1/miR-490-3p/KDM7A促进了膀胱癌细胞对化疗药物的抵抗.

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)靶向miR-375-3p通过线粒体途径诱导人口腔癌SAS细胞凋亡的作用.方法:人口腔癌SAS细胞随机分为空白组、CCAT1下调组、CCAT1上调组、CCAT1下调对照组、CCAT1上调对照组、miR-375-3p下调组、miR-375-3p上调组、miR-375-3p下调对照组和miR-375-3p上调对照组.转染48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-375-3p表达、线粒体凋亡通路相关的基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达;免疫印迹检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白表达;双荧光素酶报告实验分析CCAT1与miR-375-3p的靶向关系.结果:与空白组和CCAT1下调对照组比较,CCAT1下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低;与空白组和CCAT1上调对照组比,CCAT1上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p下调对照组比较,miR-375-3p下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p上调对照组比较,miR-375-3p上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低.双荧光素酶实验结果提示CCAT1可靶向调控miR-375-3p.结论:CCAT1可抑制人口腔癌SAS细胞凋亡,推测是通过靶向抑制miR-375-3p的表达,调控线粒体凋亡通路相关基因及蛋白的表达来实现的.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)基因单核苷酸多态性(SNP)与原发性肝癌遗传易感性的相关性,为原发性肝癌的早诊断、早预防、开展肝癌遗传易感机制研究提供依据.方法 选取41例原发性肝癌患者和83例健康志愿者分别作为病例组和对照组,对浆细胞瘤变体易位基因1(PVT1)、结肠癌相关转录本1(CCAT1)、结肠癌相关转录本2(CCAT2)、肿瘤易感性8(CASC8)、前列腺癌相关非编码RNA1(PRNCR1)中的13个SNP位点进行基因分型,比较两组患者的基因型分布.结果 病例组与对照组lncRNAPVT1基因RS2392885位点的基因型分布比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其他位点基因型分布比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).lncRNA PVT1基因上RS2392885位点的基因型为CC、CT和TT型,其中病例组各基因型占比分别为12.2％、68.3％和19.5％,对照组各基因型占比分别为19.3％、42.2％和38.6％.结论 lncRNA PVT1中的RS2392885位点的基因型可能与原发性肝癌的遗传易感性有关.