目的:探讨环状RNA circHIPK3对神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)细胞中的表达及其在NB进度中的作用。方法:采用实时定量PCR(real time quantitative PCR，qRT-PCR)检测人NB细胞系SH-SY5Y、SK-N-SH和胚肾细胞系HEK-293中circHIPK3的表达，并选取circHIPK3表达量相对更高的NB细胞进行circHIPK3的功能实验。用干扰小RNA转染NB细胞，并分为circHIPK3敲降组(si-circHIPK3组)、阴性对照组(si-NC组)。通过CCK-8、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验检测circHIPK3对NB细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果:circHIPK3在人NB细胞系SH-SY5Y和SK-N-SH中的表达量分别为6.06±0.11和4.94±0.26，均显著高于正常人胚肾细胞HEK-293中的1.00±0.01，且差异均有统计学意义( P均<0.05)。最终选取SH-SY5Y进行后续试验。CCK-8实验结果显示，si-NC组0、24、48、72、96 h时OD值分别为0.33±0.01、0.55±0.01、0.76±0.01、1.22±0.02和1.55±0.02，si-circHIPK3组各相同时间点OD值分别为0.33±0.02、0.44±0.01、0.51±0.01、0.75±0.01和0.85±0.01，组间比较，除0 h时外，其余时间点差异均有统计学意义( P均<0.01)。平板克隆形成实验结果显示，si-NC组的细胞克隆数为(112.67±5.51)个，si-circHIPK3组为(55.33±4.16)个，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。划痕实验结果显示，si-NC组伤口愈合率为(4.0±0.1)%，si-circHIPK3组为(54.0±0.2)%，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。Transwell侵袭结果显示，si-NC组穿膜细胞数为(126.67±8.62)个，si-circHIPK3组为(72.00±6.56)个，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:circHIPK3在NB细胞中高表达，沉默circHIPK3可以抑制NB细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨circhipk3在热射病神经损伤中小胶质细胞的表达情况，初步分析circhipk3对热射病神经损伤中小胶质细胞极化的影响。方法:随机（随机数字法）将小鼠分为对照组及热射病0.8 h组 (HS 0.8 )，热射病8 h组（HS 8），热射病24 h组（HS 24）。通过建立小鼠热射病（HS）模型，取得热损伤脑组织，分离小胶质细胞并提取RNA。定量PCR法检测小胶质细胞中M1和M2标志分子，评估小胶质细胞极化方向及类型。检测circhipk3在热射病神经损伤中小胶质细胞的表达水平，通过干预circhipk3在小胶质细胞中的表达，进一步阐明circhipk3对小胶质细胞极化的影响。结果:HS 8组在CD45、CD11-b表达较正常组明显上升[（4.41±0.18） vs.（1±0.15）， P=0.000]、[（3.47±0.19） vs.（1±0.15）， P=0.000]，而HS 24组的CD45、CD11-b较HS 8组明显下降[（1.34±0.15） vs.（4.41±0.18）， P=0.000]、[（1.38±0.21） vs.（3.47±0.19）， P=0.001]。同时HS 8组在CD206、FIZZ、Arg1表达较对照组开始上升[（1.59±0.16） vs.（1±0.12）， P=0.014]、[（1.62±0.15） vs.（1±0.15）， P=0.002]、[（2.23±0.28） vs.（1±0.19）， P=0.004]，而HS 24组的CD206、FIZZ、Arg1较对照组显著升高[（2.67±0.20） vs.（1±0.12）， P=0.002]、[（2.19±0.15） vs.（1±0.15）， P=0.000]、[（3.04±0.18） vs.（1±0.19）， P=0.001]；circhipk3 mimicis显著增高Arg1表达[（7.26±0.06） vs.（3.86±0.06）， P=0.000]；同时circhipk3 inhibitor促进CD45及HO-1表达[（2.96±0.03） vs.（1.63±0.09）， P=0.000]、[（2.52±0.10） vs.（1.30±0.02）， P=0.000]。 结论:热射病早期神经损伤中小胶质细胞以M1型为主，HO-1可能是小胶质细胞M1型标记物之一，circhipk3在小胶质细胞中高表达主要促进其向M2型转化。

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系.方法 体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平.构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞.将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平.通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA).结果 与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.0001).测序比对结果正确,成功构建cir-cHIPK3过表达慢病毒载体.感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞.RT-qPCR结果显示,OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01).Western blot结果显示,在OGD/R培养条件下,OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05).蛋白翻译分析显示,cir-cHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽.miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p.结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能.

