目的 探讨利妥昔单抗对视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)患者治疗前后外周血白细胞介素-23(IL-23)/IL-17A轴及微小RNA-365-5p(miR-363-5p)表达的影响.方法 将NMOSD患者根据水通道蛋白4免疫球蛋白G型抗体(AQP-4IgG)结果分为AQP-4IgG阳性组和AQP-4IgG阴性组.2组患者均接受利妥昔单抗(PTX)连续治疗1年以上.比较2组患者临床疗效,比较患者治疗前和治疗12个月后年复发次数、日常生活活动量表(ADL)评分和外周血IL-23、IL-17A、miR-363-5p表达水平,并记录药物不良反应的发生情况.结果 AQP-4IgG阳性组和阴性组分别纳入73例和27例.AQP-4IgG阳性组与AQP-4IgG阴性组临床疗效分别为84.93％和70.37％,在统计学上差异无统计学意义(P＞0.05).治疗前,AQP-4IgG阳性组和AQP-4IgG阴性组的年复发次数分别为(1.36±0.32)和(1.33±0.41)次,ADL评分分别为(62.36±5.76)和(63.27±5.38)分,IL-23 分别为(325.23±116.35)和(328.79±120.38)pg·mL-1,IL-17A 分别为(68.46±12.38)和(69.61±13.41)pg·mL-1,miR-363-5p 分别为1.76±0.10和1.77±0.19.治疗12个月后,AQP-4IgG阳性组与AQP-4IgG阴性组患者年复发次数分别为(0.28±0.16)和(0.31±0.12)次,ADL评分分别为(85.10±10.36)和(81.26±11.34)分,IL-23 分别为(119.49±10.26)和(122.46±11.54)pg·mL-1,IL-17A 分别 为(43.16±6.29)和(40.27±8.75)pg·mL-1,miR-363-5p 分别为 1.38±0.15 和 1.36±0.15.2组上述指标治疗后与治疗前比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05);治疗后2组间上述指标比较,在统计学上差异均无统计学意义(均P＞0.05).AQP-4IgG阳性组和AQP-4IgG阴性组的药物不良反应发生率分别为13.69％和18.51％,在统计学上差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利妥昔单抗治疗NMOSD疗效确切,可降低年复发次数,促进患者活动能力恢复,其机制可能与调控IL-23/IL-17A轴及抑制miR-363-5p的表达有关.

目的 探讨特发性扩张型心肌病(IDCM)患者miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平及其与心衰的关系.方法 选取2019年1月至2023年1月绵阳市游仙区中医医院和四川省人民医院联合收治的IDCM患者136例(IDCM组),根据IDCM患者是否继发心力衰竭分为心衰组40例和非心衰组96例.选取同期68名无心脏病的健康志愿者设为对照组.比较IDCM组与对照组、心衰组与非心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平、N末端B型利钠肽(NT-proBNP)、超敏肌钙蛋白T(hs-TnT)、左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD).分析血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心功能指标的相关性.采用ROC曲线分析miR-34a-5p、miR-17-5p对IDCM继发心衰的预测价值.结果 IDCM组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).IDCM组的血清NT-proBNP、hs-TnT水平高于对照组,LVEF低于对照组,LVEDD高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05).心衰组的血清NT-proBNP水平高于非心衰组,LVEF低于非心衰组,LVEDD高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05).血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与血清NT-proBNP水平呈正相关(r=0.498,r=0.306,P<0.001).血清miR-34a-5p联合miR-17-5p预测IDCM继发心衰的灵敏度为0.875,特异度为0.802.结论 IDCM患者存在miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平上调情况,且miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心衰具有关联,对预测心衰有一定价值.

