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目的 对结核分枝杆菌的分泌蛋白Hsp65基因进行克隆、表达和纯化,为结核病的诊断、重组疫苗的应用提供理论基础.方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中克隆了Hsp65基因,将其链接到pMD18-T载体中,序列测定正确后,将完整的Hsp65基因克隆到Pet28a载体并在大肠杆菌BL21中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE进行鉴定,并通过亲和层析对蛋白进行纯化.结果 克隆的Hsp65基因序列与GenBank公布的序列有高度同源性,表达蛋白相对分子量为65 kD,并能够纯化出单一的目的 蛋白.结论 成功克隆了Hsp65基因,实现了该基因的表达和纯化,为其在结核病诊断研究中的应用奠定了基础.
作者：李书君；李爱敏
来源：广东医学 2010 年 31卷 3期
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