目的 明确两例Angelman综合征(Angelman syndrome,AS)患者的遗传学病因,并分析其基因型与表型的关系.方法 首先应用染色体核型及染色体芯片技术分析患者是否携带染色体15q11.2区域大片段缺失或重复以及单亲二倍体.然后对AS关键致病基因UBE3A编码区及邻近内含子区域进行突变分析,并通过逆转录PCR检测剪切突变对基因转录的影响.结果 测序结果显示家系1先证者及母亲携带一个UBE3A基因杂合剪切突变IVS15-1G>C;逆转录-PCR结果显示家系1先证者及母亲UBE3A基因转录后杂合缺失54/59个核苷酸,导致缺失18个氨基酸或提前终止翻译,破坏UBE3A蛋白关键HECT结构域;核型分析及染色体芯片结果均正常;先证者表现为严重智力低下、共济失调、癫痫及不自觉发笑等典型AS症状.家系2先证者、先证者弟弟及母亲携带UBE3A基因c.2540 C>T杂合错义突变(p.P847 L);核型分析及染色体芯片结果均正常;先证者及弟弟表现为智力低下、轻微共济失调及不自觉发笑等.结论 UBE3A基因第16外显子IVS15-1G>C和c.2540 C>T突变分别为两家系的致病原因,均为未报道过的新突变.UBE3A基因大片段缺失对患者临床表型影响更明显.

The autism spectrum disorders (ASDs) are a collection of human neurological disorders with heterogeneous etiol ogies.Hyperactivity of E3 ubiquitin (Ub) ligase UBE3A,stemming from 15q11-q13 copy number variations,accounts for 1％-3％ of ASD cases worldwide,but the underlying mechanisms remain incompletely characterized.Here we report that the functionality of ALDH1A2,the rate-limiting enzyme of retinoic acid (RA) synthesis,is negatively regulated by UBE3A in a ubiquitylation-dependent manner.Excessive UBE3A dosage was found to impair RA-mediated neuronal homeostatic synaptic plasticity.ASD-like symptoms were recapitulated in mice by overexpressing UBE3A in the prefrontal cortex or by administration of an ALDH1A antagonist,whereas RA supplements significantly alleviated excessive UBE3A dosage-induced ASD-like phenotypes.By identifying reduced RA signaling as an underlying mechanism in ASD phenotypes linked to UBE3A hyperactivities,our findings introduce a new vista of ASD etiology and facilitate a mode of therapeutic development against this increasingly prevalent disease.

目的 调查广东惠州地区异常血红蛋白(Hb)的分子流行病学特征.方法 对2015年7月至2017年6月在该院体检、就诊的22546例调查对象进行血常规和H b电泳筛查,对电泳异常标本进行基因测序.结果 共发现102例异常H b患者,发生率为0.45％,其中J区带15例,K区带15例,Q区带22例,G/D区带31例,E区带19例.基因测序结果显示,α珠蛋白突变体55例,基因频率为1.02×10-3;β-珠蛋白突变体47例,基因频率为1.22×10-3;发现8种α珠蛋白突变体,包括32例Hb CS,7例Hb G-Honolulu,7例Hb Q-Thai-land,3例Hb Queens,2例Hb Ottawa,2例Hb Beijing,Hb Ube-2和Hb Arya各1例;发现6种β-珠蛋白突变体,包括19例Hb E,12例Hb New York,10例Hb G-Taipei,Hb J-Bangkok、Hb J-Kaohsiung和Hb Maputo各2例.结论 惠州地区是异常Hb的高发区,且基因种类较多,符合所在广东地区异常Hb的地域流行特征.

目的 分析深圳地区人群异常血红蛋白病的分子特征及血液学表型.方法 收集我院20734例毛细管电泳筛查样本,对其中检出有异常血红蛋白的样本采用Gap-PCR法、PCR-RDB法和DNA测序法进行地贫基因和异常血红蛋白基因分型鉴定,并分析红细胞参数.结果 共检出17种异常血红蛋白,均为杂合子,检出率为0.405％(84/20734);其中,检出2例Hb J-Bangkok复合--SEA杂合子,1例J-Wenchang-Wuming复合-α4.2杂合子,2例Hb Q-Thailand复合-α4.2杂合子,1例Hb Queens复合IVS-II-81杂合子,1例Hb Ube-2复合CD118杂合子,1例Hb E复合αWS杂合子,1例Hb E复合α3.7纯合子.除Hb E和Hb Q-Thailand外,其余异常血红蛋白类型的单纯杂合子血液学表型均正常;单纯Hb E杂合子、Hb E合并 αWS杂合子和Hb Q-Thailand合并-α4.2杂合子对血液学表型影响较轻;Hb E复合-α3.7纯合子和Hb J-Bangkok复合--SEA杂合子表现为轻型地贫特征;Hb J-Wenchang-Wuming复合-α4.2杂合子、Hb Queens复合IVS-Ⅱ-81杂合子以及Hb Ube-2复合CD118杂合子的血液学表型正常.结论 除Hb E和Hb Q-Thailand外,其他类型单纯杂合子血液学表型正常,合并地贫时可表现为贫血特征,贫血程度取决于合并的地贫类型.

