目的:观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并进一步探究其分子机制。方法:利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达；构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC)，包装慢病毒颗粒，分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2)；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化；采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化；采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化；采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果:Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织( P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检测结果显示病毒感染后的细胞SPRK1在mRNA和蛋白水平均明显下调；在慢病毒感染后的T24细胞中，第3~5天干扰组的吸光度值均低于阴性对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)；在慢病毒感染后的5637细胞中，第2~5天干扰组的吸光度值均低于阴性对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)；Transwell细胞迁移和侵袭实验显示：与阴性对照组比较，干扰组的迁移和侵袭的膀胱癌细胞数目均明显减少，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；Western blot结果显示，与阴性对照组比较，干扰组的E-cadherin表达量增加，而N-cadherin和vimentin的表达明显减少，同时AKT通路蛋白p-AKT及p-GSK3β明显下调，差异均有统计学意义( P<0.001)。 结论:SRPK1基因在膀胱癌组织中高表达，下调SRPK1的表达可抑制膀胱癌细胞的增殖，并降低膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。

目的 研究HL-7702、MHCC-97L、MHCC-97H细胞中的GPC3、HIF-1ɑ和SRPK2中的mRNA、蛋白表达情况,探讨其与肝细胞癌(HCC)的相关性.方法 研究这3种细胞系中GPC3、HIF-1ɑ、SRPK2 3种基因的蛋白和mRNA的表达情况,需要通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot).结果 在线网站分析结果 显示,相对这3种基因表达低的HCC患者而言,高表达的生命周期明显降低(P<0.05).体外实验证明,高表达的HCC细胞表达的GPC3和SRPK2、HIF-1ɑ的mRNA和蛋白的表达水平都比HL-7702的高,且MHCC-97H与MHCC-97L细胞相比,各基因的表达水平较高.相关性分析显示HIF-1ɑ与SRPK2呈正相关(r=0.69),GPC3与SRPK2呈正相关(r=0.23).结论 HCG的转移能力越强,GPC3、HIF-1ɑ、SRPK2 的蛋白和mRNA的表达水平也越高,而且这3种基因与GPC3的表达也呈正相关.

背景 多发性骨髓瘤发病率长期居高不下,但目前关于磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)信号通路和M2 巨噬细胞极化促进多发性骨髓瘤发生进展的研究较少.目的 探讨M2 巨噬细胞在多发性骨髓瘤患者中的表达及PI3K/AKT信号通路促进M2 巨噬细胞极化的机制研究.方法 选取 2021 年 10 月—2022年 4 月于桂林医学院附属医院血液内科确诊的多发性骨髓瘤患者 48 例为试验组,选取同期健康志愿者(血液内科骨髓移植健康供者)30 名为对照组.取 2 组研究对象外周血并分离单个核细胞,流式细胞术检测M2 巨噬细胞比例.采用细胞传代培养RPMI8226 细胞,通过佛波酯分化培养单核巨噬细胞THP-1 为巨噬细胞.根据实验需要将瘤细胞培养并采用siRNA转染沉默磷酸酶基因(PTEN)分成 3 组:空白组、siRNA-PTEN实验组、siRNA对照组;收集以上 3 组细胞培养基上清液加入巨噬细胞共培养体系后分为 4 组:M0 巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN上清液组、siRNA上清液组.采用Western blot实验检测多发性骨髓瘤细胞培养的空白组、siRNA-PTEN实验组、siRNA对照组的AKT、p-AKT、PI3K-p85、p-PI3K-p85 蛋白表达水平.采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测多发性骨髓瘤细胞培养的空白组、siRNA-PTEN实验组、siRNA对照组的基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 的mRNA表达水平.采用流式细胞术检测多发性骨髓瘤上清液共培养的M0 巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN上清液组、siRNA上清液组M2 巨噬细胞中特异性抗体CD163、CD206、F4/80 表达水平.采用荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤上清液共培养的M0 巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN上清液组、siRNA上清液组M2 巨噬细胞特异标志物精氨酸酶1(ARG-1)、白介素10(IL-10)的mRNA表达水平.结果 试验组M2巨噬细胞表达水平高于对照组(t=0.855,P<0.001).siRNA-PTEN实验组中p-AKT/AKT、p-PI3K-p85/PI3K-p85 蛋白表达水平均高于空白组和siRNA对照组(P<0.05).siRNA-PTEN实验组中MMP2、MMP9 的mRNA表达水平均高于空白组和siRNA对照组(P<0.05).siRNA-PTEN上清液组M2 巨噬细胞特异性抗体CD163+F4/80、CD206+F4/80 表达水平高于瘤细胞上清液组和siRNA上清液组(P<0.05).siRNA-PTEN上清液组M2 巨噬细胞特异标志物ARG-1、IL-10 的mRNA表达水平高于瘤细胞上清液组和siRNA上清液组(P<0.05).结论 多发性骨髓瘤患者中M2 巨噬细胞表达上调,多发性骨髓瘤细胞可通过激活PI3K/AKT信号通路促进M2 巨噬细胞极化,调控骨髓瘤细胞微环境.

