目的:探讨环状RNA(circRNA）＿0128846对人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞放射抵抗的影响及机制。方法:应用GEO数据库筛选、采用荧光实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测在人NSCLC细胞A549及其放射抵抗细胞（A549R）中差异表达最显著的circRNA作为目标circRNA，qRT-PCR检测其在人支气管上皮细胞Beas-2B及人NSCLC细胞A549、H460、H1299、H1975中的表达水平。在A549细胞中转染目标circRNA过表达载体，在A549R细胞中转染目标circRNA沉默载体，并检测以上细胞经8 Gy X射线照射后的克隆形成能力。应用人类环状RNA数据库和circinteractome数据库预测目标circRNA下游的miRNA，qRT-PCR检测A549R细胞中目标circRNA沉默后表达水平上升最显著的miRNA作为目标miRNA。qRT-PCR检测A549细胞中过表达目标circRNA后目标miRNA的表达情况；通过双荧光素酶报告基因分析人胚肾细胞293T中过表达目标miRNA后目标circRNA的表达情况；qRT-PCR检测目标miRNA在A549、A549R细胞中的表达水平。在A549细胞中转染目标miRNA抑制剂以沉默目标miRNA，在A549R细胞中转染目标miRNA模拟物以过表达目标miRNA，并检测以上细胞经8 Gy X射线照射后的克隆形成能力；将过表达目标circRNA的A549细胞进行8 Gy X射线照射并在该细胞中过表达目标miRNA，检测细胞的克隆形成能力。组间数据的比较采用独立样本 t检验。 结果:qRT-PCR检测结果显示，circRNA_0128846为目标circRNA，且其在人NSCLC细胞A549、H460、H1299、H1975中的相对表达水平均高于人支气管上皮细胞Beas-2B（ t=6.200、7.903、6.010、6.132，均 P<0.01）。过表达circRNA_0128846的A549细胞经照射后的克隆形成能力增强（0.22%对0.45%， t=4.427， P<0.05）；沉默circRNA_0128846后A549R细胞经照射后的克隆形成能力降低（0.23%对0.10%， t=3.780， P<0.05）。qRT-PCR检测结果显示，miR-1183为目标miRNA，在A549细胞中过表达circRNA_0128846显著下调miR-1183的表达（ t=6.002， P<0.01）；双荧光素酶报告基因分析证实过表达miR-1183可显著下调circRNA_0128846的表达（ t=4.562， P<0.05）；miR-1183在A549R细胞中的相对表达水平显著低于亲本A549细胞（ t=6.025， P<0.01）。过表达miR-1183显著降低A549R细胞经照射后的克隆形成能力，沉默miR-1183显著增强A549细胞经照射后的克隆形成能力（0.26%对0.15%、0.21%对0.31%， t=3.671、3.293，均 P<0.05），且过表达miR-1183显著降低了过表达circRNA_0128846对A549细胞克隆形成能力的促进作用（1.90%对1.20%， t=6.325， P<0.01）。 结论:circRNA_0128846作为miR-1183的吸附海绵，可抑制miR-1183的表达进而抑制其放疗增敏作用，从而促进人NSCLC细胞的放射抵抗。

目的 探讨miR-1183在结直肠癌组织和血浆中的表达及临床意义.方法 实时荧光定量PCR检测16对结直肠癌组织和癌旁组织样本及68例结直肠癌患者、15例上皮内瘤变患者和25例健康体检者血浆样本中miR-1183的表达水平;统计学方法分析血浆miR-1183的表达与临床病理特征的相关性.结果 miR-1183的表达水平在结直肠癌组织中高于癌旁组织(P=0.0025),在结直肠癌患者和瘤变者血浆中均高于健康者,且在结直肠癌患者血浆中高于瘤变者(均P<0.001).结直肠癌患者血浆miR-1183表达量与临床分期、淋巴结转移、远处转移、CEA表达显著相关(均P<0.05).血浆miR-1183作为诊断标记物,鉴别结直肠癌的曲线下面积(AUC)为0.89(95％CI:0.8231～0.9569,P<0.0001),鉴别瘤变的AUC为0.8453(95％CI:0.7134～0.9773,P=0.0003).血浆miR-1183高表达的患者总生存期明显短于低表达者(P=0.0310),血浆miR-1183表达水平可作为结直肠癌患者预后判断的独立影响因素(P<0.05).结论 miR-1183高表达与结直肠癌发生发展密切相关,其血浆表达水平有望成为结直肠癌辅助诊断及预后判断指标.

