目的:筛选AS患者PBMCs中差异表达的环状RNA（circRNA），分析其表达谱以探讨circRNAs在AS发病中的作用。方法:采用circRNA微阵列芯片技术检测3例AS活动期（ASA）患者，3例AS稳定期（ASS）患者和3名健康对照者（HC）PBMCs中circRNAs的表达并通过倍数变化（FC）和 P值进行筛选，找到差异表达的circRNAs；从差异表达靠前的circRNAs中随机选择4个circRNAs，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证芯片结果；对差异表达的circRNAs进行基因本体论（GO）分析，京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析，并通过微RNA（miRNA）靶标预测软件对circRNA/miRNA相互作用关系进行预测。采用 t检验和Mann-Whitney U检验等方法对数据进行统计分析。 结果:芯片结果显示，ASA组较HC组共有800个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中466种上调，334种下调；ASS组较HC组共有1 149个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中589种上调，560种下调；ASA组较ASS组间共有233个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中145种上调，88种下调。RT-qPCR验证结果提示，4个差异表达的circRNAs表达趋势与芯片结果一致。GO分析结果提示，这些差异表达的circRNAs主要参与无义介导的mRNA衰变、Rho GTPase酶结合等过程；KEGG分析结果在辅助性T细胞（Th）17细胞分化、趋化因子信号通路等处得到富集；miRNA靶标预测软件结果提示差异表达的circRNAs可能靶向结合miR-650、let-7b-5p等miRNAs发挥作用。 结论:和HC组相比AS患者PBMCs中存在差异表达的circRNAs，推测这些circRNAs可能参与AS的发病。

目的:探讨miR-140-5p介导Jagged1对肾透明细胞癌(ccRCC)迁移、侵袭及血管生成能力的影响。方法:选取福建省漳州市医院泌尿外科2019年4月至2020年12月经肾癌根治术患者的肾透明细胞癌及癌旁组织标本17例，选取购自美国菌种保藏中心肾透明细胞癌细胞系(786-0)和肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)，荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-140-5p的表达。免疫组织化学检测ccRCC组织中Jagged1的表达。将786-0细胞分为miRNA阴性对照组(miR-NC组)、过表达miR-140-5p组(miR-140-5p组)、Jagged1阴性对照组(Jagged1-NC组)、敲减Jagged1组(si-Jagged1组)。使用划痕、transwell小室和血管生成实验，分别检测细胞迁移、侵袭和血管生成的改变。RT-qPCR检测miR-140-5p过表达后Jagged1 mRNA的表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测Notch/Jagged1信号通路中Jagged 1蛋白的表达。计量资料比较采用 t检验，计数资料采用 χ2检验。 结果:ccRCC组织(0.318±0.144)中miR-140-5p的表达量显著低于正常肾组织(1.028±0.033)，差异有统计学意义( t＝-19.787， P<0.01)；786-0肾癌细胞(0.295±0.064)中miR-140-5p的表达量显著低于HK-2正常肾细胞(1.009±0.157)，差异有统计学意义( t＝-8.366， P<0.01)；在体外，miR-140-5p组的细胞迁移率(0.394±0.015)、侵袭细胞数(142.000±17.874)和血管管腔样结构的形成数(46.000±5.291)显著少于miR-NC组的细胞迁移率(0.548±0.020)、侵袭细胞数(267.000±26.357)和血管管腔样结构的形成数(74.000±8.000)，差异有统计学意义( t＝-10.362、-14.445、-