目的:构建含Survivin基因启动子的、肿瘤特异性Survivin、Livin共沉默RNAi载体,研究该载体在前列腺癌细胞中的RNA沉默作用.方法:运用分子克隆技术,选取Survivin、Livin基因RNAi特异性序列,构建以Survivin、Livin基因为靶点的、含Survivin启动子的CGM30 miR-30 shRNA载体.经测序验证,用脂质体法转染PC-3细胞,RT-PCR、免疫印迹实验检测Survivin、Livin的表达变化,并用流式细胞术检测转染后PC-3细胞的凋亡变化.结果:构建的共沉默RNAi重组载体转染PC-3细胞后,Survivin、Livin基因在mRNA和蛋白水平上的表达均明显下调(P＜0.01),且转染后的细胞凋亡增加了约15％,而正常前列腺上皮BPH-1细胞中则无此作用.结论:成功构建了含Survivin启动子、特异性沉默Survivin、Livin基因表达的RNAi共沉默载体CGM30-SP-sw-liv,转染该重组质粒后可促进肿瘤细胞的凋亡.
作者：沈建军；李斌；龙敏；姜南艳；林芳；何婷；张惠中
来源：现代肿瘤医学 2013 年 21卷 9期
