目的:选用肝癌HepG2 和 7402 细胞株,探讨海洋生物碱Rhopaladins类似物(2E,4E)-N-环己基-1-对氟苯基-2-对氯苯乙烯基-4-对氯苄叉基-5-吡咯烷酮-2-酰胺(简称RPDPRH)对肝癌细胞的增殖抑制和周期阻滞的影响.方法:采用CCK-8 实验检测Rhopaladins类似物RPDPRH对肝LO2 细胞以及肝癌HepG2 和 7402 细胞的增殖抑制.平面克隆实验评估Rhopaladins类似物RPDPRH对肝癌HepG2 和 7402 细胞克隆形成的影响.通过周期实验检测Rhopaladins类似物RPDPRH对肝癌HepG2 和 7402 细胞的周期阻滞情况.采用Hoechst 33258 染色法荧光观察经Rhopaladins类似物RPDPRH作用后的肝癌HepG2 和 7402 细胞的凋亡情况.结果:CCK-8 实验结果表明Rhopaladins类似物RPDPRH对肝LO2 细胞的增殖抑制作用较小,但对肝癌HepG2 和7402 细胞的增殖具有显著的抑制作用;通过克隆形成实验和细胞周期检测验证了Rhopaladins类似物RPDPRH能够抑制肝癌HepG2 和7402 细胞的克隆形成,并将肝癌细胞周期阻滞在G0/G1 期;Hoechst 33258 染色实验发现,经Rhopaladins类似物RPDPRH干预后,在荧光显微镜下可以明显观察到肝癌细胞的凋亡.结论:Rhopaladins类似物RPDPRH对肝LO2细胞具有较小的抑制作用,但其能够表现出很好地抑制人肝癌HepG2 和 7402 两种细胞系的细胞增殖的作用,并且可能与将肝癌细胞周期阻滞在G0/G1 期有关.

目的 观察Rhopaladins类似物(RPDPB)对宫颈Hela细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组、空白组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO培养液,空白组加入不含细胞的MEM培养液,分别于24、48、72 h采用CCK-8法检测OD值,计算细胞增殖抑制率.取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以12.5、25、50μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO不加药,48 h后采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测Annexin V-FITC和PI,计算细胞凋亡率.取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以12.5、25、50μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO不加药,48 h后采用RT-PCR法检测细胞人乳头瘤病毒18 E6(HPV18 E6)、人乳头瘤病毒18 E7(HPV18 E7)、WNT2B、β-catenin mRNA和miR-145 RNA.取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以12.5、25、50μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO不加药,48 h后采用Western blot法检测细胞WNT2B、β-catenin蛋白.结果 与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率增加,且呈时间和剂量依赖性(P均<0.05).与对照组比较,实验组细胞早期凋亡率和晚期凋亡率增加,且呈剂量依赖性(P均<0.05).与对照组比较,实验组HPV18 E6 mRNA、HPV18 E7 mRNA、WNT2B mRNA、β-catenin mRNA相对表达量降低,miR-145 RNA相对表达量升高,且呈剂量依赖性(P均<0.05).与对照组比较,实验组WNT2B、β-catenin蛋白相对表达量降低,且呈剂量依赖性(P均<0.05).结论 RPDPB可抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并诱导细胞凋亡,呈时间和剂量依懒性,作用机制可能是其通过下调HPVE6/E7 mRNA表达,导致miR-145 RNA表达上调,进而抑制下游WNT2B/β-catenin通路中WNT2B、β-catenin mRNA和蛋白表达.

目的 探讨海洋生物碱Rhopaladins的合成类似物RPDPC对人宫颈癌HeLa细胞的细胞生物学特征的影响及其可能机制.方法 采用CCK-8法检测HeLa细胞在RPDPC不同浓度、不同时间处理后的存活率;分别以DMSO(对照组)或12.5μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L RPDPC处理48 h后,采用Hoechst 33258染色和Annexin-FITC/PI双染色法观察HeLa细胞凋亡率,qRT-PCR检测HeLa细胞癌基因E6、E7和PTEN、PI3K、Akt的mRNA及miR-21表达水平,Western blotting检测PTEN、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,RPDPC处理后HeLa细胞存活率明显下降并呈浓度及时间依赖性(P<0.05).与对照组比较,RPDPC处理后HeLa细胞凋亡率明显上升且呈浓度依赖性(P<0.05).qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,RPDPC处理后HeLa细胞E6、E7、PI3K、Akt的mRNA及miR-21-5P表达水平均明显降低(P<0.05),PTEN mRNA表达水平则明显增高(P<0.05).Western blotting检测结果显示,与对照组比较,RPDPC处理后HeLa细胞PTEN蛋白表达水平明显增高(P<0.05),而p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).结论 RPDPC可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制miR-21-5P/PTEN/PI3K/Akt信号通路进而降低癌基因E6和E7的表达有关.