目的 探讨环状RNA HIPK3(circHIPK3)在鼻咽癌(NPC)细胞迁移和侵袭中的作用及其分子机制.方法 检索公共数据库,运用高通量基因表达数据库(GEO)分析NPC组织及非癌组织中circHIPK3表达水平;合成cir-cHIPK3-siRNA转染NPC 5-8F细胞;采用RT-qPCR、Western blot、细胞划痕、CCK-8和Transwell等实验方法,研究确定circHIPK3-siRNA干扰效果后,检测它对细胞增殖、迁移和侵袭及潜在下游基因CDH1、CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3表达的影响.运用转录组测序技术分析5-8F细胞cir-cHIPK3-siRNA干扰后显著差异表达的基因,以期找到介导circHIPK3促癌作用的关键基因.结果 与非癌组织相比,NPC组织中circHIPK3表达明显增加(P<0.05).使用siR-NA特异性敲低5-8F细胞中circHIPK3的表达后,与对照组相比,si-circHIPK3组细胞增殖速率降低(P<0.05),si-cir-cHIPK3组细胞划痕闭合率降低(P<0.01),同时si-cir-cHIPK3组细胞迁移和侵袭的细胞数目减少(P<0.05).此外,与对照组相比,si-circHIPK3组下游基因CDH1 mRNA和蛋白的表达量升高(P<0.001),CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3 mRNA和蛋白的表达量减少(P<0.05).进一步测序分析显示,circHIPK3-siRNA转染的5-8F细胞中AL645922.1、SCO2、AL136295.1和ISY1-RAB43表达上调(P<0.05),BIVM-ERCC5、FAM47E-STBD1、INO80B-WBP1、NAIP、C15orf38-AP3S2、BCL2L2-PABPN1和SMIM11B表达下调(P<0.05).结论 NPC组织中circHIPK3表达显著升高.circHIPK3通过调节E-Cadherin、N-Cadherin、MMP2、MMP9和IL-6/STAT3的表达,促进NPC细胞5-8F的增殖、迁移和侵袭.AL645922.1和BIVM-ERCC5等基因可能在circHIPK3介导的促进NPC 5-8F细胞迁移和侵袭中发挥关键作用.

The nucleotide-binding domain-and leucine-rich repeat (LRR)-containing proteins (NLRs) function as intracellular immune receptors to detect the presence of pathogen-or host-derived signals.The mechanisms of how NLRs sense their ligands remain elusive.Here we report the structure of a bacterial flagellin derivative in complex with the NLR proteins NAIP5 and NLRC4 determined by cryo-electron microscopy at 4.28 (A) resolution.The structure revealed that the flagellin derivative forms two parallel helices interacting with multiple domains including BIR1 and LRR of NAIP5.Binding to NAIP5 results in a nearly complete burial of the flagellin derivative,thus stabilizing the active conformation of NAIP5.The extreme C-terminal side of the flagellin is anchored to a sterically constrained binding pocket of NAIP5,which likely acts as a structural determinant for discrimination of different bacterial flagellins by NAIPS,a notion further supported by biochemical data.Taken together,our results shed light on the molecular mechanisms underlying NLR ligand perception.

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目的:探究长期抗阻训练通过调控细胞焦亡途径而影响骨骼肌蛋白质代谢的可能机制.方法:30只8月龄SD大鼠分为3组:基础值组(N组,n=10),干预前取材;安静对照组(C组,n=10),正常饮食32周,不运动;抗阻训练组(R组,n=10),进行30％负重(自身体重)、35°坡度、跑速15 m/min的跑台训练,每次训练4组×2个循环,隔天训练一次,共32周.干预后测试大鼠体重、瘦体重、胫骨前肌(TA)湿重;HE染色观察肌纤维形态并计算肌纤维横截面积;Western blot测试肌肉合成相关蛋白哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1),分解相关蛋白叉头状转录因子O1(FoxO1)、肌肉环状指基因1(MuRF1)、肌肉萎缩盒F基因(Atrogin1)和泛素(Ub)的表达;细胞焦亡PCR芯片筛选TA中的焦亡差异表达基因,qPCR验证芯片结果准确性;WesternBlot测试细胞焦亡关键蛋白核因子-κB(NF-κB)、接头蛋白凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、消皮素D(GSDMD)和天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1/Casp1)的表达.结果:(1)C组大鼠体重显著高于N组,R组显著低于C组;C组瘦体重及其百分含量显著低于N组,R组显著高于C组(P<0.05).(2)C组肌纤维横截面积较N组显著降低,R组较C组显著增加(P<0.05).(3)C组磷酸化4E-BP1(p-4E-BP1)蛋白含量和p-4E-BP1/4E-BP1比值显著低于N组,R组p-4E-BP1蛋白含量显著高于C组(P<0.05);C组FoxO1和Ub蛋白含量显著高于N组,R组显著低于C组,C组p-FoxO1/FoxO1比值显著低于N组,R组显著高于C组(P<0.05).(4)焦亡PCR芯片结果显示,R组较C组下调的焦亡基因数目增加.对C/N组上调的差异基因Asc,C/N组上调且在R/C组下调的差异基因核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族凋亡抑制蛋白6(Naip6)和R/C组下调的差异基因Casp1进行qPCR验证,与芯片结果一致.(5)C组NF-κB和ASC蛋白含量显著高于N组,R组Caspase1蛋白含量显著低于N组(P<0.05).结论:长期抗阻训练通过降低骨骼肌蛋白质分解而缓解增龄性肌萎缩的发展,抑制细胞焦亡可能是其机制之一.