鼠伤寒沙门菌是全世界肠胃炎的首要致病因素,也是影响儿童、免疫功能缺陷患者和老年人的致命病原体. 沙门菌可通过NLRC4 炎性小体诱导固有免疫应答,这种炎性小体已被证实在鞭毛蛋白和非鞭毛蛋白分子的系统和黏膜的识别中具有不同的作用.

本文报道1例 NLRC4基因变异导致的新生儿期发病的自身炎症反应伴婴幼儿小肠结肠炎（autoinflammation with infantile enterocolitis，AIFEC）患儿。患儿男，新生儿期发病，表现为反复发热、皮疹、肝脾大和小肠结肠炎，实验室检查显示铁蛋白、C-反应蛋白等升高，并发巨噬细胞活化综合征。抗感染治疗效果差。全外显子组测序提示 NLRC4基因c.1021G>C（p.Val341Leu）新发杂合变异，诊断AIFEC。AIFEC罕见，在新生儿期即可发病，可通过全外显子组测序明确诊断，该病目前尚无有效治疗方法。

目的:评价雷帕霉素对大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)时NOD样受体C4(NLRC4)炎症小体活性的影响。方法:清洁级健康雄性SD大鼠36只，6～8周龄，体重200～250 g，采用随机数字表法分为3组( n＝12)：对照组(C组)、VILI组和雷帕霉素组(RAPA组)。RAPA组造模前连续3 d腹腔注射雷帕霉素4 mg·kg -1·d -1，C组和VILI组给予等容量生理盐水。VILI组和RAPA组行机械通气4 h，通气参数设置：RR 80次/min，FiO 2 21%，PEEP 0 cmH 2O，I∶E 1∶1，V T 20 ml/kg。机械通气结束后采集股动脉血样行血气分析，记录PaO 2；采用ELISA法检测血清IL-1β和IL-18浓度。收集左肺支气管肺泡灌洗液(BALF)，采用ELISA法测定中性粒细胞计数及IL-1β、IL-18浓度。取肺组织，HE染色后光镜下观察病理学结果，并进行肺损伤评分，测定湿重/干重(W/D)比值，采用Western blot法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、NLRC4和caspase-1的表达，采用RT-PCR法检测NLRC4 mRNA表达。 结果:与C组比较，VILI组和RAPA组肺组织W/D比值、肺损伤评分、BALF中性粒细胞计数及血清、BALF IL-1β、IL-18浓度均升高，PaO 2下降，肺组织mTOR、NLRC4、caspase-1及NLRC4 mRNA表达上调( P<0.01)；与VILI组比较，RAPA组肺组织W/D比值、肺损伤评分、BALF中性粒细胞计数及血清、BALF IL-1β、IL-18浓度均降低，PaO 2升高，肺组织mTOR、NLRC4、caspase-1及NLRC4 mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:雷帕霉素减轻大鼠VILI的机制可能与抑制mTOR信号通路激活，进而抑制NLRC4炎症小体活性有关。