目的:筛选AS患者PBMCs中差异表达的环状RNA（circRNA），分析其表达谱以探讨circRNAs在AS发病中的作用。方法:采用circRNA微阵列芯片技术检测3例AS活动期（ASA）患者，3例AS稳定期（ASS）患者和3名健康对照者（HC）PBMCs中circRNAs的表达并通过倍数变化（FC）和 P值进行筛选，找到差异表达的circRNAs；从差异表达靠前的circRNAs中随机选择4个circRNAs，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证芯片结果；对差异表达的circRNAs进行基因本体论（GO）分析，京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析，并通过微RNA（miRNA）靶标预测软件对circRNA/miRNA相互作用关系进行预测。采用 t检验和Mann-Whitney U检验等方法对数据进行统计分析。 结果:芯片结果显示，ASA组较HC组共有800个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中466种上调，334种下调；ASS组较HC组共有1 149个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中589种上调，560种下调；ASA组较ASS组间共有233个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中145种上调，88种下调。RT-qPCR验证结果提示，4个差异表达的circRNAs表达趋势与芯片结果一致。GO分析结果提示，这些差异表达的circRNAs主要参与无义介导的mRNA衰变、Rho GTPase酶结合等过程；KEGG分析结果在辅助性T细胞（Th）17细胞分化、趋化因子信号通路等处得到富集；miRNA靶标预测软件结果提示差异表达的circRNAs可能靶向结合miR-650、let-7b-5p等miRNAs发挥作用。 结论:和HC组相比AS患者PBMCs中存在差异表达的circRNAs，推测这些circRNAs可能参与AS的发病。

目的:探讨miR-140-5p介导Jagged1对肾透明细胞癌(ccRCC)迁移、侵袭及血管生成能力的影响。方法:选取福建省漳州市医院泌尿外科2019年4月至2020年12月经肾癌根治术患者的肾透明细胞癌及癌旁组织标本17例，选取购自美国菌种保藏中心肾透明细胞癌细胞系(786-0)和肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)，荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-140-5p的表达。免疫组织化学检测ccRCC组织中Jagged1的表达。将786-0细胞分为miRNA阴性对照组(miR-NC组)、过表达miR-140-5p组(miR-140-5p组)、Jagged1阴性对照组(Jagged1-NC组)、敲减Jagged1组(si-Jagged1组)。使用划痕、transwell小室和血管生成实验，分别检测细胞迁移、侵袭和血管生成的改变。RT-qPCR检测miR-140-5p过表达后Jagged1 mRNA的表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测Notch/Jagged1信号通路中Jagged 1蛋白的表达。计量资料比较采用 t检验，计数资料采用 χ2检验。 结果:ccRCC组织(0.318±0.144)中miR-140-5p的表达量显著低于正常肾组织(1.028±0.033)，差异有统计学意义( t＝-19.787， P<0.01)；786-0肾癌细胞(0.295±0.064)中miR-140-5p的表达量显著低于HK-2正常肾细胞(1.009±0.157)，差异有统计学意义( t＝-8.366， P<0.01)；在体外，miR-140-5p组的细胞迁移率(0.394±0.015)、侵袭细胞数(142.000±17.874)和血管管腔样结构的形成数(46.000±5.291)显著少于miR-NC组的细胞迁移率(0.548±0.020)、侵袭细胞数(267.000±26.357)和血管管腔样结构的形成数(74.000±8.000)，差异有统计学意义( t＝-10.362、-14.445、-5.056， P<0.01)；与miR-140-5p相反，ccRCC组织中Jagged1的表达(92.30%)显着高于正常肾组织(36.67%)，差异有统计学意义( χ2＝5.356， P<0.05) ；si-Jagged1组的细胞迁移率(0.429±0.011)、侵袭细胞数(130.533±19.379)和血管管腔样结构的形成数(45.333±3.214，)都显著少于Jagged1-NC组的细胞迁移率(0.495±0.025)、侵袭细胞数(252.466±19.231)和血管管腔样结构的形成数(66.000±3.605)，差异有统计学意义( t＝-3.999、-17.297、-7.410， P<0.05)；miR-140-5p组中Jagged1 mRNA的相对表达量(0.434±0.150)显著低于miR-NC组(1.026±0.265)，差异有统计学意义( t＝-3.425， P<0.05)。miR-140-5p组(0.336±0.159)中Jagged1蛋白的表达较miR-NC组(0.900±0.121)降低，差异有统计学意义( t＝-4.901， P<0.01)。 结论:miR-140-5p可抑制ccRCC的进展，miR-140-5p可能下调Jagged1抑制ccRCC迁移、侵袭及血管生成。

