目的 观察毓麟珠对早发性卵巢功能不全(POI)小鼠卵巢功能、卵泡发育及mTOR通路的影响,探讨其作用机制.方法 以小鼠透明带3 (Zp3)为抗原,皮下多点注射BALB/c雌性小鼠建立免疫性POI模型.实验分为空白组、模型组、阳性药组和毓麟珠低、中、高剂量,各给药组给予相应药物.HE染色观察小鼠卵巢形态及卵泡,ELISA检测小鼠血清激素水平,Western blot检测卵巢组织AKT、mTOR的蛋白表达,PCR检测mTOR下游相关Rheb、S6kl、4E-BP1的mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠卵巢明显缩小,卵泡数量明显减少,血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)明显升高,抗苗勒氏管激素(AMH)、雌二醇(E2)明显下降,Rheb、S6k1、4E-BP1 mRNA和AKT、mTOR蛋白相对表达量明显降低(P＜ 0.05,P＜0.01);与模型组比较,各给药组小鼠卵巢增大,卵泡数量增加,血清FSH、LH均下降,AMH、E2均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);小鼠卵巢mTOR蛋白表达及其下游相关Rheb、S6k1、4E-BP1 mRNA表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 毓麟珠治疗POI机制可能与调节mTOR信号通路相关因子基因和蛋白表达水平有关,通过促进卵泡发育,改善卵巢功能.

目的 研究毓麟珠通过改善卵巢微环境防治早发性卵巢功能不全(POI)的作用机制. 方法 选取BALB/c雌性小鼠随机分为空白组、模型对照组、中药组和阳性药组,每组10只.除空白组外其余三组均皮下注射小鼠透明带3(ZP3)多肽建立免疫性POI模型,模型建立后分别给予生理盐水、戊酸雌二醇、毓麟珠溶液灌胃,每天一次,连续6周.高频超声系统动态监测卵巢面积、卵泡数、卵巢血流;取血检测血清激素水平.用BCA试剂盒检测卵巢组织超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的水平. 结果 (1)模型对照组小鼠卵巢面积、卵泡数显著低于空白组(P＜0.05);与模型对照组比较,阳性药组、中药组卵巢面积均显著增加(P＜0.05),中药组卵泡数显著增加(P＜0.05),且显著高于阳性药物组(P＜0.05).(2)模型对照组小鼠较空白组小鼠卵巢动脉脉压差增大,搏动指数、阻力指数增高(P＜0.05);与模型对照组比较,阳性药组、中药组脉压差、搏动指数、阻力指数均显著降低(P＜0.05).(3)与空白组比较,模型对照组血清FSH、LH显著升高,而AMH显著降低(P＜0.05);与模型对照组比较,阳性药组、中药组FSH、LH均显著降低,AMH均显著升高(P＜0.05),且中药组较阳性药组FSH更低、AMH更高(P＜0.05).(4)与空白组比较,模型对照组卵巢组织SOD、GSH-Px显著下降,ROS、MDA显著上升(P＜0.05);与模型对照组比较,阳性药、中药组卵巢组织SOD、GSH-Px均显著升高,ROS、MDA均显著下降(P＜0.05),且中药组ROS显著低于阳性药组(P＜0.05). 结论 中药毓麟珠能通过上调抗氧化因子、下调缺氧相关因子改善卵巢微环境,促进卵泡发育,改善卵巢功能.

