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Sli-miR-34-5p响应植物次生物质正调控斜纹夜蛾谷月甘肽S-转移酶基因SlGSTe1的表达
编辑人员丨2023/8/6
[目的]昆虫解毒酶系统是昆虫适应植物次生物质的主要机制,研究调控解毒酶基因表达的miRNA将发现可用于害虫防治的靶标分子.本研究旨在探究Sli-miR-34-5p对斜纹夜蛾Spodoptera litura中应对植物次生物质的解毒酶谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因的调控作用.[方法]通过实时荧光定量PCR检测Sli-miR-34-5p在斜纹夜蛾5龄第1天幼虫进食芥菜Brassica juncea后中肠中的表达;在斜纹夜蛾5龄第1天幼虫体内及细胞株中超表达Sli-miR-34-5p模拟体类似物(mimics)或抑制剂(inhibitors),采用实时荧光定量PCR和Western blot分析Sli-miR-34-5p已知或推测的靶基因的表达变化;利用双荧光素酶报告系统验证Sli-miR-34-5p对靶标基因的表达调控作用;采用生物信息学方法预测Sli-miR-34-5p可能的靶基因,以了解其可能的作用机理.[结果]结果表明,Sli-miR-34-5p在斜纹夜蛾5龄第1天幼虫进食芥菜24和48 h时的中肠中表达显著上调.在斜纹夜蛾5龄第1天幼虫血淋巴中超表达Sli-miR-34-5p mimic,进食芥菜的斜纹夜蛾中SlGSTe1转录上调;反之,超表达Sli-miR-34-5p inhibitor,SIGSTE1蛋白水平显著下调.在斜纹夜蛾Spli-221细胞株中添加芥菜次生物质吲哚-3-甲醇(I3C),Sli-miR-34-5p和SlGSTe1的表达量均呈现上调的趋势;此外,在细胞中转染Sli-miR-34-5p mimic,SlGSTe1的表达水平明显上调.然而,生物信息学预测和双荧光素酶报告系统检测结果显示,Sli-miR-34-5p并不直接作用于靶基因SlGSTe1.[结论]研究结果提示Sli-miR-34-5p通过促进斜纹夜蛾谷胱甘肽S-转移酶基因SlGSTe1的表达而参与斜纹夜蛾应对植物次生物质的胁迫.
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编辑人员丨2023/8/6