目的:探讨微小RNA(miR)-151a-3p在非小细胞肺组织中的表达及其与放疗敏感性的关系。方法:选取2019年12月至2023年8月商丘市第一人民医院收治的54例非小细胞肺癌患者作为研究对象，所有患者进行三维适形调强放射治疗，评价患者放疗疗效，分为完全缓解、部分缓解、稳定和进展。完全缓解和部分缓解为有效治疗组；稳定和进展为无效治疗组。分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析有效治疗组和无效治疗组患者肿瘤组织miR-151a-3p表达水平，根据miR-151a-3p均值，分为高表达组和低表达组，探讨miR-151a-3p表达水平与肺癌放疗敏感性的相关性。组间计量数据比较采用独立样本 t检验。 结果:54例患者，其中22例完全缓解，15例部分缓解，10例稳定，7例进展。完全缓解和部分缓解总计37例，纳入有效治疗组，稳定和进展17例患者纳入无效治疗组。放疗有效率为62.58%(37/54)。治疗有效组患者肿瘤组织miR-151a-3p表达水平(0.94±0.17)明显低于无效治疗组(1.49±0.29)，差异有统计学意义( t＝8.807， P<0.05)。直径>5 cm和直径≤5 cm患者组三维适形调强放疗有效率[69.56%(16/23)、67.74%(21/31)]比较，差异无统计学意义( χ2＝1.008， P>0.05)。肺腺癌组患者和鳞状细胞癌组患者三维适形调强放疗有效率[65.0%(13/20)、70.59%(24/34)]比较，差异无统计学意义( χ2＝1.008， P>0.05)。低分化肿瘤患者组三维适形调强放疗有效率[87.5%(21/24)]明显高于中高分化肿瘤组放疗有效率[53.33%(16/30)]，差异有统计学意义( χ2＝8.694， P<0.05)。淋巴结转移组患者三维适形调强放疗有效率[54.29% (19/35)]明显低于未淋巴结转移组患者[94.74%(18/19)]，差异有统计学意义( χ2＝8.694， P<0.05)。miR-151a-3p低表达组患者三维适形调强放疗有效率[75.00%(30/40)]明显高于miR-151a-3p高表达组患者[50.00%(7/14)]，差异有统计学意义( χ2＝8.694， P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示，低分化程度、无淋巴结转移、miR-151a-3p低表达水平是非小细胞肺癌三维适形调强放疗敏感性的预测因素[比值比( OR)＝3.412、3.876、2.985， P<0.05]。相关性分析显示，非小细胞肺癌组织中miR-151a-3p表达水平与三维适形调强放疗敏感性呈负相关( r＝－0.479， P<0.05)。 结论:肺癌患者肿瘤组织中miR-151a-3p表达水平与放疗敏感性密切相关，可用于临床放疗效果的评价。

目的:探讨微小RNA－17－5p(miR－17－5p)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(RT－qPCR)检测ESCC组织和细胞中miR－17－5p的表达。将miR－17－5p抑制剂和阴性对照转染食管鳞癌细胞EC9706和TE1，RT－qPCR检测转染后细胞中miR－17－5p的表达水平，细胞计数试剂盒8和EdU检测转染后细胞的增殖情况，Transwell小室检测细胞的侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验分析miR－17－5p与成视网膜细胞瘤样蛋白2(RBL2)直接的相互作用，Western blot检测转染后RBL2蛋白的表达，RT－qPCR检测RBL2在ESCC组织中的表达，并分析其与miR－17－5p表达的相关性。结果:ESCC组织中miR－17－5p的相对表达水平为4.222±0.39，高于正常食管上皮组织(1.081±0.046， P<0.001)。ESCC细胞EC9706、Eca109、TE1、KYSE450、KYSE70和KYSE520中miR－17－5p的相对表达水平分别为13.84±1.266、6.453±0.293、11.41±0.520、2.613±0.548、5.251±0.239和4.251±0.195，均高于正常食管上皮细胞Het－1A(1.007±0.079，均 P<0.05)。