5.056， P<0.01)；与miR-140-5p相反，ccRCC组织中Jagged1的表达(92.30%)显着高于正常肾组织(36.67%)，差异有统计学意义( χ2＝5.356， P<0.05) ；si-Jagged1组的细胞迁移率(0.429±0.011)、侵袭细胞数(130.533±19.379)和血管管腔样结构的形成数(45.333±3.214，)都显著少于Jagged1-NC组的细胞迁移率(0.495±0.025)、侵袭细胞数(252.466±19.231)和血管管腔样结构的形成数(66.000±3.605)，差异有统计学意义( t＝-3.999、-17.297、-7.410， P<0.05)；miR-140-5p组中Jagged1 mRNA的相对表达量(0.434±0.150)显著低于miR-NC组(1.026±0.265)，差异有统计学意义( t＝-3.425， P<0.05)。miR-140-5p组(0.336±0.159)中Jagged1蛋白的表达较miR-NC组(0.900±0.121)降低，差异有统计学意义( t＝-4.901， P<0.01)。 结论:miR-140-5p可抑制ccRCC的进展，miR-140-5p可能下调Jagged1抑制ccRCC迁移、侵袭及血管生成。

目的:采用转录组测序技术(RNA-seq)筛选脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马差异表达的长链非编码RNA(lncRNA)及mRNA，构建竞争性内源性RNA(ceRNA)调控网络。方法:清洁级健康雄性C57BL/6小鼠10只，6~8周龄，体质量20~25 g，采用随机数字表法分为2组( n＝5)：假手术组(Sham组)和脓毒症组(Sepsis组)。Sepsis组采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备小鼠脓毒症模型，Sham组只开腹不进行盲肠结扎和穿孔。分别于术前1 d及术后3 d时行Morris水迷宫实验和条件恐惧实验检测小鼠认知功能。随后Sham组随机处死3只小鼠，Sepsis组处死认知功能测试最差的3只小鼠，取海马组织，通过BGISEQ-500平台行转录组测序，得到差异表达的mRNA和lncRNA，测序结果通过深圳华大基因科技服务有限公司提供的Dr.Tom平台行可视化分析，利用Cytoscape软件构建ceRNA调控网络。 结果:与Sham组比较，Sepsis组逃避潜伏期延长，靶向限停留时间百分比和僵直时间百分比降低( P<0.05)。转录组数据分析共获得差异表达的lncRNA 62个，其中45个lncRNA表达上调，17个lncRNA表达下调；差异表达的mRNA 282个，其中173个mRNA表达上调，109个mRNA表达下调。对差异表达的mRNA进行生物学过程的GO富集分析，结果显示差异表达的mRNA参与了记忆、学习或记忆、炎症应答、衰老相关行为减退的调空、突触可塑性调节等生物学过程；对差异表达的mRNA进行KEGG通路富集分析，结果显示差异表达的mRNA富集于IL-17信号通路、TNF信号通路、NF-κB信号通路等。对差异表达的mRNA进行KDA分析，结果示Ch25h、Il6ra、Lcn2、Sgk1、Nr4a3、Osm、Saa3、Ccl7、Sqle、Dhcr24为SAE的关键基因。基于9个lncRNA、28个mRNA和134个miRNA成功构建了SAE小鼠海马的ceRNA调控网络。 结论:RNA-seq结果分析发现Ch25h、Il6ra、Lcn2、Sgk1、Nr4a3、Osm、Saa3、Ccl7、Sqle、Dhcr24 10个mRNA以及Rian、Gm35874、Gm34347等lncRNA是调控小鼠SAE的关键基因；同时成功构建了SAE小鼠海马基于lncRNA-miRNA-mRNA的ceRNA调控网络。

