目的 探索胃癌发生过程的风险miRNAs,为上消化道机会性筛查中早期胃癌识别提供依据.方法 纳入2021年6月至2023年8月在广西医科大学附属肿瘤医院、右江民族医学院附属医院、桂林市人民医院3个中心进行上消化道癌机会性筛查的人群.选取健康体检者107例、早期胃癌患者71例、进展期胃癌患者97例.首先采用转录组测序筛选差异表达miRNAs,然后在3组前瞻性人群的血浆样本中通过RT-qPCR验证差异表达的miRNAs,最后采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估miRNAs的诊断效能.结果 转录组测序的差异基因分析共筛选出胃癌发生过程中的6个差异表达miRNAs,包括miR-3176、miR-885-5p、miR-203a-3p、miR-452-5p、miR-223-3p、miR-219a-2-3p.RT-qPCR结果显示,miR-452-5p在早期胃癌及进展期胃癌患者中表达上调(均P＜0.001).ROC曲线显示,miR-452-5p诊断早期胃癌和进展期胃癌的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.900、0.975.区分早期胃癌与进展期胃癌的AUC为0.843.结论 miR-452-5p在早期胃癌中具有良好的诊断效能,可能作为液体活检诊断早期胃癌的潜在生物标志物.

目的 通过观察异体输血对创伤性失血患者外泌体miRNA的差异表达,筛选出差异表达的外泌体miRNA,为后续靶基因和通路的研究奠定基础.方法 分别采集外伤患者在输异体血前和输血后外周血标本各3例,通过对血浆标本分离收获后的外泌体miRNA高通量测序,分析比较输血前后两组外泌体miRNA差异表达情况,同时以荧光定量PCR法进一步验证差异基因表达情况.结果 通过高通量测序分析,共测序到1 570个miRNA存在差异表达,实验组比较对照组,上调的有1 189个,下调的有381个,以倍数变化Fold change≥2.0,P-value ≤0.05作为差异miRNA筛选的阈值,筛选出显著变化的差异表达miRNA有 14个,其中显著上调的miRNA有5个,分别为miR-499a-5p、miR-200a-3p、miR-372-3p、miR-novel-chr12_5583、miR-novel-chr22_24253;显著下调的miRNA有9个,分别为miR-6852-5p、miR-452-5p、miR-1287-5p、miR-204-3p、miR-375-3p、miR-502-3p、miR-345-5p、miR-novel-chr7_38986、miR-451a.结论 输注同种异体血液对创伤性失血患者的外泌体miRNA存在差异表达.其发生机制可能通过不同信号通路对患者机体免疫系统调节产生影响.然而,对患者机体免疫调节程度、与肿瘤的相关性有待于扩大样本量进一步研究.

目的 研究miRNA 452-5P及miRNA 215-5P在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并分析其诊断价值.方法 收集30组结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织,采用实时荧光定量PCR技术检测全部患者结直肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织中miRNA 452-5p、miRNA 215-5p的表达,分析其与临床病理资料之间的关系,并进行ROC分析.结果 miRNA 452-5P在结肠癌组织中表达显著下调(P<0.001),miRNA 215-5p在结肠癌组织中表达显著上调(P<0.001),两种miRNA与结直肠癌患者年龄、性别、分化程度、肿瘤位置、浸润深度、淋巴转移、Dukes分期等均不相关.miRNA 452-5p曲线下面积AUC=0.859(95％CI:0.719.0.999),miRNA 215-5p曲线下面积为AUC=0.879(95％CI:0.757.1.0).2-miRNAs panel曲线下面积为AUC=0.930(95％CI:0.833.1.0).结论 miRNA 452-5p在结肠癌组织中表达显著下调,miRNA 215-5p在结直肠癌组织中表达显著上调.2-miRNAs panel对结直肠癌诊断价值较高,可作为潜在的结直肠癌诊断价值的分子标志物和治疗靶点.

目的: 比较人牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs) 与根尖牙乳头干细胞(Stem cells from the apical papilla, SCAPs) 中miRNAs 的差异表达情况.方法: 分离培养人DPSCs 和SCAPs,标记STRO-1 特异性抗体,利用免疫磁珠分选获得DPSCs 和SCAPs.进行成骨样和成脂样细胞诱导分化,用碱性磷酸酶(ALP) 、茜素红染色和油红O 染色的方法鉴定其分化能力.采用二代测序技术,检测DPSCs 和SCAPs 中miRNAs 的表达,筛选差异表达的miRNAs,运用生物信息学方法对差异表达miRNAs 进行靶基因预测和功能分析.结果: 与DPSCs 相比,SCAPs 中表达下调超过1. 5 倍的miRNAs 有7 个 (hsa-miR-224-5p、hsa-miR-1247-5p、hsa-miR-3065-3p、hsa-miR-452-5p、hsa-miR-767-5p、hsa-miR-4284、hsa-miR-146a-5p) ,无表达上调miRNAs.这些表达下调的miRNAs 所调控的下游靶基因主要有27 个,这些靶基因主要参与了细胞的迁移、分化和凋亡.结论: 特定miRNAs 表达的下调以及其所调控的下游靶基因可能与SCAPs 的干性维持相关.

