目的:探讨miRNA-373-3p（miR-373-3p）靶向调控CD44表达对肾母细胞瘤G401细胞增殖的影响。方法:利用生物信息学方法，基于miRDB、miRanda、PITA以及DIANA-microT生物信息学数据库预测miR-373-3p可能的靶基因。取G401细胞，分别转染miR-373-3p模拟物、模拟物阴性对照、miR-373-3p抑制剂、抑制剂阴性对照，采用CCK-8法检测细胞增殖能力；采用克隆形成实验检测克隆形成的数目；采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测CD44 mRNA的相对表达量；蛋白质印迹法检测CD44蛋白的表达水平。利用HEK-293T细胞进行双荧光素酶报告基因实验验证miR-373-3p靶基因。结果:生物信息学分析结果提示CD44是miR-373-3p的靶基因。自转染24 h起，miR-373-3p模拟物组G401细胞增殖能力较模拟物阴性对照组均下降（均 P<0.05）；自转染48 h起，miR-373-3p抑制剂组细胞增殖能力较抑制剂阴性对照组均增强（均 P <0.05）。miR-373-3p模拟物组克隆形成数少于模拟物阴性对照组[（55.3±2.5）个比（90.7±2.9）个]，差异有统计学意义（ t=14.57， P<0.01）；miR-373-3p抑制剂组克隆形成数多于抑制剂阴性对照组[（115.0±2.7）个比（92.0±2.4）个]，差异有统计学意义（ t=8.86， P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验显示，CD44是miR-373-3p的直接靶基因。miR-373-3p模拟物组、模拟物阴性对照组G401细胞中CD44 mRNA的相对表达量分别为0.62±0.03、1.00±0.01，差异有统计学意义（ t=11.28， P<0.01）；miR-373-3p抑制剂组、抑制剂阴性对照组CD44 mRNA的相对表达量分别为1.31±0.02、1.00±0.00，差异有统计学意义（ t=12.65， P<0.01）。miR-373-3p模拟物组CD44蛋白表达降低，而miR-373-3p抑制剂组CD44蛋白表达升高。 结论:在肾母细胞瘤中，miR-373-3p可以通过靶向调控CD44的表达抑制肿瘤细胞的增殖。

目的:探究微小RNA(miR)-373-3p对胶质母细胞瘤细胞自噬和舒尼替尼敏感性的影响及其机制。方法:体外常规培养U251细胞，采用50 μmol/L舒尼替尼作用72 h构建耐舒尼替尼U251细胞株。(1)采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测U251、耐舒尼替尼U251细胞miR-373-3p的表达。将耐舒尼替尼U251细胞分为空白对照组、无义序列组、miR-373-3p模拟物组，后2组细胞分别转染miR-373-3p无义序列、miR-373-3p模拟物，采用RT-qPCR检测细胞miR-373-3p的表达。将细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组，转染后采用CCK-8法检测细胞活性，TUNEL染色检测细胞凋亡率，免疫荧光染色检测细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达，Western blotting检测细胞凋亡、自噬相关蛋白的表达。(2)构建pGL3-自噬相关基因7(ATG7)野生型(WT)和pGL3-ATG7突变型(MUT)质粒，双荧光素酶报告分析系统检测miR-373-3p模拟物组、无义序列组细胞荧光素酶活性。将细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组，转染后采用RT-qPCR、Western blotting分别检测细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达。(3)将耐舒尼替尼U251细胞分为空白对照组、ATG7阴性对照组、ATG7过表达组，转染后采用RT-qPCR、Western blotting分别检测细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达。将U251细胞、耐舒尼替尼U251细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+ATG7阴性对照+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+ATG7过表达+耐舒尼替尼U251组，转染后采用CCK-8法检测细胞活性，TUNEL染色检测细胞凋亡率，Western blotting检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果:(1)与U251细胞比较，耐舒尼替尼U251细胞miR-373-3p的表达下调，差异有统计学意义( P<0.05)。与空白对照组、无义序列组比较，miR-373-3p模拟物组细胞miR-373-3p的表达升高，差异有统计学意义( P<0.05)。与U251组比较，耐舒尼替尼U251组细胞活性增加，凋亡率下降，B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达升高，Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)/Caspase 3值降低，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值增加，p62蛋白的表达减少。与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞活性降低、凋亡率提高，Bcl-2蛋白的表达降低，Bax蛋白的表达和活化Caspase 3/Caspase 3值升高，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，p62蛋白的表达增加，差异均有统计学意义( P<0.05)；与U251组比较，耐舒尼替尼U251组LC3荧光颗粒增多且荧光亮度升高；与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞荧光颗粒减少且亮度减弱。(2)对于pGL3-ATG7 WT质粒，miR-373-3p模拟物组荧光素酶活性低于无义序列组，差异有统计学意义( P<0.05)。与U251组比较，耐舒尼替尼U251组ATG7 mRNA和蛋白的表达增加；与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组ATG7 mRNA和蛋白的表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)与空白对照组、ATG7阴性对照组比较，ATG7过表达组细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达均增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞活性降低、凋亡率较高，Bcl-2蛋白的表达降低，活化Caspase 3/Caspase 3值、Bax蛋白的表达升高，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，p62蛋白的表达升高；与miR-373-3p模拟物+ATG7阴性对照+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+ATG7过表达+耐舒尼替尼U251组细胞活性增加，凋亡率降低，Bcl-2蛋白的表达升高，活化Caspase 3/Caspase 3值、Bax蛋白的表达降低，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值升高，p62蛋白的表达减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:miR-373-3p通过调控自噬而增强胶质母细胞瘤细胞舒尼替尼敏感性，其机制可能与靶向ATG7有关。

