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杂交兰实时荧光定量PCR内参基因的筛选
编辑人员丨2023/8/6
为了给杂交兰的基因功能表达和调控研究提供内参基因,本研究采取同源克隆方法和RT-PCR技术,以杂交兰‘黄金小神童’叶片为材料,分离杂交兰Ch18S rRNA、Ch28S rRNA、ChACT、Ch TUA、ChTUB、ChUBQ、ChEF-1α和ChrpoB基因的片段,以10个不同品种杂交兰叶片及‘黄金小神童’花器官不同部位为材料,利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)检测分析各引物的扩增效率和相对表达量,采用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件对各个候选内参基因的表达稳定性进行分析,并通过研究杂交兰花器官不同部位ChPDS基因的表达模式来验证筛选得到的内参基因的可靠性.结果显示,各引物扩增的片段长度分别为171 bp、148 bp、183 bp、146 bp、130 bp、147bp、203 bp、139 bp,扩增效率分别为1.94、2.19、1.88、1.99、2.12、2.20、2.11、1.98.综合3个软件的评价结果发现,杂交兰不同品种叶片中最佳内参基因为ChACT,不同花器官部位中最稳定内参基因为ChACT、Ch TUB、ChUBQ和ChEF-1 α;而对于实验中所有样品来说,内参基因稳定性最高的为ChTUB;说明不同的实验条件下,所需的内参基因不同.ChPDS法因相对表达水平分析结果证实了所筛选内参基因的可靠性,以ChUBQ、ChEF-1α、Ch TUB、ChACT及Ch UBQ和ChEF-1α基因组合进行校正的ChPDS基因的相对表达量均为花瓣＞唇瓣＞蕊柱.
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编辑人员丨2023/8/6
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大花蕙兰'黄金小神童'胚性愈伤组织诱导及植株再生研究
编辑人员丨2023/8/5
为解决大花蕙兰园艺品种'黄金小神童'(Cymbidium Golden Elf'Sundust')人工繁育周期长、系数低等问题,该研究以其侧芽茎尖为外植体,在1/2MS+1.0 mg·L-1 NAA+50 g·L-1香蕉泥+15 g·L-1蔗糖中培养60 d后,以获得的愈伤组织与原球茎混合物为材料,通过L9(3)4正交与完全组合实验研究不同因素及组合对'黄金小神童'胚性愈伤组织和原球茎发生及增殖的影响,进而建立'黄金小神童'高效、稳定的丛芽增殖和植株再生体系.结果表明:(1)在MS+2.0 mg·L-16-BA+150 mL·L-1椰汁+20 g·L-1蔗糖中,培养70 d后增殖系数达8.13,同时可获得桑葚状原球茎团.(2)原球茎团在MS+1.0 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1 NAA中培养70 d后,原球茎发育为幼芽,丛芽发生系数可达5.36;此时,将由原球茎诱导得到的簇状丛芽转接至MS+1.0 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1 NAA中,以"芽繁芽"方式增殖,其增殖系数也达到4.28,此时可建立起稳定的增殖体系.(3)无菌苗生根则在MS+1.0 mg·L-1 NAA+150 g·L-1香蕉泥中进行,培养60 d可得到具4～7片真叶、高度为8～10 cm的健壮生根苗,生根率达96.5％;再生苗经露苗后移栽到松树皮和山基土体积比为3:2的基质中,成活率在85％以上.通过愈伤组织与原球茎-胚性愈伤组织与原球茎-原球茎-丛芽-再生植株途径最终建立了'黄金小神童'高效、稳定的丛芽快速繁殖体系,该研究结果为进一步开展其人工繁育和遗传转化提供了实验依据,也为兰科其他物种的无性快速繁殖提供了参考.
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编辑人员丨2023/8/5
