目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌热休克蛋白65 (Heat Shock Protein 65),为研究结核病诊断技术提供基础.方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中分两段扩增出hsp65基因,将上下游基因片段分别连接进入pMD18-T载体中,序列测定正确后,通过基因内部的单一酶切位点进行连接.将完整的hsp65基因克隆到pProEX Hta载体并在大肠杆菌DH5α中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化.获得的纯化蛋白与10例临床可疑结核病人血清进行Western-blot分析.结果 获得的结核分枝杆菌Hsp65基因序列与GenBank公布的一致;表达蛋白相对分子质量为65kDa,与文献报道相同;Western-blot结果显示,在相对分子量约65kDa处与鼠抗MTB Hsp65mAb特异性结合带;纯化的目的蛋白与8例病人血清有特异性结合条带,2例为阴性,该结果与临床诊断一致.结论 成功表达、纯化和鉴定了Hsp65蛋白,为其在结核病诊断研究中的应用奠定了基础.
作者：席丽；师长宏；靳亚平；张廷芬；赵勇；岳晨莉
来源：中国人兽共患病学报 2008 年 24卷 6期