目的:对1型糖尿病（T1DM）患者含NLR家族CARD域蛋白4（NLRC4）基因外显子及外显子内含子交界区的罕见变异进行鉴定，并探讨其对基因功能的影响。方法:选取2017年8月到2020年9月中南大学湘雅二医院代谢内分泌科508例T1DM患者作为病例组，男264例，女244例，年龄［ M（ Q1， Q3）］为27（11，43）岁。同时选取同期体检科527名健康对照者，男290名，女237名，年龄［ M（ Q1， Q3）］为47（36，60）岁。对T1DM患者和健康对照者的NLRC4基因的外显子区域进行捕获测序，并进行一代测序验证。构建NLRC4基因野生型和突变型质粒，转染293T细胞，采用免疫印迹试验（WB）检测NLRC4蛋白表达量以及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶前体（procaspase-1）切割产物含量。在转染野生型或突变型NLRC4质粒的293T细胞中加入放线菌酮（CHX），检测NLRC4蛋白降解情况。使用免疫荧光检测NLRC4蛋白质的定位。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清白细胞介素（IL）-1β浓度。 结果:测序结果显示，4例患者及2名健康对照者NLRC4基因的3号外显子存在杂合变异c.208C>T；2例患者4号外显子存在杂合变异c.1564T>C，1例患者4号外显子存在c.1219G>C；这3种变异可能为T1DM的致病性变异。NLRC4野生型和c.208>T、c.1564T>C、c.1219G>C突变型质粒转染的293T细胞中，NLRC4蛋白表达水平、降解速率、定位以及procaspase-1的切割产物含量无明显改变；但转染c.1219G>C、c.208C>T突变型质粒的293T细胞分泌的IL-1β浓度［ M（ Q1， Q3）］分别为15.25（12.98，17.52）、15.44（13.81，17.07）ng/L，均低于野生型质粒的18.70（16.59，20.81）ng/L（ P=0.020、0.010）。 结论:NLRC4基因外显子罕见变异c.208C>T、c.1564T>C和c.1219G>C可能不改变蛋白质的表达水平、蛋白质的降解及定位，但c.208C>T和c.1219G>C错义突变可能抑制了炎症因子IL-1β的产生，从而对基因功能产生影响。

目的:探讨瘦素预处理对机械通气肺损伤(VILI)大鼠NLRC4炎症小体表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠36只，体质量200～250 g，6～8周龄，采用随机数字表法分为3组：对照组、VILI模型组和瘦素组，每组12只。对照组麻醉后气管插管并保留自主呼吸；VILI模型组连接小动物呼吸机行机械通气，潮气量40 ml/kg，容量控制通气4 h；瘦素组气管插管后腹腔注射外源性重组瘦素50 μg/kg，应用40 ml/kg潮气量行呼吸机机械通气4 h。机械通气结束时采集股动脉血样，进行动脉血气分析，并记录PaO 2。处死大鼠，收集剩余血液和支气管肺泡灌洗液(BALF)，离心后用酶联免疫吸附试验检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的浓度。取右肺上叶组织行苏木素-伊红染色，光镜下观察病理学结果，并行病理损伤评分；取右肺中叶组织计算湿/干重比值；取右肺下叶组织采用蛋白质印迹法检测caspase-1、NLRC4的表达水平。 结果:与对照组相比，VILI模型组和瘦素组肺损伤评分、湿/干重比值、血清中IL-18和IL-1β、BALF中IL-18和IL-1β、肺组织中caspase-1和NLRC4表达明显升高( P值均<0.01)，PaO 2明显下降( P<0.01)；与VILI模型组比较，瘦素组肺损伤评分、湿/干重比值、血清中IL-18和IL-1β、BALF中IL-18和IL-1β、肺组织中caspase-1和NLRC4蛋白表达量降低( P值均<0.05)，PaO 2升高( P<0.05)。 结论:外源性瘦素预处理可明显减轻大鼠VILI，其机制可能与抑制NLRC4炎症小体活化、减轻肺组织炎症反应有关。

目的:研究基于细胞焦亡相关基因（PRGs）的肝细胞癌（HCC）预后模型的构建。方法:从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中获取HCC患者数据集，通过应用单变量Cox和最小绝对值选择与收缩算子（LASSO）回归分析构建预后模型。根据中位风险评分，将TCGA数据集中HCC患者分为高风险组和低风险组。Kaplan-Meier生存分析、受试者操作特征（ROC）曲线、单变量和多变量Cox分析、列线图用于评估预后模型的预测能力。并对两组间差异表达基因进行功能富集分析和免疫浸润分析。最后，应用基因表达综合数据库中2个HCC数据集（GSE76427和GSE54236）对模型的预后价值进行外部验证。对数据进行单变量和多变量Cox回归分析或Wilcoxon检验。结果:从TCGA数据库中获取的HCC患者数据集经过筛选后，共纳入366例HCC患者。通过单变量Cox回归分析和LASSO回归分析，建立了一个7个基因（CASP8、GPX4、GSDME、NLRC4、NLRP6、NOD2和SCAF11）相关的HCC预后模型。并根据中位风险评分，可将366例患者平均分为高风险组和低风险组。Kaplan-Meier生存分析显示TCGA数据集、GSE76427和GSE54236数据集中高风险组与低风险组患者的生存时间差异存在统计学意义（中位总生存时间分别为1 149 d与2 131 d、4.8年与6.3年和20个月与28个月， P值分别为0.000 8、0.034 0和0.001 8）。ROC曲线在TCGA数据集及2个外部验证数据集中均显示出良好的生存预测价值。1、2年和3年ROC曲线下面积分别为0.719、0.650和0.657。多变量Cox回归分析表明，预后模型的风险评分是HCC患者总生存时间独立的预测因素。根据模型风险评分建立的列线图可有效地预测HCC患者的生存概率。功能富集分析和免疫浸润分析表明高风险组免疫状态下降明显。 结论:基于7个PRGs建立的预后模型可有效预测HCC患者的预后。