Ⅲ＋Ⅳ期ESCC组织中miR－17－5p的表达水平(5.094±0.562)高于Ⅰ＋Ⅱ期患者(2.934±0.364)，差异有统计学意义( P<0.01)；有淋巴结转移患者中miR－17－5p的表达水平(5.523±0.634)高于无淋巴结转移患者(3.533±0.461)，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p高表达患者的生存率低于miR－17－5p低表达患者，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p抑制剂能下调EC9706和TE1细胞中miR－17－5p的表达，其表达下调抑制细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素酶报告实验显示，无论是EC9706细胞还是TE1细胞，在RBL2 3′UTR－WT载体和miR－17－5p mimic共转染后，荧光素酶的活性显著降低( P<0.01)，RBL2是miR－17－5p的直接作用靶点。Western blot检测显示，miR－17－5p抑制剂组EC9706和TE1细胞中RBL2蛋白的表达量分别为0.936±0.055和0.923±0.048，明显高于对照组(分别为0.087±0.019和0.102±0.010)，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。ESCC组织中RBL2的表达水平为0.219±0.510，低于正常食管上皮组织(0.983±0.324， P<0.001)。ESCC组织中miR－17－5p的表达水平与RBL2的表达水平呈负相关( r＝－0.462, P<0.001)。RBL2表达下调能逆转miR－17－5p抑制剂引发的细胞增殖和侵袭能力降低。 结论:miR－17－5p参与ESCC的发生、发展过程，有望成为ESCC潜在的分子治疗靶点。

目的:探讨ⅩⅦ型胶原蛋白α1（COL17α1）在小鼠衰老皮肤中的表达与作用及其对人表皮干细胞（ESC）干性和增殖能力的影响，并且探讨相关微小RNA（miR）干预人ESC中COL17α1表达的机制。方法:采用实验研究方法。取2个月龄（青年）和24个月龄（老年）雄性C57BL/6J小鼠各12只，取其胸背部全层皮肤标本进行后续检测。对青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本，行苏木精-伊红染色后观察表皮层结构并测量表皮厚度，用透射电子显微镜观察表皮基底膜形态和半桥粒并行半桥粒计数，分别采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法与蛋白质印迹法检测COL17α1的mRNA与蛋白表达，采用免疫荧光法观测COL17α1的蛋白表达与分布。取于解放军总医院第四医学中心行包皮切除手术的3名20~30岁健康男性术后弃用的新鲜包皮组织，提取ESC，取生长良好的细胞进行后续实验。按随机数字表法（分组方法下同）将ESC分为进行相应处理的空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组，培养48 h后，采用实时荧光定量RT-PCR法检测COL17α1的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测COL17α1和细胞角蛋白14（CK14）的蛋白表达，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖水平。通过DIANA、miRTarBase、miRNAMap、TargetScan、microRNA数据库筛选可能作用于 COL17α1 mRNA 3'非编码区的miR。将ESC分为转染miR模拟物阴性对照物的阴性对照组和转染前述筛选出的各miR的模拟物的各miR模拟物组，转染后48 h，通过蛋白质印迹法检测COL17α1的蛋白表达。基于基因表达综合数据库（GEO）的miR测序数据集GSE114006，使用GEO2R工具统计分析前述筛选出的可造成COL17α1蛋白表达下降的miR在30名青年（18~25岁）人和30名老年（>70岁）人皮肤中的表达。取青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本，采用实时荧光定量RT-PCR法检测前述老年人皮肤中表达增多的miR的表达。取2批ESC，第1批分为COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组，第2批分为COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组，分别转染对应序列，48 h后，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测COL17α1的基因表达水平。组织实验中样本数均为6，细胞实验中样本数均为3。对数据行独立样本 t检验、单因素方差分析、LSD检验或Dunnett检验、Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验。 结果:与青年小鼠比较，老年小鼠皮肤表皮层与真皮层分界模糊且细胞层次较少，表皮层厚度明显变薄（ Z=-2.88， P<0.01），基底膜形态不连续，表皮-真皮连接处半桥粒较少且分布不均，半桥粒数量明显减少（ Z=-2.91， P<0.01），COL17α1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低（ t值分别为10.61、6.85， P<0.01）。