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小檗碱、巴马汀和药根碱在“三明治”培养大鼠原代肝细胞中的胆汁外排特征
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究小檗碱、巴马汀和药根碱在大鼠原代细胞的胆汁外排特征.方法 建立“三明治”培养大鼠原代肝细胞(sandwich cultured rat hepatocytes,SCRH)模型,分别加入小檗碱、巴马汀、药根碱,在含Ca2+和无Ca2+缓冲液中孵育,采用UPLC-MS/MS分别测定3种生物碱的细胞蓄积量,计算胆汁排泄指数和胆汁清除率,评价小檗碱、巴马汀、药根碱在大鼠原代细胞的胆汁外排特征;并考察P-gp、Mrp2抑制剂对3种活性成分在SCRH细胞模型中的外排转运影响.结果 随着孵育时间的延长,3种生物碱的细胞蓄积量增加,且含Ca2+条件下的细胞蓄积量与无Ca2+条件下相比具有明显差异;P-gp抑制剂环孢素A、维拉帕米均能减少小檗碱、巴马汀、药根碱的胆汁排泄,且呈浓度依赖性,Mrp2抑制剂MK571、丙磺舒对3种生物碱的胆汁排泄无明显影响.结论 小檗碱、巴马汀、药根碱均经过胆汁外排,P-gp介导了3种生物碱的胆汁外排,Mrp2未参与其胆汁排泄.
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编辑人员丨2023/8/6
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何首乌炮制前后对胆红素肝细胞摄取及胆汁排泄的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究何首乌炮制前后提取物对胆红素(UCB)摄取及外排的影响,为何首乌临床合理应用提供参考.方法 以大鼠原代肝细胞作为研究模型,UCB作为底物,单层贴壁培养分别进行细胞增殖毒性和摄取实验,“三明治培养”原代肝细胞进行胆汁排泄实验.用HPLC测定UCB的细胞蓄积量,计算胆汁外排指数(BEI)和胆汁清除率(CL).结果 何首乌提取物(RPME)对大鼠原代肝细胞作用12h、24h、48h的IC50值分别为:920.8±42.71、351.3±50.1、480.4±93.57μg/ml,对胆红素摄取的IC50值是211.1±12.27 μg/ml,低、中、高剂量计算出的BEI值为39.3％、32.68％、43.7％,CL值为0.0022、0.0022、0.0021 min-1·kg-1;制何首乌提取物(PPME)对大鼠原代肝细胞作用12h、24h、48h的IC50值分别为:一、6723.67±925.25、3871±728.32μg/ml,抑制胆红素摄取的IC50值是1331±128.93μg/ml,低、中、高剂量计算出的BEI值为33.24％、37.80％、18.32％,CL值为0.0016、0.0033、0.0011min-1·kg-1.结论 在本研究浓度范围跟作用时间内,何首乌炮制前后对大鼠原代肝细胞的增殖、胆红素的摄取及胆汁排泄均有一定抑制作用,增殖与摄取抑制作用随着浓度的增加而增强,但胆汁排泄抑制作用并不具有浓度依赖性.
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编辑人员丨2023/8/6
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在"三明治"培养大鼠原代肝细胞中研究利福平及联用丹参酮ⅡA对普伐他汀经BSEP转运的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 以普伐他汀为BSEP底物,在"三明治"培养大鼠原代肝细胞模型上(sandwich-cultured rat hepatocytes,SCRH),研究利福平及联用丹参酮ⅡA对BSEP转运能力的影响.方法 构建SCRH模型,利用MTT筛选给药剂量;建立普伐他汀的HPLC-MS/MS检测方法并进行方法学验证;考察利福平及联用丹参酮ⅡA对胆管内普伐他汀浓度的影响,并计算胆管外排指数(biliary excretion index,BEI).结果 成功构建了SCRH模型,并确定了利福平、丹参酮ⅡA、格列本脲及普伐他汀的合适给药剂量;建立了稳定可靠的普伐他汀HPLC-MS/MS检测方法;与空白组相比,利福平能够降低胆管内普伐他汀的浓度和普伐他汀的BEI,高浓度利福平的降低效果最明显(P<0.01);与利福平高浓度组相比,联用丹参酮ⅡA后,胆管中普伐他汀的浓度以及普伐他汀的BEI增大,高浓度丹参酮ⅡA的增加效果最明显(P<0.01).结论 在SCRH中,利福平能够抑制BSEP的转运能力,丹参酮ⅡA可以逆转利福平对BSEP转运能力的抑制作用.
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编辑人员丨2023/8/6