目的:探索四维超声联合血清环状RNA同源域相互作用激酶3(circHIPK3)、环状RNA0003416(circ0003416)诊断胎儿先天性心脏病(CHD)价值.方法:收集2021年11月—2023年11月本院接诊的胎儿均疑似CHD孕妇324例临床资料,以产后随访或引产病理解剖结果为金标准,分为CHD组(43例)、非CHD的对照组(281例).收集两组一般资料,采用实时荧光定量PCR法检测血清circHIPK3、circ0003416水平;记录四维超声检测结果,Kappa行一致性检验;受试者工作特征(ROC)曲线分析四维超声联合血清circHIPK3、circ0003416对CHD的诊断价值.结果:CHD 组血清 circHIPK3(1.41±0.18)高于对照组(1.19±0.13),血清 circ0003416(0.82±0.11)低于对照组(1.03±0.14)(均P＜0.05);四维超声诊断CHD与最终确诊结果的一致性较好(Kappa=0.809,P＜0.001);四维超声、血清circHIPK3、circ0003416诊断CHD的曲线下面积(AUC)均较高,但联合诊断AUC(0.976)及敏感度(97.7％)最高(P＜0.001).结论:CHD母体血清circHIPK3升高、血清circ0003416水平降低,四维超声联合血清circHIPK3、circ0003416水平对CHD的诊断价值较高,可为CHD临床筛查提供参考.

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)在急性胰腺炎(AP)患者中的表达及与病情严重程度和预后的相关性.方法 选取2020年11月至2021年11月我院126例AP患者为AP组,其中轻度38例,中度43例,重度45例;90例正常健康体检者为对照组.根据AP患者入院后28 d的生存情况分为生存组(n=86)和死亡组(n=40).采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测circHIPK3的表达水平.Pearson法分析circHIPK3表达水平与A-PACHE Ⅱ评分及Ranson评分的相关性;Logistic回归分析影响AP患者预后的危险因素.结果 AP组的circHIPK3、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平显著高于对照组(P＜0.05);重度组circHIPK3、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平、APACHE Ⅱ评分及Ranson评分显著高于中度组及轻度组,中度组显著高于轻度组(P＜0.05);circHIPK3的表达水平与IL-6、IL-8、TNF-α水平、APACHE Ⅱ评分及Ranson评分均呈正相关(P＜0.05);生存组的Cr、CRP、cTn1、CK、BNP、circHIPK3水平均明显低于死亡组(P＜0.05);Logistic回归分析发现CK、BNP、circHIPK3高水平是影响AP患者预后的危险因素(P＜0.05).结论 AP患者血清circHIPK3表达水平异常增加,其水平与患者预后密切相关.

目的 探讨人血清环状RNA同源性蛋白激酶3(CircHIPK3)靶向微RNA-338(miR-338)对胶质瘤细胞U251细胞侵袭、迁移的影响.方法 2021年2-12月,在武汉大学人民医院科研中心将U251细胞分为空白(NG)组、CircHIPK3阴性对照(sh-control)组、HIPK3敲减(sh-CircHIPK3)组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测U251细胞中CircHIPK3、miR-338表达水平;Tran-swell检测细胞迁移与侵袭;划痕法检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞周期;通过Circular RNA Interactome、RegRNA2.0、Circ-Bank Database 网站预测CircHIPK3(ID:hsa_circ_0000284)的靶向miRNA并用双萤光素酶实验验证,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达.结果 与NG组、sh-control组比较,sh-CircHIPK3组中CircHIPK3(1.00±0.00、1.06±0.26比0.56±0.06)表达水平显著降低(P<0.05),miR-338(1.00±0.00、1.12±0.19比1.89±0.28)表达、G1期细胞比例[(58.72±0.36)%、(58.45±0.27)%比(64.72±0.47)%]升高(P<0.05),U251细胞侵袭数目[(164.89±12.55)个、(165.77±12.16)个比(80.13±11.37)个]、划痕愈合率[(25.66±2.37)%、(26.38±2.53)%比(10.36±1.53)%]、迁移细胞数目[(196.72±18.75)个、(194.65±17.86)个比(95.58±8.66)个]、S期细胞比例[(26.45±0.39)%、(26.57±0.41)%比(20.72±0.18)%]明显降低(P<0.05);miR-338是CircHIPK3的靶基因.与NG组、sh-control组比较,sh-CircHIPK3组MMP-2(1.31±0.23、1.33±0.20比0.61±0.05)、MMP-9(1.16±0.22、1.15±0.21比0.85±0.19)蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论 沉默CircHIPK3通过靶向上调miR-338表达能抑制胶质瘤细胞U251细胞迁移和侵袭.