与青年小鼠比较，老年小鼠皮肤表皮基底层和毛囊球部的COL17α1蛋白表达均明显减少（ Z=-2.24， P<0.05）。培养48 h后，空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组ESC中COL17α1的蛋白表达水平分别为1.00±0.27、1.12±0.21、1.13±0.23、0.42±0.18。相较于空白对照组，转染试剂对照组和空载体质粒组ESC中COL17α1的mRNA和蛋白表达水平、CK14的蛋白表达水平及ESC增殖水平均未发生明显变化（ P>0.05），敲低COL17α1质粒组ESC中这些指标均明显降低（ P<0.05或 P<0.01）。miR-203a-3p、miR-203b-3p、miR-512-5p、miR-124-3p、miR-28-5p、miR-590-3p、miR-329-5p可能结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区。转染48 h后，与阴性对照组的1.000±0.224比较，miR-329-5p模拟物组、miR-203b-3p模拟物组和miR-203a-3p模拟物组ESC中COL17α1的蛋白表达水平明显降低（0.516±0.188、0.170±0.025、0.235±0.025， t值分别为3.17、5.43、5.07， P<0.05或 P<0.01）。老年人皮肤中仅miR-203b-3p表达水平明显高于青年人（ t=3.27， P<0.01）。老年小鼠皮肤中miR-203b-3p表达水平明显高于青年小鼠（ Z=-2.88， P<0.01）。转染后48 h，COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平明显低于COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组（ t=7.66， P<0.01），COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平与COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组相近（ P>0.05）。 结论:COL17α1的mRNA和蛋白表达水平随小鼠年龄增长而减少，可能导致小鼠ESC脱离表皮基底膜。COL17α1的表达减少可抑制CK14的表达与ESC增殖，这可能是老年人皮肤中表皮层变薄和创面愈合减慢的原因。小鼠衰老皮肤中表达增多的miR-203b-3p可以靶向结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区，阻碍转录后翻译过程，造成COL17α1蛋白表达减少。

目的:探讨hsa_circ_0000670通过调控miR-515-5p/SIX1分子轴促进胃癌进展的分子机制。方法:收集2014—2015年南通大学附属如皋医院收治的35例胃癌患者的胃癌及癌旁正常组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法分别检测胃癌组织、癌旁正常组织、人胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞AGS、HGC-27中circ_0000670、miR-515-5p、SIX1的表达水平；采用Pearson相关分析分析circ_0000670与miR-515-5p、miR-515-5p与SIX1、circ_0000670与SIX1的相关性。采用Kaplan-Meier法和Log rank检验分析circ_0000670低表达组(17例)和circ_0000670高表达组(18例)患者的生存情况。采用平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期及凋亡率，采用划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力，双荧光素酶报告实验检测circ_0000670与miR-515-5p、miR-515-5p与SIX1的靶向关系。分别将sh-NC、sh-circ_0000670转染至HGC-27细胞，将细胞注射入裸鼠体内，检测移植瘤体积及重量，并检测移植瘤组织中circ_0000670、miR-515-5p及SIX1蛋白的表达水平，Western blot法检测E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果:胃癌组织及细胞系中circ_0000670、SIX1的表达水平高于癌旁正常组织及胃上皮细胞GES-1，miR-515-5p的表达水平低于癌旁正常组织及胃上皮细胞GES-1(均 P<0.05)。circ_0000670低表达组患者5年生存率(82.4%)高于circ_0000670高表达组(28.7%， P＝0.034)。circ_0000670与miR-515-5p、miR-515-5p与SIX1呈负相关( r分别为－0.846、－0.615，均 P<0.001)，circ_0000670与SIX1呈正相关( r＝0.814， P<0.001)。