目的:探究长链非编码RNA SATB2-AS1作为内源性竞争RNA调控miR-373-5p/BTG3轴在宫颈癌（cervical cancer，CC）细胞增殖、凋亡中的作用。方法:qRT-PCR技术检测CC患者癌旁组织、癌组织中LncRNA SATB2-AS1、miR-373-5p和BTG3的表达水平。预测并验证LncRNA SATB2/miR-373-5p/BTG3之间的相互作用关系。干预细胞中SATB2-AS1和miR-373-5p的表达并将CC细胞分组，MTT检测各组细胞增殖活力，流式细胞术检测各组细胞凋亡。结果:qRT-PCR显示对比癌旁组织和正常宫颈细胞，SATB2-AS1和BTG3在癌组织和CC细胞中表达明显下降，miR-373-5p在癌组织和CC细胞中表达显著上升（均 P<0.05）。SATB2-AS1和miR-373-5p的靶向关系被验证。与NC组比较，过表达SATB2-AS1能抑制癌细胞增殖，诱导细胞凋亡（均 P<0.05）。而过表达miR-373-5p则能促进癌细胞增殖，抑制细胞凋亡，但该作用被SATB2-AS1部分挽救。 结论:上调LncRNA SATB2-AS1的表达水平可通过调控miR-373-5p/BTG3轴参与CC的进展，抑制癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。

目的 探究长基因间非蛋白编码RNA 92(LINC00092)在骨肉瘤细胞迁移和侵袭进展中的作用及潜在分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测人成骨细胞(hFOB1.19)和骨肉瘤细胞系(SOSP-9607、U2-OS、Saos-2 和MG-63)中LINC00092 的表达水平.选取MG-63 细胞并分成LINC00092 组(LINC00092 过表达)、pcDNA组(阴性对照)和Con-trol组(空白对照).采用MTT、Transwell实验和划痕实验体外评估MG-63 细胞的增殖、侵袭和迁移能力.通过双荧光素酶报告基因实验、qPCR 和 Western blot 筛选并证实微小 RNA-373-5p(miR-373-5p)与 LINC00092 的靶向作用关系.结果 与hFOB1.19 细胞相比,LINC00092 在不同骨肉瘤细胞系中的表达均显著异常下调(P＜0.05).与pcDNA组相比,LINC00092 组MG-63 细胞活力、细胞划痕愈合率和细胞穿膜数量均下降.miR-373-5p是LINC00092 的直接靶点且受其负调控(P＜0.05).此外,LINC00092 组增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶 9(MMP9)的 mRNA 和蛋白水平下调(P＜0.05).结论 LINC00092 可以靶向负调控miR-373-5p,并影响PCNA和MMP9 表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭过程.