目的 通过观察卵巢线粒体形态、分布并检测其活力,探讨毓麟珠对卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠卵母细胞中线粒体的表达对卵巢功能的影响.方法 以小鼠透明带3(Zp3)为抗原,皮下多点注射BALB/c雌性小鼠建立免疫性POI模型.将40只育龄期小鼠分成正常组、模型对照组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组,共五组.正常组和模型对照组给予生理盐水,阳性对照组给予戊酸雌二醇水溶液,低剂量和高剂量组分别给予不同剂量毓麟珠中药.给药六周后,氧化应激指标检测试剂盒测定氧化应激水平;荧光染色观察卵母细胞中线粒体的分布;电镜下观察卵母细胞的超微结构及线粒体的形态;JC-1检测卵母细胞中线粒体的膜电位(△Ψm).结果 经过6周给药,阳性对照药组、低剂量和高剂量小鼠动情周期逐渐恢复规律,且阴道分泌物涂片镜下观察角化上皮均匀.与模型对照组比较,氧化应激水平在中药组里也有不同程度的改善,且中药低剂量组比阳性对照组降低更显著(P<0.01).线粒体荧光染色图片显示,与模型对照组比较,阳性对照组、低剂量组、高剂量组线粒体荧光强度增加,且在胞质跟膜的分布上,其中高剂量组效果比阳性对照和低剂量分布更均匀.电镜结果显示,与模型对照组相比,中药两组形态均有改善,白泡样变减少,高剂量组线粒体嵴明显,基质密度均匀,数量较多,少量线粒体局部空化.线粒体膜电位结果显示,与模型对照组比较,阳性对照组、低剂量组和高剂量组膜电位显著升高(P<0.01),其中高剂量组膜电位比低剂量高且比阳性对照组有增高趋势,膜电位值最接近正常组.结论 毓麟珠通过干预免疫性POI小鼠卵母细胞线粒体改善了卵子质量,进而改善卵巢功能.

胃的观察毓麟珠"从气论治"肾虚型早发性卵巢功能不全(POI)的临床疗效.方法 将60例患者随机分为两组,每组各30例,实验组口服毓麟珠(农本方),对照组采用雌孕激素序贯治疗(口服戊酸雌二醇片+黄体酮胶囊),观察患者治疗前后月经恢复情况、证候疗效指数、血清性激素(FSH、LH、E2)、基础窦卵泡数、子宫内膜厚度等指标,评价毓麟珠"从气论治"肾虚型POI患者的临床疗效.结果 毓麟珠治疗POI(肾气虚型),明显改善患者的临床症状及降低FSH、LH并提高E2水平,并能增加卵巢基础窦卵泡数及子宫内膜厚度.结论 毓麟珠能有效改善POI(肾气虚型)患者卵巢功能并能起到延缓卵巢早衰进程的作用.

目的 探讨毓麟珠调控TSC/Akt通路改善氧化应激,进而改善卵泡发育的机制.方法 动情周期正常的84只雌性BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、雌激素组、毓麟珠组(低、中、高剂量组),每组14只.除空白组外,其余五组建立免疫性早发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)模型.造模成功后,除空白组、模型组外,其余各组连续6周给予相应药物灌胃治疗.治疗后,观察卵巢组织病理状态,检测卵巢组织的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平,蛋白免疫印迹法检测卵巢组织中RheB、P-s6 k1、P-4 E-BP1蛋白含量的表达,免疫组化检测卵巢组织中TSC1、TSC2、Akt的蛋白表达.结果 造模成功后,模型组小鼠卵巢、子宫质量降低;给药后,毓麟珠高剂量组小鼠左右卵巢以及子宫质量均增加(P<0.01).与模型组相比,各给药组卵泡数量明显增加,卵巢组织形态明显改善.与空白组相比,模型组氧化因子表达水平较高,抗氧化因子表达水平明显较低(P<0.05);与模型组相比,各给药组ROS、MDA明显升高,GSH-Px、SOD明显降低(P<0.05).与空白组相比,模型组Akt蛋白表达降低,TSC1、TSC2表达升高;与模型组相比,各给药组Akt蛋白表达明显升高,TSC1、TSC2蛋白表达明显降低.与空白组相比,模型组RheB、P-s6 k1、P-4 E-BP1表达降低(P<0.05);与模型组相比,各给药组RheB、P-s6k1、P-4E-BP1蛋白表达升高,以P-4E-BP1升高最明显(P<0.01).结论 毓麟珠通过调控TSC/Akt信号通路抑制微环境氧化应激,这可能是其改善卵母细胞质量,促进卵母细胞成熟的作用机制.