转染si-circ_0000670或转染miR-515-5p mimic可减弱胃癌细胞AGS、HGC-27增殖、迁移及侵袭能力(均 P<0.05)，阻滞细胞于G 0/G 1期，增加细胞凋亡能力，提高E-cadherin蛋白表达水平，降低S期细胞比例及Vimentin蛋白表达水平(均 P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实，circ_0000670可靶向调控miR-515-5p，miR-515-5p可靶向调控SIX1。共转染si-circ_0000670与miR-515-5p inhibitor可逆转转染si-circ_0000670对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的作用(均 P<0.05)；共转染miR-515-5p mimic与pcDNA-SIX1可逆转转染miR-515-5p mimic对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的作用(均 P<0.05)。sh-circ_0000670组小鼠移植瘤体积及重量[分别为(299.20±47.58)mm 3和(289.80±48.73)g]低于sh-NC组[分别为(596.20±125.46)mm 3和(538.00±114.39)g，均 P<0.05]，sh-circ_0000670组小鼠移植瘤组织中circ_0000670和SIX1表达水平降低，miR-515-5p的表达水平升高(均 P<0.05)。 结论:敲降circ_0000670的表达可通过调控miR-515-5p/SIX1分子轴从而减弱胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力，诱导细胞周期阻滞于G 0/G 1期及促进细胞凋亡。

目的:探讨二甲双胍调控miR-340-5p/DEAD-box解旋酶17（DEAD-box helicase 17，DDX17）轴对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:MC3T3-E1细胞分为对照组、高糖组、二甲双胍组、inhibitor NC组、miR-340-5p inhibitor组、二甲双胍+mimic NC组、二甲双胍+miR-340-5p mimic组，qRT-PCR检测miR-340-5p表达；Western blot检测DDX17、细胞周期素D1（Cyclin D1）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Cleaved aspartate-specific cysteine protease-3，Cleaved caspase-3）蛋白；CCK-8、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（5-ethynyl-2’-deoxyuridine，EdU）染色检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；荧光原位杂交实验、双荧光素酶分别验证miR-340-5p与DDX17的定位、靶向关系。结果:与对照组比较，高糖组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高（ t=19.81，39.47，24.61，21.62， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达降低（ t=7.624，30.100，26.54，19.46，21.20， P均<0.001）；与高糖组比较，二甲双胍组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达降低（ t=13.37，28.55，18.35，18.78， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达升高（ t=7.97，25.76，18.48，12.39，18.98， P均<0.001）；与高糖组、inhibitor NC组比较，miR-340-5p inhibitor组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达降低（ F=85.92，301.11，142.64，170.35， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达升高（ F=26.54，447.72，249.31，113.46，393.27， P均<0.001）；与二甲双胍组、二甲双胍+mimic NC组比较，二甲双胍+miR-340-5p mimic组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高（ F=36.27，395.56，94.90，18.59， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达降低（ F=21.44，128.47，24.28，25.89，18.06， P均<0.001）。miR-340-5p靶向调控DDX17表达，且二者共定位于细胞质中。 结论:二甲双胍通过下调miR-340-5p表达，上调DDX17表达进而促进高糖诱导的MC3T3-E1细胞增殖，抑制凋亡。