目的:通过寻找支架内再狭窄相关的循环microRNAs(miRNAs)及其作用靶基因,阐释miRNAs在经皮冠状动脉介入治疗的同时带来的支架内再狭窄(ISR)中的网络调控作用及机制.方法:由美国NCBI的GEO公共数据平台下载GSE60959中的miRNAs芯片数据,通过GeneSpringGX芯片分析软件分析得到ISR患者和对照组之间差异表达的循环miRNAs;采用miRNAs靶基因预测算法TargetScan和miRanda预测差异表达miRNAs的靶基因,通过DAVID平台和KEGG数据库分析得到靶基因所参与的信号通路;用GSE46560的mRNA芯片数据分析得到ISR患者较非ISR患者循环mRNAs差异表达谱,用来验证miRNAs调控ISR所作用的靶基因;采用Cytoscape软件构建基于miRNAs-信号通路、miRNAs-靶基因的共表达网络.结果:与对照组相比,ISR组存在131个差异表达循环miRNAs,其中上调41个.前5个上调miRNAs分别是miR-1183、miR-512-5p、miR-187-5p、miR-144-3p和miR-1225-5p.5个miRNAs的预测靶基因共6587个,信号通路富集分析显示这些基因主要参与的信号通路包括MAPK signaling pathway、ErbB signaling pathway、Wnt signaling pathway、Focal adhesion、Neurotrophin signaling pathway和Regulation of actin cyto?skeleton.进一步对mRNAs芯片进行差异分析显示,与对照组相比,ISR患者差异循环mRNAs共171个,其中最可能受上述5个miRNAs调控的基因共43个.构建的共表达网络显示,miR-512-5p是作用靶基因和参与信号通路最多的miRNAs.结论:ISR患者循环miRNAs和mRNAs表达谱均存在改变,多个差异表达miRNAs通过作用于多个靶mRNAs,进而影响多个信号通路的活性,最终对ISR的发生、发展形成网络调控作用.

目的 研究miR-1183在结直肠肿瘤血浆外泌体中的表达和诊断价值.方法 采用电镜、流式分析、粒径分析等方法鉴定血浆样本中的外泌体.qRT-PCR测定80例结直肠癌、70例结直肠腺瘤和70例健康对照样本外泌体中miR-1183的表达水平;统计分析外泌体miR-1183的表达量与临床各病例资料的相关性.结果 电镜、流式分析、粒径分析鉴定到了典型的外泌体特性,认为成功提取到血浆外泌体.miR-1183的表达水平在结直肠肿瘤组血浆外泌体中高于对照者;而相比腺瘤组,其表达水平在结直肠癌组更高(P均<0.05).结直肠癌组血浆外泌体miR-1183表达与病理分期、N分期、M分期、血清癌胚抗原(CEA)水平正相关(P均<0.05).结直肠腺瘤组血浆外泌体miR-1183表达与血清CEA水平相关(P<0.05).作为诊断标记,血浆外泌体miR-1183鉴别结直肠癌、结直肠腺瘤、结直肠肿瘤和结直肠良恶性肿瘤的曲线下面积(AUC)分别为0.8857、0.8145、0.8525和0.7304(P均<0.0001).结论 外泌体miR-1183表达与结直肠肿瘤形成及进展紧密关联,其血浆表达量可能作为结直肠肿瘤辅助或分层诊断的标志物.

目的 探讨Rh血型系统RHD基因表达相关微小RNA(miRNA),及其在干预RHD基因表达中的作用.方法 利用生物信息学软件TargetScan、PicTar和miRWalk预测靶向作用于RHD基因的miRNA,综合3个数据库的结果选取靶标率最高的5个miRNA进行研究.聚合酶链反应(PCR)扩增RHD基因3'-非编码区(3'-UTR)序列,插入到双酶切的双荧光素酶报告基因载体中,将报告基因载体与miRNA共转染细胞,通过相对荧光素酶活性分析测定miRNA对RHD基因的靶向作用.采用实时荧光定量PCR检测miRNA在RhD阳性及"弱D"表型样本中的表达.结果 成功构建RHD基因3'-UTR双荧光素酶报告基因载体.该报告基因载体与miRNA-566、miR-1183和miR-1207共转染细胞的相对荧光素酶活性与对照比较分别下降了37％(P<0.05)、13％(P<0.05)和14％(P<0.05),提示miRNA-566、miR-1183和miR-1207潜在靶向调控RHD基因.miRNA-566和miR-1183在"弱D"表型样本中的相对表达量显著高于RhD阳性样本(P<0.05).结论 RHD基因3'-UTR双荧光素酶基因报告载体构建成功.miR-566和miR-1183对RHD基因有靶向抑制作用.