目的:探索毓麟珠调控叉头框蛋白O3a(FOXO3a)通路改善早发性卵巢功能不全(POI)小鼠卵巢功能,促进卵泡发育的作用机制.方法:选取BALB/c雌性小鼠皮下注射小鼠透明带3(Zp3)建立免疫POI模型,造模成功后随机分为模型对照组、阳性对照组(戊酸雌二醇0.009mg/mL)、低剂量组(毓麟珠0.234mg/mL)、高剂量组(毓麟珠0.936mg/mL),每组10只,另设10只小鼠作为空白组.放射免疫法检测血清雌激素(E2)、促卵泡生长激素(FSH)、促黄体生成素(LH)和抗苗勒激素(AMH)水平,HE染色观察卵巢组织形态,Western Blot检测卵巢组织FOXO3a、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1 α)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测卵巢组织FOXO3a、去乙酰化酶3(SIRT3)、去类泛素化特异性蛋白酶1(SENP1)mRNA水平.结果:阴道涂片观察显示,给药结束后,阳性对照药组、低剂量组、高剂量组动情周期基本恢复规律.POI小鼠卵巢分泌E2、AMH显著减少(P＜0.01),FSH、LH浓度显著升高(P＜0.01).与模型组比较,高剂量组E2、AMH显著升高(P＜0.01),FSH、LH浓度显著降低(P＜0.01).模型组小鼠FOXO3a表达呈上升趋势,PGC-1α蛋白表达呈下降趋势,给予中药后的POI小鼠FOXO3a蛋白表达呈下降趋势,PGC-1α蛋白表达呈升高趋势.POI模型小鼠FOXO3a、SIRT3、SENP1基因表达水平均显著升高(P＜0.01),给予中药的低剂量组基因FOXO3a、SENP1表达有下降趋势,SIRT3显著下降(P＜0.01).结论:毓麟珠通过下调氧化诱导因子和线粒体乙酰化因子,上调抗氧化因子调节氧化还原反应,改善了卵母细胞线粒体功能,促进卵泡发育从而改善卵巢功能.

目的 本文旨在探究毓麟珠与养精种玉汤在改善卵巢微环境进而改善早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)的作用机制差异.方法 选择SPF级雌性大鼠24只,分为4组,每组6只,除空白组外,其余各组通过腹腔注射去氧乙烯基环己烯(VCD)构造POI模型,造模成功后,空白组与模型组给予生理盐水灌胃,毓麟珠组与养精种玉汤组分别给与相应中药灌胃6周.通过HE染色确立模型构造成功;通过小动物多普勒超声系统检测卵巢血流及形态;通过ELISA检测血清激素水平;通过氧化应激因子超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-Px)检测卵巢氧化应激水平.结果 HE染色结果显示,模型组大鼠卵泡数减少,透明带损伤,卵母细胞形态畸形,造模成功;超声数据显示与模型组相比,毓麟珠组卵巢面积明显增加(P＜0.05),毓麟珠组与养精种玉汤组血流动力指数(PI)与阻力指数(RI)值明显降低,养精种玉汤组降低效果更明显;血清激素结果显示,与空白组相比,E2、AMH明显降低,FSH明显升高(P＜0.05),给药后E2、AMH明显升高,FSH明显降低(P＜0.05),毓麟珠改善效果更明显;氧化应激结果显示,模型组SOD、GSH-PX明显降低,MDA明显升高(P＜0.05),给药6周后,养精种玉汤组SOD明显升高,MDA明显降低(P＜0.05);毓麟珠组GSH-PX明显升高,MDA明显降低(P＜0.05),养精种玉汤组改善更明显.结论 毓麟珠组改善激素水平以及卵巢状态效果更明显,养精种玉汤组在改善卵巢血流以及氧化应激效果更好,说明中医同病异治理论有其充分的科学依据,为不同证型药物防治POI的机制探索提供思路.