目的:探讨非小细胞肺癌（NSCLC）脑转移患者血清外泌体中miRNA-21（miR-21）、miRNA-330（miR-330）的表达水平及二者与患者预后的关系。方法:前瞻性队列研究。前瞻性选择2021年3月至2022年9月就诊于山东第一医科大学附属人民医院的125例NSCLC患者，经CT、头部增强磁共振成像或手术病理检查判断是否脑转移。将NSCLC患者按照是否合并脑转移分为转移组（58例）和未转移组（67例），选择同期收治的50例肺部良性疾病患者及同期体检的50名体检健康者分别为良性组和健康对照组。收集所有研究对象血清样本（其中患者为治疗前样本），提取外泌体，采用实时荧光定量聚合酶链反应法测定外泌体中miR-21、miR-330转录水平相对表达量；采用电化学发光免疫法测定血清肿瘤标志物[神经元特异性烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、鳞状细胞癌抗原（SCCA）]水平。比较4组血清外泌体中miR-21、miR-330及血清肿瘤标志物水平，采用Pearson法分析NSCLC脑转移患者治疗前血清外泌体miR-21、miR-330间相关性及二者与血清肿瘤标志物间的相关性。以CT、头部增强磁共振成像或手术病理确定的脑转移为金标准，绘制依据治疗前血清外泌体中miR-21、miR-330水平单独及二者联合判断NSCLC患者脑转移发生的受试者工作特征（ROC）曲线。根据NSCLC患者随访期间是否因肿瘤病死，将NSCLC患者分为预后不良组和预后良好组，对比两组临床特征及治疗前血清外泌体中miR-21、miR-330水平。采用多因素logistic回归分析NSCLC患者因肿瘤病死的独立影响因素。结果:125例NSCLC患者中，男性68例（54.4%），女性57例（45.6%）；年龄（63±5）岁，范围：49~82岁；腺癌89例（71.2%），鳞状细胞癌36例（28.8%）。健康对照组、良性组、未转移组、转移组血清外泌体中miR-21转录水平相对表达量依次升高，miR-330转录水平相对表达量依次下降，血清NSE、CEA、SCCA蛋白浓度依次升高，两两组间比较，差异均有统计学意义（均 P<0.001）。Pearson相关性分析显示，NSCLC脑转移患者治疗前血清外泌体中miR-21与血清NSE、CEA、SCCA水平呈正相关性（ r值分别为0.641、0.785、0.612， P值分别为0.015、0.011、0.019），治疗前血清外泌体中miR-330与血清NSE、CEA、SCCA水平呈负相关性（ r值分别为-0.612、-0.689、-0.587， P值分别为0.016、0.021、0.013），治疗前血清外泌体中miR-21与miR-330呈负相关性（ r=-0.529， P=0.023）。ROC曲线分析显示，治疗前血清外泌体中miR-21、miR-330单独及二者联合判断NSCLC患者脑转移发生的曲线下面积分别为0.861（95% CI：0.792~0.931）、0.894（95% CI：0.840~0.947）、0.906（95% CI：0.849~0.963），差异均有统计学意义（均 P<0.001）；miR-21相对表达量最佳临界值为1.625，相应的灵敏度、特异度分别为77.4%、71.5%，miR-330相对表达量最佳临界值为0.611，相应的灵敏度、特异度分别为81.1%、74.9%，二者联合时达最佳临界值时的灵敏度和特异度分别为84.5%、73.8%。NSCLC患者中位随访19个月（95% CI：17~21个月），随访期间因肿瘤病死23例（18.4%）。预后不良组中年龄≥60岁、临床分期Ⅲ~Ⅳ期、脑转移患者的比例及治疗前血清外泌体中miR-21相对表达量均高于预后良好组，治疗前血清外泌体中miR-330相对表达量低于预后良好组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。多因素logistic回归分析显示，年龄高（≥60岁比<60岁， OR=3.750，95% CI：1.191~11.806， P=0.024）、临床分期晚（Ⅲ~Ⅳ期比Ⅰ~Ⅱ期， OR=4.667，95% CI：1.303~16.716， P=0.018）、脑转移（转移比未转移， OR=2.573，95% CI：1.008~6.611， P=0.049）、治疗前血清外泌体中miR-21相对表达量升高（ OR=2.585，95% CI：1.198~6.152， P=0.008）是NSCLC患者因肿瘤病死的独立危险因素，治疗前血清外泌体中miR-330相对表达量升高是因肿瘤病死的独立保护因素（ OR=0.821，95% CI：0.715~0.954， P<0.001）。 结论:NSCLC脑转移患者治疗前血清外泌体中miR-21水平高，miR-330水平低，二者间呈负相关，且二者与NSCLC脑转移患者血清多种肿瘤标志物及NSCLC患者预后密切相关；二者联合可能预测NSCLC脑转移发生情况。