目的:分析肺炎支原体诱导的皮疹和黏膜炎（MIRM）的临床特征及预后。方法:调阅中山大学附属第一医院2004年11月至2021年5月出院诊断为多形红斑/重症多形红斑或Stevens-Johnson综合征患者的资料，以MIRM诊断标准筛选出其中的MIRM患者，且排除了其他病因，分析其临床表现、实验室和辅助检查、治疗和预后。结果:8例符合MIRM诊断，其中男4例，女4例，发病年龄4 ~ 30（15.63 ± 9.16）岁。8例均有发热，其中5例有咳嗽、咽痛等上呼吸道前驱症状。所有患者均有口腔黏膜损害，其中5例有口唇血痂；7例有眼损害，表现为结膜充血及分泌物增多。所有患者均有皮损，表现为靶形损害5例、水疱4例。所有患者血清学肺炎支原体IgM均阳性。1例反复出现干咳等上呼吸道感染，每次发作与肺炎支原体感染密切相关，取外周血行全外显子测序显示，NLRC4和IRGM杂合突变。3例患者行皮损组织病理检查，符合多形红斑。7例系统使用糖皮质激素治疗，6例静脉注射免疫球蛋白，5例阿奇霉素，5例使用阿昔洛韦或伐昔洛韦或利巴韦林。平均随访2.9年，3例痊愈，1例失明，1例反复出现干咳和口腔溃疡及四肢皮疹，余3例分别出现眼睑板腺功能障碍、泪点狭窄及角膜上皮损害等眼部损害。结论:MIRM好发于儿童及年轻成人，多有发热、咽痛、咳嗽等前驱症状，黏膜损害明显，部分有皮肤靶形损害。多数患者单次发病后痊愈，个别反复发作者可能与自身炎症相关基因和感染相关基因突变有关。

炎症小体是细胞内的多蛋白复合物，在感知外部微生物入侵和内在无菌应激信号时被激活。但是炎症小体是如何被激活的，以及炎症体结构与功能之间存在怎样的联系一直未被阐明，NLRC4结构及其激活机制的研究填补了这些空白。NLRC4炎症小体结构和激活机制方面的研究取得了新的进展，它在全身炎症和程序性细胞死亡方面起重要作用，这为NLRC4相关炎症性疾病如代谢性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病的研究提供了重要线索。

