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hsa_circ_0006948靶向miR-490-3p调控自噬相关蛋白7对骨肉瘤细胞增殖迁移和侵袭的影响
编辑人员丨4天前
目的:探讨hsa_circ_0006948(circ_0006948)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:120例骨肉瘤组织和40例癌旁正常组织标本来源于2009—2015年就诊于商丘市第一人民医院的骨肉瘤患者。采用微阵列分析筛选骨肉瘤细胞Saos-2中差异表达的circRNA,实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞Saos-2和正常成骨细胞NHOst、骨肉瘤组织及癌旁组织中circ_0006948、miR-490-3p和自噬相关蛋白7(ATG7)mRNA的表达水平,细胞克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,双荧光素酶报告基因实验检测circ_0006948与miR-490-3p、miR-490-3p与ATG7之间的相互作用,TargetScan数据库分析miR-490-3p与ATG7的相关性,Western blot法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果:Saos-2细胞中circ_0006948、miR-490-3p和ATG7 mRNA的表达水平与NHOst细胞差异均有统计学意义(均 P<0.01),骨肉瘤组织及癌旁正常组织中circ_0006948、miR-490-3p和ATG7 mRNA的表达水平差异均有统计学意义(均 P<0.01)。circ_0006948-siRNA组细胞的克隆数目、迁移数目和迁移率分别为(32.78±1.76)个、(37.58±1.82)个和(36.93±1.45)%,均低于siRNA NC组[分别为(65.72±1.45)个、(78.63±1.93)个和(65.32±1.74)%,均 P<0.01]。miR-490-3p mimics组细胞的克隆数目、迁移数目和迁移率分别为(20.08±1.54)个、(30.24±1.78)个和(21.15±1.68)%,均低于mimics NC组[分别为(60.36±1.83)个、(76.93±1.64)个和(40.56±1.27)%,均 P<0.01]。miR-490-3p inhibitor+siRNA NC组细胞的克隆数目、迁移数目和迁移率分别为(90.34±1.72)个、(120.89±2.34)个和(70.83±1.93)%,均高于inhibitor NC+siRNA NC组[分别为(61.27±1.73)个、(75.82±1.82)个和(42.38±1.74)%,均 P<0.01]。circ_0006948 siRNA+miR-490-3p inhibitor组细胞的克隆数、迁移数和迁移率分别为(58.74±1.98)个、(73.46±1.04)个和(40.35±1.72)%,均低于miR-490-3p inhibitor+siRNA NC组[分别为(90.34±1.72)个、(120.89±2.34)个和(70.83±1.93)%,均 P<0.01]。ATG7-siRNA组细胞的克隆数目、迁移数目和迁移率分别为(20.56±1.87)个、(40.36±1.76)个和(20.96±1.73)%,均低于siRNA NC组[分别为(65.46±1.74)个、(90.87±2.32)个和(40.87±2.03)%,均 P<0.01]。miR-490-3p mimics+pcDNA-ATG7组细胞的吸光度值为0.54±0.11,高于miR-490-3p mimics组(0.36±0.08, P<0.05);miR-490-3p mimics组细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达水平与mimics NC组比较,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。miR-490-3p mimics+pcDNA-ATG7组细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达水平与miR-490-3p mimics组比较,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:circ_0006948通过miR-490-3p调控ATG7蛋白的表达,从而调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。
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编辑人员丨4天前
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环状RNA Hsa_circ_0006948对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响
编辑人员丨2024/6/15
目的 探讨环状RNA Hsa_circ_0006948(circ_0006948)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞恶性生物学行为的影响.方法 qRT-PCR检测SCC-15、CAL27和HIOEC细胞circ 0006948的表达;将SCC-15细胞分别转染pc-NC、pc-circ_0006948、si-NC、si-circ_0006948,记为 pc-NC 组、pc-circ_0006948 组、si-NC 组以及 si-circ_0006948 组,取正常培养的细胞作为NC组.CCK-8法检测细胞存活率;平板克隆法检测细胞克隆情况;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞E-Cadherin、N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达.结果 与HIOEC细胞相比,CAL27细胞和SCC-15细胞中circ_0006948表达明显升高(P<0.05),由于SCC-15细胞中circ_0006948的表达最高,后续使用SCC-15细胞进行后续转染实验.与NC组和pc-NC组相比,pc-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显升高(P<0.05),细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05);与NC组和si-NC组相比,si-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05),细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 circ_0006948在OSCC细胞中呈高表达,过表达circ_0006948会促进SCC-15细胞增殖,克隆,迁移,侵袭,并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与调控上皮间充质转化(EMT)有关.
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编辑人员丨2024/6/15