目的 筛选胃癌血浆外泌体中差异表达的miRNA,分析其对胃癌诊断的敏感性与特异性及与胃癌患者的疾病特点之间的相关性.方法 收集南京医科大学第一附属医院消化内科病理确诊为胃癌的住院患者与消化内科及体检中心的无癌健康对照人群的血液样本,离心后试剂盒抽提血浆外泌体及其RNA,通过透射电子显微镜观察、蛋白质印迹分析(Western blotting)鉴定标志蛋白及纳米粒径分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)对血浆外泌体进行鉴定,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)鉴定与胃癌发病相关的miRNA.结果 共纳入胃癌患者80例和健康对照80名.成功对2例血浆外泌体(GC1和NC1)进行鉴定以证实其相关特性.在初始筛选阶段,对12例胃癌和12名健康对照者的血浆外泌体RNA进行qRT-PCR验证并依据其各自的2-△Ct值,分析受试者的诊断ROC曲线下面积(AUC).与健康对照者相比,胃癌的血浆外泌体miR-452-5p表达量显著升高(P=0.002),miR-452-5p的AUC值为0.798(95％CI:0.552～0.883).而后纳入新的68对样本对筛选结果进一步验证,miR-452-5p的表达趋势与初始筛选一致,且诊断AUC值为0.733(95％CI:0.647～0.818).分析已验证的miR-452-5p表达水平与胃癌病理特征无相关性(P>0.05).结论 血浆外泌miR-452-5p可能为检测胃癌的新型潜在生物标志物,然而其对疾病的病理特性的影响仍需更大样本量的实验进一步研究.

为了探究肝细胞癌中miR-452-5p对患者预后生存的影响及其对肝癌细胞增殖、迁移的作用.采用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中肝细胞肝癌数据集对miR-452-5p进行差异表达分析和Kaplan-Meier生存分析.采用TargetscanHuman和miRDB靶基因数据库对miR-452-5p靶基因进行预测;采用基因差异表达分析和加权基因共表达网络分析(WGCNA)的方法对数据集GSE14520进行分析计算.用Lipofectmine-2000将miR-452-5p模拟物、模拟物阴性对照和miR-452-5p抑制剂、抑制剂阴性对照分别转染到Huh7细胞中.分别采用RT-qPCR和Western blot实验,检测4组细胞中RORα在mRNA和蛋白水平上的表达情况.采用CCK-8、Transwell实验,检测4组细胞的增殖活力以及迁移能力.双荧光素酶报告基因实验验证Huh7细胞中miR-452-5p与RORα的调控关系.经TCGA数据分析,miR-452-5p在肝癌组织中高表达且显著影响患者预后总生存期.通过miRNA靶基因预测、基因差异表达分析、WGCNA分析,筛选出关键基因RORα和LAMC1.通过Kaplan-Meier生存分析得知RORα的异常表达显著影响肝癌患者的预后总生存期.肝癌细胞中miR-452-5p的过表达,会降低RORα的mRNA和蛋白表达,同时增强肝癌细胞的增殖能力和迁移能力.双荧光素酶报告基因实验结果证实了miR-452-5p靶向RORα的3′UTR区.在肝细胞癌患者中高表达的miR-452-5p靶向抑制了RORα的表达,促进了肝癌细胞增殖和迁移,进而加剧了肝癌的进展和预后不良.

目的 观察miR-452-5p对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并预测其作用靶点.方法 将肝癌SMMC7721细胞分为miR模拟组、对照1组、miR抑制组、对照2组;miR模拟组转染miR-452-5p mimic,对照1组转染miR-452-5p mimic NC,miR抑制组转染miR-452-5p inhibitor,对照2组转染miR-452-5p inhibitor NC;转染24 h后,采用细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测肝癌细胞迁移能力,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.miRNA靶基因预测软件得出EPB41L33'UTR含有miR-452-5p的结合位点,利用双荧光素酶报告实验验证miR-452-5p与EPB41L33'UTR的结合;采用Western blotting法检测miR模拟组、对照1组、miR抑制组、对照2组细胞中的EPB41L3蛋白.结果 miR模拟组细胞迁移率及Transwell实验迁移细胞数、侵袭细胞数高于对照1组(P均<0.05).miR抑制组细胞迁移率及Transwell实验迁移细胞数、侵袭细胞数低于对照2组(P均<0.05).双荧光素酶报告实验结果提示miR-452-5p可以直接结合EPB41L33'UTR,即EPB41L3是miR-452-5p的直接靶基因.miR模拟组细胞中EPB41L3蛋白表达低于对照1组,miR抑制组细胞中EPB41L3蛋白表达高于对照2组(P均<0.01).结论 miR-452-5p高表达可提高肝癌细胞的迁移侵袭能力,作用机制可能与靶向调控EPB41L3有关.