目的：分析Angelman 综合征( AS)的基因型和表型之间的关联,并探讨单核苷酸多态性比较基因组杂交技术( SNP aCGH)对AS诊断的价值。方法将11例临床诊断AS的患儿分别行脑电图检查、格赛尔( Gesell)评分,予甲基化聚合酶链反应初筛,再予SNP aCGH全基因组扫描,获得染色体异常拷贝数据并分析。结果(1)11例患儿遗传诊断为AS,缺失型10例(其中Ⅱ型缺失6例,I型缺失4例),单亲二倍体(UPD)1例。(2)15q11-q13为染色体异常拷贝区域,根据其起始范围,查阅人类孟德尔遗传在线基因库(OMIM),明确缺失片段中主要包括以下基因：MKRN3、MAGEL2、NDN、SNRPN、SNURF、GABRB3、GABRA5、GABRG3、UBE3A、OCA2、ATP10A。(3)缺失型患儿身高及体质量较健康同龄儿低3~5个标准差,UPD患儿身高及体质量低于健康同龄儿约1.5个标准差。 Gesell评估显示Ⅰ型缺失为重度、极重度智力残疾；Ⅱ型缺失为中度智力残疾；UPD患儿为轻度智力残疾。发现色素沉着障碍共8例,包括UPD患儿。1例Ⅰ型缺失和UPD患儿脑电图提示偶发棘波,另1例Ⅰ型缺失,为界限性脑电图,其余患儿为阵发性中高波幅的棘波、慢波、棘慢波(2.5~3.0 Hz)。结论SNP aCGH技术在确诊AS的同时能明确基因病理分型,检出染色体拷贝数异常区域的起始点所在,明确缺失片段大小及片段中所涉及的基因,利于表型和基因型的关联分析,提供针对性的遗传咨询,且为AS发病机制、基因功能定性等研究提供一个良好的技术平台。

Autism spectrum disorder (ASD) is a neurodevelopmental disorder with considerable clinical and genetic heterogeneity.In this study,we identified all classes of genomic variants from whole-genome sequencing (WGS) dataset of 32 Chinese trios with ASD,including de novo mutations,inherited variants,copy number variants (CNVs) and genomic structural variants.A higher mutation rate (Poisson test,P ＜ 2.2 × 10-16) in exonic (1.37 × 10-8) and 3'-UTR regions (1.42 × 10-8) was revealed in comparison with that of whole genome (1.05 × 10-8).Using an integrated model,we identified 87 potentially risk genes (P＜0.01) from 4832 genes harboring various rare deleterious variants,including CHD8 and NRXN2,implying that the disorders may be in favor to multiple-hit.In particular,frequent rare inherited mutations of several microcephaly-associated genes (ASPM,WDR62,and ZNF335) were found in ASD.In chromosomal structure analyses,we found four de novo CNVs and one de novo chromosomal rearrangement event,including a de novo duplication of UBE3A-containing region at 15q11.2-q13.1,which causes Angelman syndrome and microcephaly,and a disrupted TNR due to de novo chromosomal translocation t(1;5)(q25.1;q33.2).Taken together,our results suggest that abnormalities of centrosomal function and chromatin remodeling of the microcephaly-associated genes may be implicated in pathogenesis of ASD.Adoption of WGS as a new yet efficient technique to illustrate the full genetic spectrum in complex disorders,such as ASD,could provide novel insights into pathogenesis,diagnosis and treatment.

泛素接合酶E2Q1(UBE2Q1)属泛素蛋白酶体系统,本研究旨在探讨其在肝细胞癌(HCC)中的临床意义.一、材料与方法1.材料:南通大学附属医院2005年1月至2010年12月手术切除86例HCC石蜡标本,男69例,女17例,8对新鲜肝癌及配对的癌旁组织标本.2.Western blot检测:新鲜组织处理后用紫外分光光度仪测定蛋白质含量,显影和定影,测定UBE2Q1表达.3.病理切片免疫组织化学:标记指数=阳性细胞数/细胞计数的总数×100％,以平均值为界,分为UBE2Q1低表达组和高表达组,与细胞核增殖抗原(Ki-67)对照.

