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miRNA-4469靶向PDIA4基因调控肾癌细胞的增殖和侵袭
编辑人员丨1周前
目的:探讨miRNA-4469（miR-4469）体外调控肾癌细胞增殖和侵袭的机制。方法:基于OncomiR数据库分析miR-4469不同表达水平患者生存差异。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测miR-4469在肾癌细胞株ACHN、OS-RC-2、SK-RC-20、769-P、A498和正常肾小管上皮细胞株HK-2中的表达，将miR-4469表达水平最低的肾癌细胞分为miR-4469组和对照组，分别转染miR-4469模拟物和阴性对照序列。采用CCK-8法检测两组细胞增殖能力（以吸光度值表示），采用Transwell实验分析两组侵袭细胞数。应用TargetScan Release 8.0软件预测miR-4469与蛋白二硫化物异构酶A4（PDIA4）mRNA的结合位点，采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-4469与PDIA4 mRNA的靶向关系。采用qRT-PCR法检测各组细胞PDIA4 mRNA的表达量，采用蛋白质印迹法检测各组细胞PDIA4蛋白和PI3K-AKT-m-TOR通路蛋白表达水平。结果:分析OncomiR数据库相关数据显示，miR-4469高表达肾癌患者的总生存优于miR-4469低表达患者（ P<0.001）。各肾癌细胞株中miR-4469的相对表达量均低于HK-2细胞（均 P<0.05），其中769-P细胞miR-4469表达量最低，选取769-P细胞进行后续实验。miR-4469组769-P细胞增殖能力低于对照组（ P<0.01）。miR-4469组769-P细胞侵袭数少于对照组[（19± 3）个比（64±7）个， t＝5.44， P＝0.002]。与共同转染野生型PDIA4和miR-4469阴性序列组相比，共同转染野生型PDIA4和miR-4469模拟序列组细胞相对荧光素酶活性低（0.42±0.07比1.01±0.08， t＝5.74， P＝0.001）；共同转染突变型PDIA4和miR-4469阴性序列组与共同转染突变型PDIA4和miR-4469模拟序列组间细胞相对荧光素酶活性差异无统计学意义（0.99±0.11比1.02±0.11， t＝0.19， P＝0.001）。miR-4469组769-P细胞PDIA4 mRNA相对表达量低于对照组[0.98±0.23比7.19±2.23， t＝2.77， P＝0.032]。与对照组相比，miR-4469组769-P细胞PDIA4蛋白和PI3K-AKT-m-TOR通路相关的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-SGK1蛋白表达量均低（均 P<0.05）。 结论:miR-4469与肾癌患者生存可能有相关性，其在各肾癌细胞株中表达均下调。miR-4469可能通过PDIA4调节PI3K-AKT-m-TOR通路，从而抑制肾癌769-P细胞增殖和侵袭。
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编辑人员丨1周前
