目的:探讨银杏双黄酮通过调控细胞周期对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人胃癌MKN-45细胞；银杏双黄酮溶于二甲基亚砜(DMSO)中，使用MKN-45专用培养基配制系列浓度的银杏双黄酮溶液，分为0 μm(含1‰浓度的DMSO)组、12.5 μm组、25.0 μm组、50.0 μm组、100.0 μm组，分别处理胃癌MKN-45细胞48 h，使用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证细胞的增殖能力，并确定半数抑制浓度，以供后续实验使用；在培养的胃癌细胞MKN-45中分别加入1‰DMSO、浓度50.0 μm的银杏双黄酮及c-myc抑制剂处理48 h，分为空白对照(NC)组、银杏双黄酮组及银杏双黄酮＋c-myc抑制剂组，使用流式细胞术验证银杏双黄酮对胃癌细胞的凋亡及细胞周期的影响，蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路下游关键基因c-myc、凋亡相关指标B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)及细胞周期相关指标周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白B1(CCNB1)的表达水平。各组间比较比较采用 t检验。 结果:CCK-8结果显示12.5 μm组细胞生存率低于0 μm组[(83.75±1.16)%比(102.26±3.08)%， t＝10.83， P<0.01]；25.0 μm组细胞生存率生存率低于0 μm组[(75.60±1.64)%比(102.26±3.08)%， t＝12.68， P<0.01]；50.0 μm组细胞生存率明显低于0 μm组[(53.29±1.33)%比(102.26±3.08)%， t＝30.36， P<0.01]；100.0 μm组细胞生存率明显低于0 μm组[(25.41±1.02)%比(102.26±3.08)%， t＝47.66， P<0.01]，测得48 h时胃癌MKN-45细胞半数抑制浓度(IC 50)值为51.39；流式细胞术实验结果显示银杏双黄酮可诱导胃癌MKN-45细胞凋亡(凋亡率由12.36%上升到49.60%)，并导致胃癌细胞G 2期阻滞(G 2/M期的细胞数量从1.85%上升到27.00%)；Western blot实验结果显示，银杏双黄酮组bax蛋白水平表达高于NC组(571 241±7 627比364 248±351， t＝71.72， P<0.01)；银杏双黄酮组bcl-2蛋白水平低于NC组(604 069±7 597比681 315±7 017， t＝19.76， P<0.01)；银杏双黄酮组CDK2蛋白水平表达低于NC组(627 653±9 488比742 450±5 791， t＝27.32， P<0.01)；银杏双黄酮组cyclinb1蛋白水平表达低于NC组(558 302±11 687比708 767±20 598， t＝16.81， P<0.01)；银杏双黄酮组WNT信号通路下游基因c-myc蛋白水平表达量低于对照组(643 589±6 304比836 895±6 428， t＝56.80， P<0.01)；银杏双黄酮＋c-myc抑制剂组c-myc蛋白水平表达量低于银杏双黄酮组(504 992±6 779比643 589±6 304， t＝39.61， P<0.01)。 结论:银杏双黄酮通过调控Wnt信号通路，降低胃癌细胞中c-myc的表达来调控细胞周期，从而影响胃癌的增殖与凋亡能力。

目的:探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及其作用机制。方法:体外培养胃癌MKN-45细胞；在所研究胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立miR-30a-5p的敲除和过表达模型，胃癌MKN-45细胞分为3组：miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组，miR-30a-5p过表达RNA组和空白对照组(NC)，荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-catenin信号通路相关标志物Cyclin D1(CCND1)基因的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与Wnt信号通路下游关键基因CCND1的靶向调节关系；在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮，分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组及miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组，应用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力，细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力。各组间比较采用 t检验。 结果:qPCR实验结果显示过表达miR-30a-5p能够显著抑制CCND1在mRNA的表达(0.58±0.05， t＝11.39， P<0.01)，Western blot实验结果显示，CCND1蛋白水平，miR-30a-5p inhibitor组较NC组明显上升(284 437±2 127比215 273±4 097， t＝25.95， P<0.01)，miR-30a-5p mimics组较NC组明显下降(85 586±309比197 661±948， t＝194.70， P<0.01)；双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中WNT信号通路活性较对照组显著降低(0.39±0.03， t＝13.96， P<0.01)；CCK-8结果显示2 d后miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p inhibitor组[(93.09±4.18)%比(146.42±5.80)%， t＝12.92， P<0.01]；miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p Inhibitor NC组[(53.80±3.54)%比(100.00±2.18)%， t＝19.25， P<0.01]。Transwell结果显示miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5p inhibitor组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个， t＝4.44， P<0.05]；miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5p Inhibitor NC组[(19.33±6.66)个比(45.00±4.58)个， t＝5.50， P<0.01]。 结论:miR-30a-5p可以调控Wnt/β-catenin信号通路，过表达miR-30a-5p后可抑制Wnt/β-catenin信号通路降低胃癌细胞中Cyclin D1(CCND1)的表达，进一步影响胃癌的增殖与侵袭。