目的 探究沉默RNA-373(miR-373)对喉癌细胞增殖、凋亡能力的影响及作用机制研究.方法 将喉癌细胞分为对照组、过表达组、沉默组3组,并通过细胞转染建立稳定转染的过表达组和沉默组.采用MTT法检测细胞增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡能力,Transwell小室检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测细胞迁移,蛋白质印迹法检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路β-连锁蛋白(β-catenin)、c-myc、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Bc1-2、Bax蛋白表达量.结果 与过表达组相比,沉默组miR-373表达量明显下降(t=15.062,P<0.05).与过表达组相比,沉默组细胞凋亡率较高,细胞不同时间点增殖率较低(t=31.025、16.453、22.475、29.672,P<0.05);与过表达组相比,沉默组细胞侵袭能力、迁移数均较低(t=35.254、37.205,P<0.05).与过表达组相比,沉默组β-catenin、c-myc、CyclinD1、MMP-9、Bc1-2蛋白表达量较低,Bax蛋白较高(t=4.218、5.307、4.609、5.005、4.328、3.984,P<0.05).结论 沉默miR-373可能通过促进Bax表达,抑制β-catenin、c-myc、CyclinD1、MMP-9、Bc1-2表达,阻滞Wnt/β-catenin信号通路,从而促进喉癌细胞凋亡,抑制喉癌细胞侵袭、增殖、迁移.

目的 探讨微小RNA-373(miR-373)在胃癌中的表达水平及其诊断价值.方法 选取2021年2月至2023年2月广东医科大学东莞第三临床医学院胃癌诊疗中心收治的胃癌患者80例作为胃癌组,选取同期在广东医科大学东莞第三临床医学院接受胃镜检查,经病理学检查未见肿瘤的胃良性疾病患者80例作为胃良性疾病组,选取同期行健康体检的体检健康者80例作为对照组.采集受试者血清样本,利用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测miR-373的表达水平,并分析其与临床病理特征的相关性.采用全自动化学发光免疫分析法,检测血清糖类抗原199(CA199)和癌胚抗原(CEA).采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-373、CA199和CEA对胃癌的诊断效能.结果 胃癌组血清miR-373、CA199和CEA表达水平均高于胃良性疾病组和对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-373表达水平与胃癌患者的肿瘤最大径、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P＜0.05).ROC曲线分析显示,miR-373、CA199和CEA诊断胃癌的曲线下面积分别为0.880(95％CI:0.819～0.926)、0.874(95％CI:0.813～0.921)、0.836(95％CI:0.769～0.889),miR-373 的诊断效能优于传统肿瘤标志物CA199和CEA.结论 miR-373在胃癌组织中呈高表达,且miR-373的表达水平与胃癌的临床病理特征相关,在胃癌的早期诊断中有较高的应用价值.

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌(SCC)和高级别鳞状上皮内病变(HSIL)患者血液中微小RNAs(microRNA,miRNAs)的表达差异.方法:于2020年1月―2022年1月,纳入35名HSIL和35名宫颈SCC患者和30名健康对照进行研究.收集患者的血液标本,采用qRT-PCR分析血清中miR-409、miR-32、miR-454、miR-17、miR-520和miR-373的相对miRNA表达水平.采用接受者操作特征曲线(ROC)分析差异表达的miRNAs的诊断潜力.结果:与健康对照组比较,HSIL和SCC组织中miR-409表达显著下调,miR-32、miR-454、miR-17表达均显著上调.与HSIL组比较,SCC组的miR-409表达显著下调,miR-32、miR-454、miR-17表达均显著上调.ROC分析显示,miR-409(AUC=0.972)、miR-32(AUC=0.942)、miR-454(AUC=0.905)、miR-17(AUC=0.969)在区分对照组和SCC组方面具有高特异度和高敏感度.miR-409(AUC=0.921)、miR-17(AUC=0.851)在区分HSIL组和SCC组方面具有较高的特异度和敏感度.miR-32、miR-454在区分HSIL组和SCC组方面价值较低.结论:宫颈癌及癌前病变中的miRNAs(miR-409、miR-32、miR-454、miR-17)具有明显差异表达,且在区分正常和SCC方面显示出良好的敏感性和特异性.其中,miR-409和miR-17还可作为区分HSIL和SCC的潜在标志物.

