目的:探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及其作用机制。方法:体外培养胃癌MKN-45细胞；在所研究胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立miR-30a-5p的敲除和过表达模型，胃癌MKN-45细胞分为3组：miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组，miR-30a-5p过表达RNA组和空白对照组(NC)，荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-catenin信号通路相关标志物Cyclin D1(CCND1)基因的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与Wnt信号通路下游关键基因CCND1的靶向调节关系；在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮，分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组及miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组，应用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力，细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力。各组间比较采用 t检验。 结果:qPCR实验结果显示过表达miR-30a-5p能够显著抑制CCND1在mRNA的表达(0.58±0.05， t＝11.39， P<0.01)，Western blot实验结果显示，CCND1蛋白水平，miR-30a-5p inhibitor组较NC组明显上升(284 437±2 127比215 273±4 097， t＝25.95， P<0.01)，miR-30a-5p mimics组较NC组明显下降(85 586±309比197 661±948， t＝194.70， P<0.01)；双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中WNT信号通路活性较对照组显著降低(0.39±0.03， t＝13.96， P<0.01)；CCK-8结果显示2 d后miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p inhibitor组[(93.09±4.18)%比(146.42±5.80)%， t＝12.92， P<0.01]；miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p Inhibitor NC组[(53.80±3.54)%比(100.00±2.18)%， t＝19.25， P<0.01]。Transwell结果显示miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5p inhibitor组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个， t＝4.44， P<0.05]；miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5p Inhibitor NC组[(19.33±6.66)个比(45.00±4.58)个， t＝5.50， P<0.01]。 结论:miR-30a-5p可以调控Wnt/β-catenin信号通路，过表达miR-30a-5p后可抑制Wnt/β-catenin信号通路降低胃癌细胞中Cyclin D1(CCND1)的表达，进一步影响胃癌的增殖与侵袭。

目的 探究缺氧状态下的子宫内膜腺上皮细胞(EEC)增殖和迁移的可能机制.方法 分别提取缺氧(1％氧浓度,缺氧组)和常氧(21％氧浓度,常氧组)条件下EEC的RNA进行高通量测序(RNA-sequence),分析两组细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达.利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法对差异表达的miRNA即has-miR-215-5p进行鉴定,通过miRNA靶基因数据库网站(Target Scan)分析has-miR-215-5p的靶基因.Western Blot检测两组细胞中靶基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)的蛋白表达水平,细胞计数实验检测两组EEC的增殖情况,划痕实验检测两组EEC的迁移能力.结果 测序结果显示,缺氧组EEC中has-miR-215-5p表达显著上升(P＜0.001),RT-qPCR验证结果与测序结果一致.miRNA Target Scan数据库检索结果显示,BLCAP是has-miR-215-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示has-miR-215-5p与BLCAP-3'-UTR结合,结合位点突变后结合活性消失.Western Blot结果显示,与常氧组相比,缺氧组EEC中的BLCAP蛋白表达显著下降(P＜0.001).CCK-8及划痕实验分别提示与常氧组相比,缺氧组的EEC增殖能力显著降低、迁移能力显著增强(P＜0.001).结论 缺氧条件下EEC中has-miR-215-5p可能通过与BLCAP-3'-UTR结合,抑制BLCAP的表达活性,导致EEC的增殖降低与迁移增强.

目的 探讨基于多个外泌体微小RNA(miRNA)表达水平构建子痫前期(PE)风险模型的可行性,并验证其对PE的预测效能.方法 选择2019年6月—2021年12月建档且孕周≤20周的孕妇1037例作为研究对象,入组后收集所有患者首次建档的一般资料及实验室检查资料.通过qRT-PCR分析所有样本中外泌体miRNA表达情况(包括miR-155-5p、miR-215-5p、miR-203a-3p、miR-199a-5p及miR-125a-3p).而后对所有患者随访至妊娠结束,统计随访期间PE发生情况并根据结果将患者分为PE组及对照组.使用Cox回归分析PE的影响因素,以ggrisk包构建多miRNA风险模型,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评估所构建模型对PE的预测效果.结果 截至2022年10月31日随访结束,最终完成随访974例(93.92%).PE组65例和对照组909例.PE组年龄、孕前体质量指数(BMI)、孕12周腰围均大于对照组,吸烟史及饮酒史占比高于对照组(P＜0.05).PE组三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、血小板分布宽度、平均血小板体积、血红蛋白、miR-155-5p、miR-199a-5p、miR-215-5p水平均高于对照组,而促甲状腺激素、miR-125a-3p及miR-203a-3p水平低于对照组(P＜0.05).miR-125a-3p、miR-155-5p、miR-199a-5p、miR-203a-3p及miR-215-5p表达水平为PE发生的独立预测因子(P＜0.05).由上述外泌体miRNA构建的风险预测模型在PE发生方面具有良好的预测价值(AUC=0.998,P＜0.001),敏感度为96.92%(63/65),特异度为 93.94%(854/909).结论 miR-125a-3p、miR-155-5p、miR-199a-5p、miR-203a-3p及miR-215-5p与PE的发生相关,以上述外泌体中5个miRNA构建的PE预测模型效果较好.