目的:探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Frizzled 2(FZD2)基因激活Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的作用机制。方法:体外培养胃癌MKN-45细胞；在胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立微小RNA(miR)-30a-5p的敲除和过表达模型，胃癌MKN-45细胞分为3组：miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组，miR-30a-5p过表达RNA(miR-30a-5p mimics)组和空白对照组(negative control，NC)，荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-30a-5p的直接靶基因FZD2基因及Wnt/β-catenin信号通路下游关键基因c-myc的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与直接靶基因FZD2的靶向调节关系；在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮，分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力，细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力；通过免疫组织化学方法验证FZD2基因的蛋白表达水平。各组间比较采用 t检验。 结果:qPCR实验结果显示FZD2 mRNA表达水平miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(0.62±0.02比1.01±0.13， t＝5.042， P<0.01)，c-myc mRNA表达水平miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(0.46±0.07比1.01±0.15， t＝5.805， P<0.01)，Western blot实验结果显示，FZD2蛋白表达水平miR-30a-5p inhibitor组明显高于NC组(1 181 347.00±39.27比206 382.00±8.33， t＝1 080.000， P<0.01)，miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(996 269.00±54.50比1 168 775.00±99.80， t＝1 104.000， P<0.01)，c-myc蛋白表达水平miR-30a-5p inhibitor组明显高于NC组(3 307 840.00±81.00比253 663.00±33.29， t＝1 072.000， P<0.01)，miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(138 137.00±131.68比205 780.00±77.69， t＝766.300， P<0.01)；双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中FZD2基因活性显著低于对照组(1.02±0.14比0.59±0.06， t＝99.638， P<0.01)；CCK-8结果显示转染48 h后miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组细胞增殖能力低于miR-30a-5p inhibitor组(93.09±4.18比146.42±5.80， t＝12.920， P<0.01)。Transwell结果显示miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量低于miR-30a-5p inhibitor组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个， t＝4.440， P<0.05]。免疫组织化学结果显示基因FZD2蛋白在miR-30a-5p低表达[miR-30a-5p/β-肌动蛋白(β-actin)<0.05]的胃癌组织中表达增强(评分≥5分)，与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)。 结论:在胃癌中miR-30a-5p可直接靶向FZD2，通过抑制FZD2的表达，降低Wnt信号通路的活性，从而抑制胃癌的发生与发展。

目的:探讨银杏双黄酮对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)所致神经功能损伤和血管新生的影响及潜在机制.方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、I/R模型组、银杏双黄酮(40 mg/kg)处理组,每组 20只.采用大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)大鼠模型模拟脑I/R,且在再灌注后连续注射银杏双黄酮 7 d.TTC染色测定各组大鼠脑梗死体积.通过尼氏染色和神经元特异性核蛋白(neuron-specific nuclear protein,NeuN)免疫组织化学分析各组大鼠缺血半暗带中的神经元密度.CD31标记法与BrdU/血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)双标免疫荧光染色法分析各组大鼠缺血半暗带中微血管密度和血管新生情况.Western blot检测各组大鼠缺血半暗带中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的水平.结果:与I/R模型组比较,银杏双黄酮处理组脑梗死体积显著变小(P<0.01),缺血半暗带中神经元、微血管密度和血管新生以及HIF-1α、VEGF和HSP70表达水平显著增高(P<0.01).结论:银杏双黄酮能促进MCAO大鼠血管新生和神经功能恢复,并上调缺血半暗带中HSP70、VEGF和HIF-1α的表达.

目的 建立曼地亚红豆杉Taxus×media曲指纹图谱,对曼地亚红豆杉曲质量控制和资源开发提供科学依据.方法 采用HPLC法建立 45 批曼地亚红豆杉曲的指纹图谱,通过对照品比对,对共有峰进行指认,确定并建立 7 种有效成分含量的测定方法.在指纹图谱基础上,结合聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘法-判别分析等筛选出不同发酵程度曼地亚红豆杉曲间差异性标志物.结果 45 批曼地亚红豆杉共有32 个共有峰,指认了 18 种成分,相似度均大于 0.9.通过聚类分析将不同发酵程度曼地亚红豆杉曲分为5类,主成分分析提取了4个主成分;综合分析筛选10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱、紫杉醇、7-表紫杉醇、银杏双黄酮、金松双黄酮作为曼地亚红豆杉曲的质控成分,质量分数范围分别为0.071 5～0.123 7、0.124 5～0.117 1、0.113 5～0.126 1、0.122 5～0.162 7、0.071 0～0.089 3、0.809 1～1.110 2、1.003 1～1.994 8 mg/g.结论 建立的指纹图谱及多成分含量测定方法专属性强,稳定,可靠,为曼地亚红豆杉曲的质量控制及资源开发提供参考.