目的 探究慢性心力衰竭(CHF)患者血清环状RNA同源域相互作用激酶3(circHIPK3)和转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与心室重构及心功能的相关性.方法 选取2021年6月至2023年6月河南科技大学第一附属医院收治的152例慢性心力衰竭(CHF)患者为观察对象,作为CHF组,选取同期健康体检者110例,作为对照组,参照纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级标准将CHF患者分为Ⅰ～Ⅱ级(53例)、Ⅲ级(50例)、Ⅳ级(49例),采用实时荧光定量PCR法检测血清样本中circHIPK3表达水平,酶联免疫吸附法检测血清中GATA4蛋白水平,彩色多普勒超声心动图检测心室重构及心功能指标:左心室质量指数(LVMI)、左心室重构指数(LVRI)、左心室后壁厚度(LVPW)、左室舒张内径(LVEDD)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF),多因素logistic回归分析CHF患者心功能分级的影响因素,Pearson法分析CHF患者血清circHIPK3、GATA4与LVMI、LVRI、LVPW、LVEDD、LVFS、CO、LVEF的相关性.结果 与对照组比较,CHF患者血清中circHIPK3[(1.14±0.25)比(1.89±0.59)]、GATA4[(17.26±2.52)pg/ml比(26.94±4.24)pg/ml]水平显著升高,差异存在统计学意义(t=12.538、21.363;P<0.05),circHIPK3、GATA4水平随心功能分级的增加而升高.circHIPK3、GATA4、LVMI是心功能分级为Ⅲ～Ⅳ级的独立危险因素,CO、LVEF是保护因素(P<0.05).CHF患者血清中circHIPK3、GATA4水平与LVMI、LVPW、LVEDD呈正相关,与LVRI、LVFS、CO、LVEF呈负相关(P<0.05);CHF患者血清中circHIPK3与GATA4呈正相关(P<0.05).结论 circHIPK3、GATA4在CHF患者血清中呈现高表达,与心室重构、心功能指标存在一定关联性,可能对该病的诊治、预后评估有重要参考价值.

目的 探讨环状RNA HIPK3(circHIPK3)在鼻咽癌(NPC)细胞迁移和侵袭中的作用及其分子机制.方法 检索公共数据库,运用高通量基因表达数据库(GEO)分析NPC组织及非癌组织中circHIPK3表达水平;合成cir-cHIPK3-siRNA转染NPC 5-8F细胞;采用RT-qPCR、Western blot、细胞划痕、CCK-8和Transwell等实验方法,研究确定circHIPK3-siRNA干扰效果后,检测它对细胞增殖、迁移和侵袭及潜在下游基因CDH1、CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3表达的影响.运用转录组测序技术分析5-8F细胞cir-cHIPK3-siRNA干扰后显著差异表达的基因,以期找到介导circHIPK3促癌作用的关键基因.结果 与非癌组织相比,NPC组织中circHIPK3表达明显增加(P<0.05).使用siR-NA特异性敲低5-8F细胞中circHIPK3的表达后,与对照组相比,si-circHIPK3组细胞增殖速率降低(P<0.05),si-cir-cHIPK3组细胞划痕闭合率降低(P<0.01),同时si-cir-cHIPK3组细胞迁移和侵袭的细胞数目减少(P<0.05).此外,与对照组相比,si-circHIPK3组下游基因CDH1 mRNA和蛋白的表达量升高(P<0.001),CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3 mRNA和蛋白的表达量减少(P<0.05).进一步测序分析显示,circHIPK3-siRNA转染的5-8F细胞中AL645922.1、SCO2、AL136295.1和ISY1-RAB43表达上调(P<0.05),BIVM-ERCC5、FAM47E-STBD1、INO80B-WBP1、NAIP、C15orf38-AP3S2、BCL2L2-PABPN1和SMIM11B表达下调(P<0.05).结论 NPC组织中circHIPK3表达显著升高.circHIPK3通过调节E-Cadherin、N-Cadherin、MMP2、MMP9和IL-6/STAT3的表达,促进NPC细胞5-8F的增殖、迁移和侵袭.AL645922.1和BIVM-ERCC5等基因可能在circHIPK3介导的促进NPC 5-8F细胞迁移和侵袭中发挥关键作用.