目的:探索早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency，POI）患者血清外泌体miR-17-5p与调节性T（regulatory T，Treg）细胞的关系及其在POI发生中的机制。方法:采用病例对照研究，收集2019年1月至2020年12月期间于南京医科大学第一附属医院妇科内分泌门诊确诊的32例中国汉族特发性POI患者为POI组，32例同期行健康体检且月经规律的中国汉族女性作为正常组。应用实时定量PCR验证血清外泌体miR-17-5p相对表达量。收集健康成年女性外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）与提取的POI患者或正常组女性血清外泌体共培养72 h及转染miR-17-5p模拟物72 h（记为miR-17-5p模拟物组），同时以PBS为阴性对照，应用流式细胞术检测PBMC中Th1、Th17和Treg细胞比例。通过miR-17-5p 模拟物/抑制剂转染体外诱导诱导型Treg（induced Treg，iTreg）细胞，应用流式细胞仪检测细胞增殖/凋亡情况，生物信息分析miR-17-5p的靶基因。结果:与正常组相比，POI组血清外泌体miR-17-5p的相对表达量明显升高（ P<0.001）。POI外泌体与PBMC共培养后Treg细胞比例［（0.93±0.40）%］低于阴性对照组［（3.77±0.89）%， P=0.005］。miR-17-5p模拟物组PBMC中的Treg细胞比例［（4.30±1.91）%］显著低于阴性对照组［（11.97±1.82）%， P=0.007］，而Th1细胞及Th17细胞比例变化均无统计学意义（均 P>0.05）。过表达/抑制miR-17-5p均不影响iTreg细胞的诱导效率（均 P>0.05）。过表达miR-17-5p后iTreg细胞凋亡比例［（16.31±1.27）%］显著高于阴性对照组［（13.01±1.80）%， P=0.035］。与miR-17-5p抑制物阴性对照组［（11.42±0.23）%、（87.60±0.70）%］相比，miR-17-5p抑制物组iTreg细胞凋亡比例［（7.97±0.71）%， P=0.001］显著降低，iTreg细胞增殖比例［（88.83±0.25）%， P=0.045］显著增加。生物信息分析提示转换生长因子受体2基因可能是miR-17-5p的靶基因。 结论:POI的血清外泌体miR-17-5p表达明显上调，其可能通过抑制iTreg细胞增殖、促进iTreg细胞凋亡导致外周血中Treg细胞比例下降，参与POI的发生。

目的:明确低温缺血再灌注心律失常大鼠心肌miRNA表达的变化及其靶基因。方法:清洁级健康雄性SD大鼠，2～3月龄，体重300～400 g，麻醉后开胸取心脏，建立离体心脏灌注模型。成功建立离体心脏灌注模型6个，采用随机数字表法分为2组( n＝3)：对照组(C组)和心脏缺血再灌注组(IR组)。采用全心停灌60 min再灌注30 min的方法制备低温心脏缺血再灌注损伤模型。记录再灌注期间心律失常评分。通过高通量测序筛选出2组心肌表达有显著性差异的miRNA(DEmiRNAs)。利用RNAhybrid和miRanda数据库对DEmiRNAs调节的mRNA行靶基因预测，通过Gene Ontology和KEGG数据库对靶基因进行富集分析，选取与心律失常密切相关且表达水平较高的miRNA进行RT-PCR检测。 结果:高通量测序结果：与C组比较，IR组有7个miRNA表达有显著性差异(novel-miR-17、novel-miR-19、novel-miR-30、novel-miR-43、rno-miR-122-5p、novel-miR-16和rno-miR-429)。与心律失常关系密切且表达水平较高的miRNA有4个：与C组比较，IR组心肌novel-miR-17、novel-miR-30和rno-miR-122-5p表达上调，rno-miR-429表达下调( P<0.05)。通过miRNA-mRNA相关性分析结果：GJA1基因是novel-miR-17的靶点。 结论:心肌novel-miR-17可能作用于GJA1基因参与大鼠低温缺血再灌注心律失常的发生。