目的:评价蛋白激酶C(PKC)-δ在大鼠机械通气相关性肺损伤中的作用及其与NOD样受体包含CARD结构域蛋白4(NLRC4)的关系。方法:清洁级健康雄性SD大鼠36只，6～8周龄，体重200～250 g，采用随机数字表法分为3组( n＝12)：对照组(C组)、机械通气相关性肺损伤组(V组)和机械通气相关性肺损伤＋KAI 9803组(VK组)。气管切开后置入气管导管行机械通气，设置V T 40 ml/kg，通气频率60次/min，I∶E为1∶2，吸入空气。C组气管插管后不行机械通气。气管插管完成后即刻VK组于气管内滴注PKC-δ特异性抑制剂KAI 9803 200 μg/kg，余2组滴入等量PBS。机械通气4 h时，股动脉采血行血气分析，记录PaO 2。开胸取肺组织，行左侧肺灌洗，收集肺泡灌洗液。光镜下观察肺组织病理学结果并行肺损伤评分；采用ELISA法检测肺泡灌洗液IL-1β和IL-18浓度，Western blot法检测右肺下叶NLRC4、caspase-1和PKC-δ表达，RT-PCR法检测右肺下叶NLRC4 mRNA表达，计算右肺中叶湿重/干重(W/D)比值。 结果:与C组比较，余2组肺损伤评分和W/D比值升高，PaO 2降低，肺泡灌洗液IL-18和IL-1β浓度升高，肺组织NLRC4、caspase-1和NLRC4 mRNA表达上调，V组肺组织PKC-δ表达上调( P<0.01)，肺泡腔内可见大量水肿液渗出并伴炎性细胞浸润；与V组比较，VK组肺损伤评分和W/D比值降低，PaO 2升高，肺泡灌洗液IL-18和IL-1β浓度降低，肺组织NLRC4、caspase-1、PKC-δ和NLRC4 mRNA表达下调( P<0.05)，肺泡腔液体渗出和炎性细胞浸润程度减轻。 结论:PKC-δ参与了大鼠机械通气相关性肺损伤的过程，与抑制NLRC4表达有关。

目的:探讨抑制NLRC5调控CD4 ＋T细胞功能对小鼠移植物的免疫保护作用。 方法:体外培养、纯化和富集小鼠(购自中山大学动物实验中心)脾脏来源CD4 ＋T细胞，转染短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体NLRC5-RNA干扰(RNAi)-绿色荧光蛋白(GFP)；随机分为3组，分别为对照组、T细胞组和NLRC5-RNAi组，每组5只。建立小鼠胰岛移植和皮肤移植模型，术前回输已转染慢病毒的CD4 ＋T细胞，术后观察各组胰岛和皮肤移植物生存情况，并于术后第7天检测移植胰岛和移植皮肤外周血细胞因子白细胞介素(IL)-10和干扰素(IFN)-γ的表达水平，流式细胞术检测小鼠脾细胞内淋巴细胞亚群分化情况。组间差异采用 t检验。 结果:移植术后NLRC5-RNAi组胰岛移植物葡萄糖耐受更好。NLRC5-RNAi组胰岛中位生存时间[(19.0±3.4) d]较对照组[(11.6±1.9) d， t＝5.156， P<0.01]和T细胞组[(10.0±1.4) d， t＝4.151, P<0.01]延长，差异有统计学意义。NLRC5-RNAi组皮肤移植物的中位生存时间[(15.4±3.8) d]较对照组[(8.0±0.9) d， t＝3.375, P<0.05]和T细胞组[(7.8±0.8) d， t＝3.848, P<0.05]延长，差异有统计学意义。外周血酶联免疫吸附试验(ELISA)检测提示胰岛移植NLRC5-RNAi组IL-10表达量[(344.0±4.1) ng/L]较其他组升高( t＝124.141， P<0.01)，IFN-γ表达量[(85.1±6.6) ng/L]较其他组降低( t＝7.633， P<0.05)，差异有统计学意义；皮肤移植NLRC5-RNAi组IL-10表达量[(275.9±12.5) ng/L]较其他组升高；IFN-γ表达量[(96.6±2.5) ng/L]较其他组降低，差异有统计学意义( t＝7.490， P<0.01)；流式细胞术提示胰岛移植NLRC5-RNAi组脾脏细胞中辅助性T细胞(Th2)含量[(0.190±0.053)%]较其他组升高( t＝5.220， P<0.05)，Th1含量[(0.810±0.036)%]较其他组降低( t＝6.219， P<0.05)；皮肤移植NLRC5-RNAi组Th2含量[(0.130±0.012)%]较其他组升高( t＝21.060， P<0.01)，Th1含量[(0.180±0.026)%]较其他组降低，差异有统计学意义( t＝9.248， P<0.05)。 结论:抑制NLRC5基因表达后，CD4 ＋T细胞分化偏向Th2，表达Th2型细胞因子增多，一定程度上延长了移植物存活时间，对移植免疫耐受的诱导具有积极意义。