目的:观察通过小干扰RNA(siRNA)干扰信号转导与转录激活因子-3(STAT3)的表达对胆管细胞癌生物功能的影响。方法:培养胆管细胞癌细胞系人胆管上皮癌细胞(HUCCT1)和人胆管癌细胞(RBE)，构建siRNA-710、siRNA-551和siRNA-2021这3个siRNA，使用脂质体3000(lipo3000)转染试剂将siRNA转染胆管细胞癌细胞，然后通过聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测siRNA对STAT3的表达的干扰效果后选择siRNA-551进行后续实验。siRNA-551转染胆管细胞癌细胞48 h后通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖、通过流式细胞术检测细胞凋亡率、通过Western blot检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平，并采用单因素方差分析实验结果。结果:siRNA-551能够显著降低胆管细胞癌细胞中STAT3的mRNA(Messenger RNA)和蛋白质表达。HUCCT1和REB胆管细胞癌细胞转染siRNA-551后，STAT3干扰组胆管细胞癌细胞增殖水平[(74.49±0.96)%、(91.08±5.32)%]低于对照组[(100.00±5.52)%、(100.00±2.82)%， F＝62.20、6.57， P<0.05]和NC组[(90.99±1.87)%、(99.74±4.71)%， F＝184.57、4.45， P<0.05]，差异有统计学意义；干扰组细胞凋亡率[(15.68±1.79)%、(11.30±0.67)%]高于对照组[(6.97±0.76)%、(6.12±0.37)%， F＝60.01、138.40， P<0.05]和NC组[(9.21±0.63)%、(6.22±0.21)%， F＝34.77、155.96， P<0.05]，差异有统计学意义。HUCCT1细胞转染siRNA-551的胆管细胞癌细胞中IL-6和VEGF蛋白相对表达量(0.23±0.07、0.16±0.02)低于对照组(0.62±0.34、0.35±0.15， F＝3.78、4.90， P<0.05)和NC组(0.59±0.07、0.47±0.39， F＝37.46、2.11， P<0.05)，差异有统计学意义；REB细胞转染siRNA-551的胆管细胞癌细胞中IL-6和VEGF蛋白相对表达量(0.22±0.11、0.80±0.08)低于对照组(0.51±0.11、1.89±0.13， F＝11.39、151.69， P<0.05)和NC组(0.60±0.34、1.46±0.48， F＝3.39、140.20， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:通过siRNA干扰胆管细胞癌细胞中的STAT3表达具有抑癌的效果。

目的:探讨建立检测RNA中m6A（N6-甲基腺苷）修饰水平的快速、稳定且灵敏的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）方法以及其应用。方法:RNA发生m6A修饰的水平可以通过RNA中m6A和腺苷（A）的摩尔比值反应出来，通过电喷雾离子源（ESI）正离子多反应监测（MRM）模式测定RNA中m6A和A的含量。通过分析低、中、高3个不同浓度的质控样品（m6A：4、40、400 nmol/L；A：40、400、4 000 nmol/L）对所建方法进行验证。并且应用该方法检测不同条件处理下小鼠脾脏T细胞RNA中m6A的水平。采用 t检验比较两组数据之间的差异。 结果:所建立方法中，m6A和A分别在1~500 nmol/L和10~5 000 nmol/L的范围线性关系良好（ R2>0.99），m6A和A的最低检测限（LOD）分别为1 nmol/L和10 nmol/L，回收率在98.9%和116.5%之间，日内（ n=5）相对标准偏差（RSD）和日间（ n=15，5 d）RSD分别为2.4%~9.5%和4.4%~9.6%。并且应用该方法检测不同条件下培养的小鼠脾脏T细胞RNA中m6A的含量，结果显示，原代CD8 +T细胞RNA中m6A修饰水平为0.271 5±0.017 9，在培养基中加入IL-27的原代CD8 +T细胞RNA中m6A修饰水平为0.251 7±0.015 0，表明原代CD8 +T细胞具有更高的RNA甲基化水平。 结论:本研究建立了一种快速、简便及灵敏的HPLC-MS/MS测定RNA中m6A甲基化水平的检测方法，可用于分析甲基化与疾病之间的关系。