目的:观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜组织中miRNA的表达，筛选与p21及视网膜新生血管（RNV）形成相关的miRNA。方法:实验研究。40只健康7日龄C57BL/6J小鼠随机分为正常组和OIR组，每组20只。OIR组构建氧诱导RNV模型，正常组不做任何处理。小鼠17日龄时，处死小鼠，视网膜荧光铺片观察小鼠RNV发生情况；光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。取视网膜组织行miRNA芯片分析，检测正常组与OIR组之间差异表达的miRNA。所得差异miRNA靶基因分别进行基于基因注释（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）的富集分析；通过Targetscan、MiRanda、MicroT-CDS数据库比对筛选可能与p21有关的miRNA及通路。组间两两比较采用独立样本 t检验。 结果:与正常组比较，OIR组小鼠视网膜无灌注区面积、RNV及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量增加，差异均有统计学意义（ t=18.800、9.025， P<0.05）。与正常组比较，OIR组有统计学差异表达的miRNA 54个，其中，上调、下调者分别为47、7个。从3个数据库与所得差异miRNA的比对结果中共筛选到与p21相关miRNA 13个，按差异倍数从高到低分别为miR-7218-5p、miR-322-5p、miR-224-5p、miR-335-5p、miR-329-3p、miR-362-3p、miR-532-5p、miR-20b-5p、miR-20a-5p、miR-195a-5p、miR-423-5p、miR-497a-5p、miR-129-5p。差异miRNA靶基因富集分析，得到1 112个GO条目及50条KEGG通路，其中50个GO条目和13条KEGG通路与p21相关。 结论:在OIR模型中共筛选出13个与P21相关的miRNA。

目的:探讨miRNA-17～92（miR-17～92）基因簇及线粒体融合蛋白2（MFN2）蛋白在子宫内膜癌（EC）中的表达及其临床意义。方法:收集2008年1月至2014年12月山东第一医科大学第二附属医院72例EC、36例子宫内膜非典型增生患者子宫内膜病变组织及22例因子宫颈上皮内瘤变Ⅲ级行全子宫切除术的正常子宫内膜组织；同时收集所有患者蜡块组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组织中miR-17～92表达水平，免疫组织化学SP法检测各蜡块组织中MFN2蛋白定位及表达水平。分析miR-17～92、MFN2蛋白与EC患者临床病理特征的关系；采用Kaplan-Meier法绘制miR-17～92、MFN2不同水平患者生存曲线，并行log-rank检验；应用Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析。结果:miR-17～92在EC、非典型增生及正常子宫内膜组织中相对表达量分别为1.49±0.46、1.01±0.30、0.69±0.20；EC组织中miR-17～92的表达水平高于其他子宫内膜组织，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。MFN2蛋白在EC、非典型增生、正常子宫内膜组织中的高表达率分别为20.8%（15/72）、39.4%（13/33）、85.0%（17/20）；EC组织中MFN2蛋白高表达率低于其他子宫内膜组织，差异均有统计学意义（均 P<0.012 5）。EC患者中，组织学类型Ⅱ型患者miR-17～92相对表达量高于Ⅰ型患者（ P<0.05），肌层浸润深度≥1/2患者miR-17～92相对表达量高于浸润深度<1/2患者（ P<0.05）；组织学类型Ⅰ型患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ型患者（ P<0.05），国际妇产科联盟（FIGO）分级Ⅰ级患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ、Ⅲ级患者（ P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示，按EC患者miR-17～92中位相对表达量（1.421）分组时，低表达组（36例）中位总生存（OS）时间未达到，高表达组（36例）为36个月（95% CI 32～42个月），两组间OS差异有统计学意义（ P＝0.049）；MFN2蛋白高表达组（15例）中位OS时间未达到，低表达组（57例）为38个月（95% CI 33～41个月），两组间OS差异有统计学意义（ P＝0.046）。多因素Cox回归分析显示，miR-17～92、MFN2表达水平为EC患者生存的独立影响因素（ HR＝3.10，95% CI 1.36～7.07， P＝0.007； HR＝0.30，95% CI 0.09～0.99， P＝0.048）。 结论:EC组织中miR-17～92高表达、MFN2蛋白低表达，二者可能参与了EC的发生、发展，可作为判断EC患者预后的指标。