目的:探究miR-373调控JAK3/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)M2极化对肺癌细胞的影响.方法:利用佛波酯及IL-4诱导M2-TAMs分化;将miR-NC和miR-373分别转染M0/M2-TAMs并检测M2-TAMs特征性基因mRNA和miR-373水平;将M0/M2-TAMs与A549、H1299细胞共培养;CCK-8、划痕实验、Transwell实验分别检测肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力;双荧光素酶实验验证miR-373与JAK3的调控关系;RT-qPCR检测细胞JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测细胞Ki67、MMP-2/9、p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6水平.30只裸鼠尾静脉注射已转染慢病毒的A549细胞悬液;检测裸鼠肺组织病理变化;RT-qPCR检测肺组织JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测CD31、VEGFA、M2-TAMs特征性基因及p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平.结果:成功诱导M2-TAMs中CD206及IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA表达增加;与M2+miR-NC组相比,M2+miR-373组IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA和Ki67、MMP-2/9蛋白表达明显降低,A549、H1299细胞增殖、侵袭和迁移能力明显降低(P<0.05);JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05).与miR-NC组相比,miR-373组裸鼠肺部病理损伤明显缓解;M2-TAMs特征性基因蛋白水平明显降低;JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05).结论:miR-373通过抑制JAK3/STAT6信号通路抑制TAMs向M2极化,从而抑制肺癌细胞增殖、侵袭、转移和血管生成.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-373对胶质瘤细胞恶性表型的影响,探讨miR-373调控胶质瘤发生发展的分子机制.方法 利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤组织及正常脑组织中miR-373的表达水平;利用噻唑蓝(MTT)比色法及Transwell侵袭实验检测miR-373对胶质瘤细胞U251活性及侵袭能力的影响;通过生物信息学方法,筛选miR-373的靶基因,利用荧光报告载体实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-373对靶基因的直接调控作用.结果 将正常脑组织和人正常星形细胞株中miR-373的表达水平标化为1,胶质瘤组织和U251、U87、A172、U118细胞中miR-373的相对表达水平分别为0.36±0.14、0.21±0.04、0.32±0.05、0.35±0.04、0.56±0.12,差异有统计学意义(t=-7.862,P=0.006;t=-9.211,P=0.004;t=-8.090,P=0.005;t=-7.953,P=0.006;t=-6.254,P=0.007).miR-373转染U251细胞48 h后,细胞活性和侵袭能力与对照组比较显著降低[活性:0.25±0.03比0.63±0.08;穿膜细胞数:(41.5±5.7)个比(118.5±9.8)个;t=-12.561,P=0.002;t=-10.792,P=0.003].过表达miR-373后,含有E2F转录因子5的3'端非编码区域(E2F5 3'UTR)的荧光报告载体的细胞组荧光值为1.49±0.21,对照组的荧光值为2.23±0.32,差异有统计学意义(t=-9.804,P=0.004).结论 miR-373通过靶向抑制E2F5表达降低胶质瘤细胞的恶性生物学活性.

目的 探讨miR-127-3p在神经胶质瘤中的表达水平差异及生物学作用.方法 用RT-PCR法检测神经胶质瘤患者及健康人群脑脊液中miR-127-3p相对表达水平;用RT-PCR法检测人神经胶质瘤细胞株和人正常神经胶质细胞中的miR-127-3p相对表达水平;用瞬时转染法上调神经胶质瘤细胞U251中的miR-127-3p相对表达水平,用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2、Mcl-1和bax表达水平;Targetscan等在线靶基因预测软件预测miR-127-3p的靶基因,并采用双荧光素酶报告试验和Western blot验证miR-127-3p与靶基因之间的直接作用关系.结果 神经胶质瘤患者(1.33±0.12)脑脊液中的miR-127-3p相对表达水平低于健康人群(3.62±0.26)(t=5.867,P=0.004);U251(0.59±0.05)、U373(0.96±0.08)、U87(0.77±0.03)、SHG44(1.28±0.05)中miR-127-3p相对表达水平均低于人脑正常胶质细胞株HEB(3.64±0.26) (P＜0.01);转染后24、48、72 h 150组、100组和50组细胞吸光度值均低于对照组(P＜0.05),并且随着miR-127-3p mimics转染水平增高,U251细胞吸光度值越低;miR-127-3p mimics转染组(39.3±4.6％)细胞早期凋亡率高于对照组(7.2±0.6％) (P＜0.05);miR-127-3pmimics转染组(9.3±2.3％)细胞晚期凋亡率高于对照组(2.4±0.5％)(P＜0.05);mimic转染组(0.119±0.008)U251细胞bcl-2蛋白表达水平低于对照组(0.556±0.039),mimic转染组(0.168±0.015)U251细胞bax蛋白表达水平高于对照组(0.086±0.006),mimic转染组(0.144±0.009)U251细胞Mcl-1蛋白表达水平低于对照组(0.426±0.028)(P均＜0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,只有当MAPK4-WT-3 UTR与miR-127-3pmimic共同转染时荧光素酶活性被抑制,这提示miR-127 3p能与MAPK4直接结合,miR-127-3pmimic转染组(0.121±0.003)U251细胞MAPK4蛋白表达水平低于对照组(0.467±0.028) (P＜0.05).结论 miR-127-3p在神经胶质瘤患者脑脊液中呈低表达,上调miR-127-3p能抑制神经胶质瘤U251细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl凋亡相关基因及抑制靶基因MAPK4有关.