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目的 优化结核分枝杆菌wbbL基因在大肠埃希菌中的表达,获得大量可溶性产物并加以鉴定.方法 不同条件下诱导pET16b-wbbL质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达;建立外源重组蛋白质与分子伴侣在大肠埃希菌中的共表达体系,优化其表达条件;超声破碎诱导表达的大肠埃希菌,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物;免疫蛋白印迹(Western blotting)法对重组蛋白质进行鉴定.结果 共表达体系优化表达的蛋白质主要以可溶性形式存在,经0.5 g/L L-阿拉伯糖30℃诱导5 h、0.5 mmol/L异丙酸-D-硫代半乳糖苷30℃诱导2 h时,可溶性目的 蛋白的产量最多,占细胞蛋白总量的55.6

作者:邬强;辛毅;马郁芳

来源:中国公共卫生 2009 年 25卷 10期

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作者:
邬强;辛毅;马郁芳
来源:
中国公共卫生 2009 年 25卷 10期
标签:
结核分枝杆菌 克隆 包涵体 蛋白质可溶性
目的 优化结核分枝杆菌wbbL基因在大肠埃希菌中的表达,获得大量可溶性产物并加以鉴定.方法 不同条件下诱导pET16b-wbbL质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达;建立外源重组蛋白质与分子伴侣在大肠埃希菌中的共表达体系,优化其表达条件;超声破碎诱导表达的大肠埃希菌,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物;免疫蛋白印迹(Western blotting)法对重组蛋白质进行鉴定.结果 共表达体系优化表达的蛋白质主要以可溶性形式存在,经0.5 g/L L-阿拉伯糖30℃诱导5 h、0.5 mmol/L异丙酸-D-硫代半乳糖苷30℃诱导2 h时,可溶性目的 蛋白的产量最多,占细胞蛋白总量的55.6

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