目的 优化银星养脑方醇提工艺.方法 基于单因素实验,以乙醇浓度、提取时间、提取溶剂倍数为影响因素,采用Box-Behnken响应面法,以阿魏酸、3,6'-二芥子酰基蔗糖、金松双黄酮、异银杏素的转移率和浸膏得率为评价指标,结合G1-熵权法计算综合评分,优选银星养脑方最佳醇提工艺.结果 建立了工艺评价函数模型,模型预测最佳提取工艺为6倍量60％的乙醇提取1.4 h,提取2次.结论 该提取方法稳定可行,可为银星养脑方的批量生产提供参考.

目的 探讨银杏总黄酮对血管性痴呆大鼠神经元损伤的影响及作用机制.方法 双侧颈总动脉永久性结扎法建立血管性痴呆大鼠模型,随机分为模型组,50、100、200 mg/kg银杏总黄酮组,每组12只;另取12只大鼠为假手术组.各银杏总黄酮组灌胃给予相应剂量的银杏总黄酮,连续21 d.穿梭箱实验评价大鼠学习记忆能力,记录步入潜伏期、暗室中花费的总时间.酶联免疫吸附试验测定脑组织乙酰胆碱、5-羟色胺浓度和血清白细胞介素(IL)-1β、IL-17、IL-6浓度.Western印迹检测海马组织中自噬相关蛋白和PTEN诱导假定激酶(PINK)1/兔抗人帕金蛋白(Parkin)信号通路蛋白表达.结果 模型组步入潜伏期明显低于假手术组,暗室中花费的总时间明显长于假手术组(P＜0.01);与模型组相比,不同浓度银杏总黄酮组步入潜伏期明显升高,暗室中花费总时间明显降低(P＜0.05),随着银杏总黄酮浓度的增加上述改变逐渐明显.模型组脑组织乙酰胆碱、5-羟色胺水平明显低于假手术组(P＜0.01),不同浓度银杏总黄酮组明显高于模型组(P＜0.01),随着银杏总黄酮浓度的增加脑组织乙酰胆碱、5-羟色胺水平明显升高.模型组血清IL-1β、IL-17、IL-6水平明显高于假手术组(P＜0.01),不同浓度银杏总黄酮组明显低于模型组(P＜0.01),随着银杏总黄酮浓度的增加血清IL-1β、IL-17、IL-6水平明显降低.模型组海马组织自噬相关蛋白Beclin1、鼠抗人微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ表达水平与假手术组相比升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);不同浓度银杏总黄酮组海马组织自噬相关蛋白表达水平明显高于模型组和假手术组(P＜0.05);随着银杏总黄酮浓度的增加自噬相关蛋白表达水平明显提升.模型组海马组织PINK1蛋白、Parkin蛋白与假手术组相比升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);不同浓度银杏总黄酮组海马组织PINK1、Parkin蛋白表达水平明显高于模型组和假手术组(P＜0.05);随着银杏总黄酮浓度的增加,PINK1、Parkin蛋白表达水平明显提升.结论 银杏总黄酮可激活PINK1/Parkin信号通路,降低血管性痴呆大鼠炎性因子水平,减轻神经元炎症损伤;此外还能够增强神经元自噬作用,减轻神经元损伤,改善痴呆症状.

目的:研究贡山三尖杉Cephalotaxus lanceolata K.M.Feng的化学成分.方法:利用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、MCI gel、RP-C18 等柱色谱方法进行化合物的分离纯化,根据理化性质和波谱方法进行结构鉴定.结果:从贡山三尖杉枝叶中分离得到 30 个化合物,分别鉴定为:三尖杉碱(1)、高三尖杉酯碱(2)、氧桥三尖杉碱(3)、诸葛菜碱D(4)、芹菜素(5)、槲皮素(6)、柯伊利素(7)、木犀草素(8)、芦丁(9)、牡荆素(10)、6-C-methylnaringeninp(11)、芹菜素-6-C-β-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(12)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(13)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(14)、穗花杉双黄酮-7-甲醚(15)、金松双黄酮(16)、银杏双黄酮(17)、熊果酸(18)、2α-hydroxyursolic acid(19)、常春藤皂苷元-28-O-β-D-葡萄糖酯苷(20)、邻苯二甲酸-二(2-乙基-己基)酯(21)、硬脂酸(22)、单棕榈酸甘油酯(23)、巨豆-7-烯-3β,4α,9-三醇(24)、肌苷(25)、腺苷(26)、甘露醇(27)、二十九烷-15-醇(28)、β-谷甾醇(29)、胡萝卜苷(30).结论:其中,化合物 4、11～14、20、21、24～26 为首次从该属植物中分离得到,化合物 8～10、15～17 为首次从该植物中分离得到.