胃癌是常见的恶性肿瘤之一,世界范围内发病率占恶性肿瘤第4位,病死率居第2位[1].越来越多的研究认为肿瘤的发生是一系列分子生物学作用的结果.早期诊断早期治疗,能够提高胃癌患者的生存率,因此探索敏感度和特异度较高的肿瘤标记物,早期发现胃癌,能够提高胃癌患者生存率[2].丝氨酸-精氨酸蛋白特异性激酶1 (serine-arginine protein ki-nase 1,SRPK1)是一种对精氨酸/丝氨酸富含结构域(RS结构域)有很高特异性的RNA剪接激酶,SRPK1在肿瘤的发展过程通过识别精氨酸,磷酸化丝氨酸进而导致肿瘤的进展[3].很多研究报道SRPK1在多种肿瘤的发生中起重要作用,其中在非小细胞肺癌中,Liu等[4]发现过表达的SRPK1表达可以促进肺癌细胞的增殖、侵袭、转移及促进肿瘤形成,推测SRPK1作为癌基因在非小细胞肺癌形成过程中起作用.

目的 探讨丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶-2(SRPK2)在胃癌组织中的表达情况与胃癌患者临床特征及预后的关系.方法 收集胃癌患者经手术切除的胃癌组织及相应的癌旁组织标本各85例,采用免疫组织化学法检测SRPK2在85例胃癌患者胃癌组织及癌旁组织中的表达情况,分析胃癌组织中SRPK2阳性表达与胃癌患者临床特征及预后的关系.结果 免疫组化染色结果显示,胃癌组织中SRPK2的阳性表达率明显高于癌旁组织(P﹤0.01).浸润深度(根据T分期)为T3～4期、有淋巴结转移、肿瘤直径﹥5 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者胃癌组织中SRPK2的阳性表达率均高于浸润深度(根据T分期)为T1～2期、无淋巴结转移、肿瘤直径≤5 cm、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期的胃癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤部位胃癌患者胃癌组织中SRPK2的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).Kaplan-Meier生存曲线显示,SRPK2阳性表达的胃癌患者的术后5年总生存率低于SRPK2阴性表达的胃癌患者(P﹤0.05).结论 SRPK2在胃癌组织中的阳性表达率较高,可能与胃癌的发生、发展有关.SRPK2阳性表达的胃癌患者的预后较差,其可能成为胃癌临床诊疗及预后评估的生物学标志物.

目的 通过磷酸化蛋白质组学和蛋白质组学联合分析,探讨子宫内膜异位症发病机制相关的特异性蛋白和磷酸化位点,以期对子宫内膜异位症的早期诊断及非激素治疗靶点研究提供理论依据.方法 选择2019年1月至2021年12月新疆医科大学第五附属医院卵巢子宫内膜异位囊肿患者为研究对象,取患者异位子宫内膜(PPF组)、在位子宫内膜(PNP组)组织样本各5例,选取异常子宫出血且排除子宫内膜异位症的患者行宫腔镜检查并行诊断性刮宫术,子宫内膜病理结果为正常增殖期子宫内膜(NPF组)组织样本5例为对照组,提取总蛋白经蛋白酶解,采用LC-MS/MS高分辨质谱的TMT蛋白质组学联合磷酸化蛋白质组学分析差异蛋白肽段、差异磷酸化修饰肽段的差异,采用生物信息学的分析方法寻找到更重要、更具研究价值的蛋白激酶、磷酸化事件和关键信号通路.结果 蛋白质组学共鉴定到7575个差异蛋白,磷酸化蛋白质组学共鉴定2601个差异磷酸化蛋白质,蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学共有的蛋白质2071个,蛋白质组学特有5504个,磷酸化蛋白质组学特有530个.2种组学联合分析筛选出丝氨酸/精氨酸重复基质蛋白2、延伸蛋白A、激酶A锚定蛋白12和山梨糖SH3结构域蛋白2最具研究价值.KEGG富集分析筛选到PI3K-AKT信号通路、核质运输、粘着斑、嗅觉传导、剪接体等信号通路.组间比较差异磷酸化蛋白差异枢纽蛋白有2个,为肌球蛋白轻链激酶和平滑肌和肌球蛋白-11,3组间共有的激酶是PRKACA、MAPK3、CDK1、CSNK2A1、CDK2、MAPK1、AKT等.差异最显著且活性上调的激酶有AKT1、AKT、MAPKAPK2等,差异最显著且活性下调的激酶有CDK2、CDK1、CDK7、MTOR等,活性上下调的共有激酶是AKT、MAPK、MTOR.结论 磷酸化蛋白质组学和蛋白质组学联合分析筛选出了与子宫内膜异位症发病机制相关具有研究价值的蛋白激酶、磷酸化事件和关键信号通路,为后续开展验证及功能性研究提供了理论依据.