目的 分析三阴性乳腺癌(TNBC)患者中环状RNA circHIPK3(circHIPK3)的表达及对生物学行为的影响.方法 选取2019年1月至2022年12月收治的三阴性乳腺癌(TNBC)患者124例和乳腺良性肿瘤(乳腺囊性增生和乳腺纤维腺瘤)患者50例.选取乳腺上皮细胞MCF-10A 和 TNBC 细胞系 BT-549、MDA-MB-231 和 MDA-MB-468.实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测TNBC组织、癌旁组织、MCF-10A和TNBC细胞中circHIPK3的表达.MDA-MB-468细胞分为空白对照组、circHIPK3过表达组、circHIPK3抑制组.检测细胞的增殖、侵袭、迁移能力及凋亡情况.结果 TNBC组织中的circHIPK3相对表达量高于癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织,癌旁组织高于乳腺良性肿瘤组织(P＜0.05).CircHIPK3在TNBC细胞中的相对表达量高于正常乳腺上皮细胞(P＜0.05).CircHIPK3过表达组转染48 h、72 h及96 h的增殖活性、细胞克隆数目和Edu/DAPI比值均高于空白对照组和circHIPK3抑制组,而circHIPK3抑制组低于空白对照组(P＜0.05).CircHIPK3过表达组的细胞侵袭数目及迁移率高于空白对照组和circHIPK3抑制组,而circHIPK3抑制组低于空白对照组(P＜0.05).CircHIPK3过表达组的凋亡率低于空白对照组和circHIPK3抑制组,而circHIPK3抑制组高于空白对照组(P＜0.05);CircHIPK3抑制组的凋亡较空白对照组和circHIPK3过表达组更为明显,而circHIPK3过表达组凋亡更弱.结论 CircHIPK3在TNBC患者中高表达,且能促进TNBC的增殖、迁移和侵袭,抑制凋亡,抑制circHIPK3表达TNBC的增殖、迁移和侵袭能力减弱,凋亡增加,可考虑将circHIPK3作为TNBC的治疗靶点.

目的 探讨口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中环状RNA circHIPK3的表达及临床意义,并探索circHIPK3调控微RNA124表达对OSCC细胞增殖的影响.方法 采用实时荧光定量PCR检测90例2016年1月至2017年5月于南昌大学第二附属医院的OSCC患者癌组织、配对的癌旁组织及OSCC细胞株CAL27、SCC15和人正常口腔角质细胞株hNOK中circHIPK3的表达水平并分析其与患者临床病理特征关系.设计合成circHIPK3的靶向小干扰RNA si-circHIPK3和阴性对照序列si-NC,分别转染CAL27和SCC15细胞,细胞计数(cell counting kit-8,CCK-8)检测circHIPK3对CAL27和SCC15细胞增殖能力的影响.实时荧光定量PCR检测微RNA 124在OSCC中的表达,分析circHIPK3的表达与微RNA124表达的相关性.CAL27和SCC15细胞分别转染si-circHIPK3和si-NC,实时荧光定量PCR检测细胞中微RNA124表达变化.CAL27和SCC15细胞分别转染si-NC、si-circHIPK3、微RNA 124模拟物、si-circHIPK3±微RNA124抑制物,CCK-8法检测OSCC细胞增殖的变化.结果 OSCC组织中circHIPK3表达水平[2.23(1.86,3.00)]显著高于癌旁正常组织[1.05(0.85,1.26),U=1 094,P=0.000]. CAL27(3.02±0.51,P=0.000)和SCC15细胞(3.16±0.75,P=0.000)中circHIPK3表达水平均显著高于hNOK细胞(1.26±0.30).circHIPK3在不同临床分期及不同细胞分化程度患者癌组织中表达差异均有统计学意义(P＜0.05).抑制circHIPK3表达后,CAL27和SCC15细胞增殖能力受到明显抑制,差异均有统计学意义(P＜0.05).OSCC组织中微RNA 124表达水平(0.61±0.35)较癌旁正常组织显著下调(1.13±0.39,t=-5.36,P＜0.05).相关性分析显示OSCC组织中circHIPK3的表达与微RNA124呈显著负相关(r=-0.767,P＜0.001).与沉默circHIPK3相比,在沉默circHIPK3的CAL27和SCC15细胞中加入微RNA 124抑制物共转染之后,沉默circHIPK3抑制细胞增殖的能力部分逆转.结论 OSCC中circHIPK3的表达水平上调,下调circHIPK3的表达水平可抑制OSCC细胞的增殖,circHIPK3可能通过调控微RNA124表达参与OSCC的发生和发展过程.