目的:探讨非小细胞肺癌（NSCLC）脑转移患者血清外泌体中miRNA-21（miR-21）、miRNA-330（miR-330）的表达水平及二者与患者预后的关系。方法:前瞻性队列研究。前瞻性选择2021年3月至2022年9月就诊于山东第一医科大学附属人民医院的125例NSCLC患者，经CT、头部增强磁共振成像或手术病理检查判断是否脑转移。将NSCLC患者按照是否合并脑转移分为转移组（58例）和未转移组（67例），选择同期收治的50例肺部良性疾病患者及同期体检的50名体检健康者分别为良性组和健康对照组。收集所有研究对象血清样本（其中患者为治疗前样本），提取外泌体，采用实时荧光定量聚合酶链反应法测定外泌体中miR-21、miR-330转录水平相对表达量；采用电化学发光免疫法测定血清肿瘤标志物[神经元特异性烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、鳞状细胞癌抗原（SCCA）]水平。比较4组血清外泌体中miR-21、miR-330及血清肿瘤标志物水平，采用Pearson法分析NSCLC脑转移患者治疗前血清外泌体miR-21、miR-330间相关性及二者与血清肿瘤标志物间的相关性。以CT、头部增强磁共振成像或手术病理确定的脑转移为金标准，绘制依据治疗前血清外泌体中miR-21、miR-330水平单独及二者联合判断NSCLC患者脑转移发生的受试者工作特征（ROC）曲线。根据NSCLC患者随访期间是否因肿瘤病死，将NSCLC患者分为预后不良组和预后良好组，对比两组临床特征及治疗前血清外泌体中miR-21、miR-330水平。采用多因素logistic回归分析NSCLC患者因肿瘤病死的独立影响因素。结果:125例NSCLC患者中，男性68例（54.4%），女性57例（45.6%）；年龄（63±5）岁，范围：49~82岁；腺癌89例（71.2%），鳞状细胞癌36例（28.8%）。健康对照组、良性组、未转移组、转移组血清外泌体中miR-21转录水平相对表达量依次升高，miR-330转录水平相对表达量依次下降，血清NSE、CEA、SCCA蛋白浓度依次升高，两两组间比较，差异均有统计学意义（均 P<0.001）。Pearson相关性分析显示，NSCLC脑转移患者治疗前血清外泌体中miR-21与血清NSE、CEA、SCCA水平呈正相关性（ r值分别为0.641、0.785、0.612， P值分别为0.015、0.011、0.019），治疗前血清外泌体中miR-330与血清NSE、CEA、SCCA水平呈负相关性（ r值分别为-0.612、-0.689、-0.587， P值分别为0.016、0.021、0.013），治疗前血清外泌体中miR-21与miR-330呈负相关性（ r=-0.529， P=0.023）。ROC曲线分析显示，治疗前血清外泌体中miR-21、miR-330单独及二者联合判断NSCLC患者脑转移发生的曲线下面积分别为0.861（95% CI：0.792~0.931）、0.894（95% CI：0.840~0.947）、0.906（95% CI：0.849~0.963），差异均有统计学意义（均 P<0.001）；miR-21相对表达量最佳临界值为1.625，相应的灵敏度、特异度分别为77.4%、71.5%，miR-330相对表达量最佳临界值为0.611，相应的灵敏度、特异度分别为81.1%、74.9%，二者联合时达最佳临界值时的灵敏度和特异度分别为84.5%、73.8%。NSCLC患者中位随访19个月（95% CI：17~21个月），随访期间因肿瘤病死23例（18.4%）。预后不良组中年龄≥60岁、临床分期Ⅲ~Ⅳ期、脑转移患者的比例及治疗前血清外泌体中miR-21相对表达量均高于预后良好组，治疗前血清外泌体中miR-330相对表达量低于预后良好组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。多因素logistic回归分析显示，年龄高（≥60岁比<60岁， OR=3.750，95% CI：1.191~11.806， P=0.024）、临床分期晚（Ⅲ~Ⅳ期比Ⅰ~Ⅱ期， OR=4.667，95% CI：1.303~16.716， P=0.018）、脑转移（转移比未转移， OR=2.573，95% CI：1.008~6.611， P=0.049）、治疗前血清外泌体中miR-21相对表达量升高（ OR=2.585，95% CI：1.198~6.152， P=0.008）是NSCLC患者因肿瘤病死的独立危险因素，治疗前血清外泌体中miR-330相对表达量升高是因肿瘤病死的独立保护因素（ OR=0.821，95% CI：0.715~0.954， P<0.001）。 结论:NSCLC脑转移患者治疗前血清外泌体中miR-21水平高，miR-330水平低，二者间呈负相关，且二者与NSCLC脑转移患者血清多种肿瘤标志物及NSCLC患者预后密切相关；二者联合可能预测NSCLC脑转移发生情况。