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NIH3T3-CD40L稳定细胞系构建及在EBV转化B淋巴细胞中的应用
编辑人员丨2023/8/6
通过脂质体法转染pCMV6-CD40L重组质粒和G418阳性克隆筛选,构建了稳定表达CD40L的NIH3T3细胞系,在RNA和蛋白质水平进行了功能鉴定,对其作为饲养细胞在体外B淋巴母细胞系(B lymphoblastoid cell lines,B-LCLs)培养和在EBV转化B细胞中的作用进行了实验验证.结果表明,NIH3T3-CD40L细胞系不仅可以提高体外低密度B-LCLs存活率,而且可以降低成功建立B-LCLs所需的细胞密度,促进其增殖.该细胞系的成功构建,进一步确证了NIH3T3-CD40L作为饲养细胞可以促进体外低密度B-LCLs的增殖及提高EBV转化B淋巴细胞的效率,优化了体外B细胞培养及EBV转化B淋巴细胞的流程,也为单克隆抗体的制备奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/6
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七味白术散对轮状病毒感染乳鼠小肠iEL CD3+T 细胞核内抗病毒蛋白表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨七味白术散对轮状病毒(human rotarirus,HRV)感染乳鼠小肠黏膜上皮内淋巴细胞(iEL)CD3+T细胞核内抗病毒蛋白表达的影响,进一步阐明该方抗HRV机制.方法 选取5日龄NIH乳鼠168只,随机分为7组,正常对照组(N组)常规喂养,其余各组建立HRV腹泻模型,并分别灌服生理盐水(M组)、七味白术散(B组)、病毒唑(Z组)、抑制剂(Y组)、七味白术散加抑制剂(BY组),病毒唑加抑制剂(ZY组);分别于用药后32、40、48 h取各组乳鼠小肠黏膜,采用Western blotting方法测定小肠iEL CD3+T细胞核中双链RVA依赖的蛋白质激酶(PKR)、真核翻译起始子2的α亚基(eIF-2α)、2',5'-寡腺苷酸合成酶(OAS),RNA酶L(RNaseL)蛋白的表达.结果 B组乳鼠小肠粘膜iEL胞核中PKR、eIF-2α、OAS、RNaseL蛋白表达48 h时明显高于N组、M组、Y组、BY组、ZY组以及Z组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 七味白术散能促进感染乳鼠小肠黏膜iEL CD3+T细胞核中抗病毒蛋白PKR、eIF-2α、OAS、RNaseL的表达,从而实现对HRV的清除作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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稳定表达小鼠CD40L的NIH3T3细胞系的建立及其在B细胞培养和激活中的应用
编辑人员丨2023/8/6
该研究构建小鼠CD40L真核表达重组质粒pcDNA3.1-mCD40L,通过电转法将重组质粒转至NIH3T3细胞中.利用G418对转染后细胞进行压力筛选,获得稳定转染细胞株.提取稳定转染细胞株RNA,通过RT-PCR法检测Neo基因的mRNA表达情况.分离稳定转染细胞上清,利用ELISA法检测小鼠CD40L蛋白水平的表达情况.RT-PCR结果显示,Neo基因能够在稳定转染细胞中表达,ELISA结果显示,获得的稳定转染细胞株NIH3T3-mCD40L细胞上清中CD40L的表达量高达1.286 ng/mL.进一步活性研究表明,该细胞系能够在体外与IL-2和IL-21共同作用培养B细胞至14天,并刺激B细胞产生特异性抗体.该细胞系的成功构建,为利用体外B细胞分离培养和活化法分离特异性单克隆抗体奠定了良好的基础.
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编辑人员丨2023/8/6