目的 探究Sirt1在急性炎症状态下糖尿病小鼠肾损伤中的作用及分子机制.方法 选择SPF级C57BL/6J雄性小鼠40只,8周龄,体重20～25 g.采用随机数字表法将小鼠分为五组:对照组(C组)、糖尿病组(D组)、脂多糖(LPS)+糖尿病组(L组)、LPS+糖尿病+Sirt1阻断剂EX527组(E组)和LPS+糖尿病+Sirt1激动剂银杏黄酮苷元组(G组),每组8只.糖尿病小鼠模型制备成功后,L组腹腔注射LPS 10 mg/kg;E组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射EX527 5 mg/kg(溶于DMSO 0.2 ml);G组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射银杏黄酮苷元200 mg/kg(溶于DMSO 0.2 ml);C组和D组在相同时点腹腔注射2％DMSO 0.15 ml.收集24 h尿液测定24 h尿量和24 h尿蛋白浓度,眼球取血检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)浓度.取肾组织后采用ELISA法检测IL-1β、IL-18浓度,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量,铁离子抗氧化能力法检测总抗氧能力(T-AOC),qPCR 和 Western blot 法检测 Sirt1、caspase-1、NLRP3、ASC mRNA 表达量和蛋白含量,免疫共沉淀法检测乙酰化FoxO3a蛋白含量,二氢乙锭染色法计算活性氧(ROS)含量,免疫荧光双重染色法计算细胞焦亡率,并进行HE染色,光镜下观察病理.结果 与C组比较,D组、L组、E组和G组24 h尿量明显增多,尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显升高(P＜0.05),T-AOC活力明显降低(P＜0.05).与D组比较,L组、E组和G组24 h尿量明显增多,尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显升高(P＜0.05),T-AOC活力明显降低(P＜0.05).与L组比较,E组24 h尿量明显增多,尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、乙酰化FoxO3a蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显升高(P＜0.05),T-AOC活力、Sirt1 mRNA和蛋白含量、FoxO3a mRNA表达量均明显降低(P＜0.05);G组24 h尿量明显减少,尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、乙酰化FoxO3a蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显降低(P＜0.05),T-AOC活力、Sirt1 mRNA表达量和蛋白含量均明显升高(P＜0.05).与E组比较,G组24 h尿量明显减少,尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO浓度、NLRP3、caspase-1和ASC mRNA表达量和蛋白含量、乙酰化FoxO3a蛋白含量、ROS含量和细胞焦亡率均明显降低(P＜0.05),T-AOC活力、Sirt1 mRNA表达量和蛋白含量均明显升高(P＜0.05).结论 在急性炎症状态下的糖尿病小鼠中,Sirt1升高可以降低乙酰化FoxO3a蛋白含量,减少小鼠尿量,降低尿蛋白、Scr、BUN含量、肾组织中炎性因子浓度和细胞焦亡水平,减轻氧化应激和炎症水平,从而减轻肾损伤.

目的:探讨黄芩茎叶黄酮(SSF)对冈田酸(OA)引起的大鼠脑内双螺旋细丝(PHF)异常生成的抑制作用及其对蛋白磷酸酶(PP)的调节机制.方法:雄性SD大鼠,采用侧脑室注射OA(200 ng/kg)建立记忆障碍模型,Morris水迷宫进行记忆障碍模型筛选,取造模成功大鼠每日分别灌胃25、50和100 mg/kg SSF,连续36 d.Western blot法测定大鼠皮层与海马组织中PHF、PP1、PP2A-Cα、PP2A-Cβ、PP2CA和PP2CB的蛋白表达,以银杏叶黄酮作为阳性对照药.结果:与假手术组大鼠相比,模型组大鼠皮层与海马中PHF的蛋白表达明显增加(P<0.01),皮层与海马组织中PP2A-Cα和PP2A-Cβ及海马组织中PP2CB蛋白表达明显降低(P<0.05),皮层中PP2CA和PP2CB的蛋白表达明显增加(P<0.01),皮层中PP1的蛋白表达明显降低(P<0.01).与模型大鼠比较,灌胃25、50和100 mg/kg SSF 36 d不同程度地逆转了OA所致大鼠皮层与海马组织中PHF、PP2A-Cα和PP2A-Cβ及皮层中PP1的蛋白表达异常,对PP2CA和PP2CB蛋白表达无显著性影响,银杏叶黄酮也表现出与SSF相似的结果.结论:SSF能够明显抑制OA引起的大鼠脑内PHF异常生成,该作用可能与SSF调节大脑皮层和海马组织中PP1、PP2A-Cα和PP2A-Cβ的蛋白表达有关,而与调节PP2CA和PP2CB的关系较小.