目的 为1对临床诊断为“智力低下、癫痫”的同胞兄弟提供遗传学诊断,探讨其发病机制.方法 用微阵列比较基因组杂交(array comparative genomic hybridization,aCGH)技术对2例患儿及其父母、外祖父母进行检测;采用甲基化特异性的多重连接探针扩增(methylation-specific multiplex ligation-dependent probe amplification,MS-MLPA)对其家系进行分析,进一步明确患者的缺失区域.结果 aCGH检测发现患儿15q11.2区存在138 kb的缺失,涉及部分UBE3A基因.MS-MLPA检测证实患儿UBE3A基因第8～13外显子存在杂合性缺失.患儿母亲及外祖父携带相同的缺失,患儿父亲、外祖母及其他家族成员则未发现缺失.数据库检索提示该缺失为UBE3A罕见的突变形式,部分检测方法对其存在漏检的可能性.结论 患儿所患的Angleman综合征的发病机制为母源性UBE3A基因的部分缺失,非常罕见.

目的 明确1例超声提示宫内生长受限胎儿的病因,同时验证扩展的无创产前检测技术针对此类微缺失改变的灵敏度和有效性.方法 采用高通量测序技术同时检测胎儿脐带血染色体拷贝数及孕妇外周血胎儿游离DNA拷贝数,采用常规G显带分析技术分析胎儿及父母的核型,采用荧光原位杂交技术对结果进行验证.结果 胎儿脐带血染色体拷贝数检测提示胎儿15号染色体q11.2-q13.1处缺失4.88Mb,覆盖了Prader-Willi综合征(2型)和Angelman综合征(2型)约99％区域,且包含了两个关键基因SNRPN及UBE3A.孕妇外周血胎儿游离DNA拷贝数微缺失检测提示胎儿15号染色体q12处缺失4.6Mb,为Prader-Willi/Angelman综合征高风险.胎儿及父母染色体在320-400条带水平未见明显异常.荧光原位杂交检测结果证实胎儿15q12处存在缺失.结论 该胎儿生长受限病例可能由Prader-Willi/Angelman综合征引起.通过扩展的无创产前检测方法可能检出该微缺失综合征.

目的 探讨儿童 Angelman综合征( AS)的临床表型、脑电图( EEG)特征和基因型的相关性.方法 回顾性分析2017年6月至2018年6月复旦大学附属儿科医院神经科登记随访的103例AS患儿的临床、EEG、基因特征和癫痫结局的关系.结果 1. AS 103例患儿中男48例(46. 6﹪),女55例(53. 4﹪).2.基因型中,15q11. 2﹣q13缺失占86. 4﹪(89/103例),父源性单亲二倍体、印迹中心缺陷和UBE3A基因突变分别为3. 9﹪(4/103例)、1. 9﹪(2/103例)和7. 8﹪(8/103 例).3.临床均表现为大笑或愉快时微笑和全面发育迟滞;98. 1﹪(101/103例)存在运动障碍,口腔运动不协调或吸吮障碍和走路异常姿势分别为97. 1﹪(100/103例)和67. 0﹪(69/103例);面容异常中获得性头围偏小或小头畸形、枕骨稍平(或凹陷)和牙齿稀疏分别为61. 2﹪(63/103例)、85. 4﹪(88/103例)和44. 7﹪(46/103例).4.行为问题中喜欢玩水、睡眠问题和婴幼儿喂养困难分别为86. 4﹪(89/103例)、89. 3﹪(92/103例)和85. 5﹪(88/103例);与非缺失型相比,缺失型患儿睡眠障碍[94. 4﹪(84/89例)比57. 1﹪(8/14例)]和婴幼儿喂养困难[93. 3﹪(83/89例)比35. 7﹪(5/14例)]更常见,差异均有统计学意义(均P＜0. 05).5.有77. 7﹪(80/103例)的患儿伴癫痫发作,癫痫发病年龄8个月～6岁,80. 8﹪(59/73例)的患儿3岁前出现癫痫发作.与非缺失型相比,多种癫痫发作形式常见于缺失型[41. 7﹪(32/68例)比0(0例)],差异有统计学意义(P＜0. 05);56例抗癫痫药物疗效明确的患儿,癫痫发作控制组失张力发作较癫痫发作未完全控制组常见[48. 3﹪(14/29例)比18. 5﹪(4/27例)],差异有统计学意义(P＜0. 05).结论 AS患儿的睡眠问题、婴幼儿期喂养困难和多种癫痫发作形式更常见于缺失型,相对于其他癫痫发作类型,失张力发作更易控制.