目的 利用超高效液相色谱串联Qda质谱法对单抗的N糖谱进行定性和定量分析.方法 对单抗Fc上的N糖链利用糖苷酶F进行酶切释放,然后用RapiFluor-MS染料进行标记,通过Qda质谱对N糖进行糖型鉴别、荧光检测器进行定量检测.结果 超高效液相色谱串联Qda质谱法能够准确的对单抗N糖进行定性定量检测,单个糖型的实测m/z值在理论值±0.5内.利用该方法对原研抗CD20人鼠嵌合单抗和生物类似药候选药物的N糖进行分析表明,3个候选药物的N糖谱与原研抗体基本一致,但在部分糖型种类和比例上存在一定的差异,总的岩藻糖修饰糖型比例基本一致.对CHO细胞、NS0细胞和SP2/0细胞表达的单抗N糖进行比对分析显示,3种细胞表达单抗的主要糖型为G0F-N、G0F、Man5、G1Fa、G1Fb和G2F,占总糖型比例的80％以上.相比于NS0细胞和SP2/0细胞,CHO细胞表达抗体糖型种类相对较为简单,共11种糖型.而NS0细胞和SP2/0细胞表达单抗糖型种类和结构较复杂,分别检测到22和26种糖型,其中含有多种复杂的唾液酸和半乳糖修饰糖型,虽然这些糖型所占比例较低,但可能与单抗的体内半衰期和免疫原性相关.结论 超高效液相色谱串联Qda质谱法作为快速准确的N糖分析方法,可应用于单抗N糖的质控研究中.

目的:建立同时测定附子理中丸中6个单酯及双酯型生物碱含量的方法.方法:应用高效液相色谱(HPLC)与QDA质谱联用同时测定附子理中丸中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱6个成分的含量.使用Phenomenex Luna C1s色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2％乙酸水(用三乙胺调pH 6.2)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,分流比为1:4,使用ESI+离子源,选择性离子扫描(SIM)模式下对苯甲酰新乌头原碱(m/z 590.0)、苯甲酰乌头原碱(m/z 604.0)、苯甲酰次乌头原碱(m/z 574.0)、新乌头碱(rr/z 632.0)、次乌头碱(m/z 616.0)和乌头碱(m/z 646.0)进行测定.结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、次乌头碱、新乌头碱和乌头碱6个成分的质量浓度分别在0.000 2～51.75 μg· mL-1(r=0.999 2)、0.000 2～50.95 μg·mL-1(r=0.999 5)、0.000 2～50.25 μg·mL-1(r=0.999 8)、0.000 2～49.80 μg·mL-1(r=0.999 9)、0.000 2～50.60 μg·mL-1(r=0.999 5)和0.000 2～52.00 μg· mL-1(r=0.999 7)范围内线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为101.8％、101.3％、98.2％、104.8％、99.9％和89.9％,RSD分别为6.4％、2.6％、2.7％、6.1％、3.8％和5.7％.3批附子理中丸中6个生物碱成分即苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱的含量范围分别为7.095～7.366、1.007～1.214、0.594～0.742、1.261～1.438、1.492～1.578和0.135～0.163μg·g-1.结论:该方法可测定附子理中丸中6个生物碱成分含量,为附子理中丸的质量标准提高打下了基础.

目的:建立超高效液相色谱质谱联用法(UPLC-MS)测定重组人乳头瘤病毒中3-(N-吗啡啉)丙磺酸(MOPS)含量.方法:采用Waters ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱,流动相为20 mmol·L-1乙酸铵(pH5.0)-乙腈,梯度洗脱;流速0.5 mL·min-1,柱温40℃,进样量为1.0μL;Qda检测器采用质量数208的SIR负离子扫描模式,锥孔电压为15V,时间为3min.结果:UPLC-MS测定重组人乳头瘤病毒原液和九价疫苗成品分离度分别为3.86和2.76,MOPS在浓度为20～0.009 765 6μg·g-1时线性关系良好(r2=0.997 9),定量下限为0.009 765 6μg·g-1,检测下限为0.004 882 8μg·g-1,精密度试验的RSD均不大于2.0％.HPV原液和HPV九价疫苗平均加样回收率分别为99.4％和100.6％.样品中未检测到MOPS.结论:该方法简单快速、准确、灵敏,重复性好,适用于重组人乳头瘤病毒原液和疫苗成品中的MOPS含量检测.

该文建立了使用UPLC-QDA准确快速地测定培植牛黄中各胆汁酸类成分的方法,并通过该法对收集到的10批培植牛黄样品中的胆汁酸类成分的化学轮廓进行了全面考察与测定.结果 在各批样品中可检测到的常见胆汁酸类成分共有9种,分别是胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸,其中除了甘氨去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸外,其他7种胆汁酸类成分均可定量.测定结果显示,游离型胆汁酸是培植牛黄中主要的胆汁酸类成分,占其中胆汁酸类成分的97％以上,胆酸、去氧胆酸的含量最高,而胆酸的含量是去氧胆酸的近2倍.该研究建立的方法准确、快速、灵敏度高,设备相对价廉,适合用于相似样品的研究和测定.

[目的]建立一种新会陈皮陈化方式的判别方法.[方法]以不同来源、不同陈化年份、不同处理方式等49批陈皮样品为研究对象.根据陈皮高温加速陈化会发生Maillard反应的特点,建立灵敏度高、重复性好的高效液相色谱(HPLC)-QDa质谱检测器联用测定5-羟甲基糠醛含量的方法;制定可以有效判别出高温加速陈化陈皮的5-羟甲基糠醛含量限度;在此基础上,引入色差分析仪对陈皮外观色泽进行客观的数据量化,分析非高温加速样品的总色差值?E变化范围,制定可以有效判别出煮茶染色加速陈皮的?E值限度.[结果]不同来源陈皮的5-羟甲基糠醛含量存在明显差异,其中,自然陈化陈皮5-羟甲基糠醛含量均<0.25 mg·g-1,高温加速陈化陈皮的5-羟甲基糠醛含量均≥0.25 mg·g-1,而煮茶染色处理样品的含量也小于0.25 mg·g-1.结合总色度值?E进一步研究发现,自然陈化陈皮的?E值均>68,而煮茶染色加速陈皮的?E值均≤68.[结论]以双指标5-羟甲基糠醛含量≥0.25 mg·g-1、?E≤68可作为判定加速陈化陈皮的依据.该判定方法同时控制外观色泽及含量限度,可以准确、客观地对陈皮陈化方式进行判别.