目的 筛选原发性骨性关节炎(OA)膝关节软骨细胞中差异表达的环状RNA(circRNA)及miRNA,并分析其生物学功能、相关代谢通路及相互作用.方法 首先用GeneSpring software V13.0软件筛选出5例OA及5例正常对照的膝关节软骨细胞差异表达的CircRNA,然后对差异表达的CircRNA进行基因本体论(GO)及代谢通路分析(采用KEGG通路数据库);将OA和正常对照膝软骨细胞的miRNA原始数据(下载自ArrayExpress,获取号为:E-MTAB-3514)进行对数转换,然后使用Quantile方法对数据进行标准化处理,以P<0.05,OA和正常对照膝软骨细胞的miRNA差异倍数≥2或≤0.5为筛选条件,用R包limma中的经验贝叶斯模型(eBayes)筛选差异表达的miR-NA;用miRror工具进行差异miRNA的靶基因预测,使用KOBAS软件对找到的靶基因进行GO及代谢通路注释富集分析.用miRanda软件对0A膝软骨细胞差异表达的miRNA进行miRNA-circRNA相互作用预测分析.结果 与正常软骨细胞比较,OA膝关节软骨细胞中共筛选出1380个表达差异的circRNA,其中215个差异circRNA表达上调,1165个表达下调.分子功能层面,差异表达的circRNA主要影响GTP酶激活剂活性、腺苷核糖核苷酸结合、钙通道调节剂活性;细胞组成层面,差异表达的circRNA主要影响细胞外基质成分、带状胶原纤维、纤维状胶原蛋白三聚体;生物学过程层面,差异表达的circRNA主要影响细胞成分形态发生、软骨细胞发育和肢体发育.差异表达的circRNA相关代谢通路与糖原生物合成、补体和凝血级联、PDGF信号途径、胶原纤维组装和其他多聚体结构有关.与正常软骨细胞比较,OA膝关节软骨细胞中共筛选出差异表达miRNA 24个,其中上调表达及下调表达的miRNA各12个.生物学过程层面,差异表达的miRNA主要参与含核碱基的化合物生物合成过程、细胞质翻译终止、神经生长和细胞发育.细胞组成层面,主要影响细胞内部分、翻译释放因子复合体、膜结合的细胞器、核转录抑制因子复合物;在细胞组成层面,差异表达的miRNA主要影响有机环状化合物结合、核酸结合和杂环化合物结合;差异表达的miRNA主要与蛋白质泛素化、白细胞跨内皮迁移、泛素蛋白酶体途径、基因表达和蛋白质代谢有关.与has-miR-762相关的circRNA有71个,与has-miR-18a-3p相关的circRNA有25个,与has-miR-136-5p相关的cir-cRNA有5个,与has-miR-3131相关的circRNA有17个,与has-miR3-189-3p相关的circRNA有29个.结论 OA膝关节软骨细胞中差异表达的circRNA有1380个,其中215个上调表达,1165个下调表达,差异表达的circRNA主要影响GTP酶激活剂活性、腺苷核糖核苷酸结合等分子功能,细胞外基质成分、带状胶原纤维等细胞成分,糖原生物合成、补体和凝血级联等相关代谢通路.OA膝关节软骨细胞差异表达miRNA 24个,其中上、下调表达的miR-NA各12个,差异表达的miRNA主要参与含核碱基的化合物生物合成过程、细胞质翻译终止等分子功能,细胞内部分、翻译释放因子复合体等细胞成分,蛋白质泛素化、白细胞跨内皮迁移等相关代谢通路.circRNA和miRNA共同通路有Cell adhesion molecules pathway、Circadian entrainment pathway;circRNA-miRNA相互作用网络中,has-miR-762、has-miR-18a-3p、has-miR-136-5p与circRNA关系最为密切.