目的:探讨微小RNA(miR)-17-5p调控同源盒蛋白(HOXB13)的分子机制。方法:从SD大鼠胸主动脉分离和培养血管平滑肌细胞(VSMCs)；利用细胞计数试剂盒检测细胞增殖；反转录定量聚合酶链反应检测miRNA和miR-17-5p的表达；细胞转染miR-17-5p mimics、anti-miR-17-5p和小干扰RNA(siRNA)-HOXB13寡核苷酸；荧光素酶报告基因检测miR-17-5p对靶基因的调控；蛋白质印迹法检测蛋白表达。采用单向方差分析和Tukey检验进行统计学分析。结果:成功培养出VMSCs，并通过抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫染色进行验证。血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激VSMCs的增殖和诱导表型转换，促进HOXB13表达并降低miR-17-5p表达。荧光素酶报告分析证实miR-17-5p靶向HOXB13 mRNA的3’端-非翻译区下调其表达。anti-miR-17-5p组细胞增殖水平(1.362±0.076)高于阴性对照组(0.795±0.087)，而miR-17-5p mimics组细胞增殖水平(0.164±0.057)低于阴性对照组( F＝31.865， P<0.01)，差异有统计学意义。miR-17-5p/HOXB13轴调控α-SMA和抗增殖细胞核抗原(PCNA)表达。 结论:miR-17-5p通过调控HOXB13介导VSMCs的表型转换和增殖。

目的:观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜组织中miRNA的表达，筛选与视网膜新生血管（RNV）有关的miRNA。方法:80只健康7日龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组和OIR组，每组40只。OIR组小鼠构建OIR模型，对照组小鼠不做任何处理。小鼠17日龄时，做视网膜荧光铺片，荧光显微镜下观察小鼠RNV发生情况；做视网膜病理切片HE染色，光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。取视网膜组织行miRNA芯片分析，检测对照组与OIR组之间差异表达的miRNA，并行PCR验证。所得差异miRNA靶基因和表达谱分别进行基于基因注释（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）的富集分析。组间两两比较采用独立样本 t检验。 结果:荧光显微镜及光学显微镜观察发现，对照组小鼠视网膜未见无灌注区、新生血管及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核；OIR组小鼠视网膜可见大量无灌注区、新生血管及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。两组小鼠突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量比较，差异有统计学意义（ t=9.025， P<0.05）。miRNA芯片分析结果显示，与对照组比较，OIR组有54个miRNA发生了具有统计学差异的表达。其中，上调者47个，下调者7个。miRNA差异表达倍数大于1.25倍者23个，小于0.75倍者5个。PCR验证结果显示，差异表达倍数最高的5个miRNA表达趋势与芯片分析结果一致，差异均有统计学意义（ P<0.05）。GO分析共得到1112个差异有统计学意义的条目（ P<0.05）；KEGG分析共得到65个差异有统计学意义的条目（ P<0.05 ）。 结论:OIR小鼠视网膜组织中miRNA较正常小鼠视网膜组织有54个表达差异显著的miRNA；表达差异的miRNA可能不同程度参与了RNV的发生发展。