目的 探索通过药物调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ/视黄醛X受体α(PPAR-γ/RXR-α)对改善丰宫并殖吸虫感染所致大鼠肺损伤的作用.方法 从云南省疫源地采集溪蟹,分离丰宫并殖吸虫后尾蚴,于SD大鼠腹壁皮下注射后尾蚴(8条/鼠),感染大鼠分为高脂饮食组、罗格列酮组、蓓萨罗丁组,每组10只,分别予以高脂饮食(高脂饲料)、罗格列酮[3 mg/(kg·d)]、蓓萨罗丁[10 mg/(kg·d)]灌胃,连续给药7 d,以感染大鼠和健康大鼠分别为感染对照组和健康对照组.首次给药后28 d处死大鼠,取肺组织和心尖血液,制备肺组织切片,HE染色观察肺组织的损伤情况,并进行肺泡炎半定量评分;ELISA检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;提取肺组织总蛋白,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测肺PPAR-γ/RXR-α信号通路[PPAR-γ、RXR-α、脂肪酸转运蛋白3(FATP3)、载脂蛋白A1(ApoA1)]、核因子κB(NF-κB)信号通路[p65、激活子蛋白1(AP1)]和janus激酶(JAK)/信号传导及转录激活(STAT)信号通路(JAK2、STAT3)关键靶分子蛋白的相对表达量.多组间比较采用单因素ANOVA分析.结果 除蓓萨罗丁组2只大鼠感染失败外,其余大鼠均被感染成功,肺脏可见寄生虫囊包或在胸腔中可查见寄生虫.HE染色显示,感染对照组大鼠肺泡间隔中可见大量炎性细胞浸润,肺泡壁增厚,出现肺泡腔塌陷或闭合;高脂饮食组可见明显炎症损伤,与感染对照组相比较轻,肺泡腔充气略改善;罗格列酮组和蓓萨罗丁组肺泡间隔的炎性细胞较感染对照组明显减少,肺泡壁增厚程度明显减轻,肺泡腔充气明显改善.健康对照组、感染对照组、高脂饮食组、罗格列酮组、蓓萨罗丁组大鼠的肺泡炎半定量评分分别为(0.300±0.053)、(2.200±0.189)、(1.900±0.320)、(1.300±0.301)和(1.500± 0.112)分(F=12.033,P＜0.05).ELISA检测结果显示,健康对照组、感染对照组、高脂饮食组、罗格列酮组、蓓萨罗 丁组大鼠血清 IL-1β 水平分别为(103.23±3.37)、(111.59±20.49)、(110.13±12.95)、(89.91±14.84)和(96.34±19.03)pg/ml,TNF-α水平分别为(144.81±1.35)、(180.21±23.38)、(171.76±27.83)、(155.37±13.67)和(143.24±23.66)pg/ml,5组之间差异均有统计学意义(F=17.236、13.558,均P＜0.05);其中,感染对照组IL-1β和TNF-α水平均高于健康对照组,罗格列酮组和蓓萨罗丁组低于感染对照组(均P＜0.05).Western blotting检测结果显示,健康对照组、感染对照组、高脂饮食组、罗格列酮组、蓓萨罗丁组大鼠肺组织中,PPAR-γ的相对表达水平分别为 0.51±0.09、0.67±0.06、0.75±0.08、0.34±0.02 和 0.56±0.04,RXR-α分别为 0.89±0.05、0.15± 0.03、0.81±0.09、0.22±0.02 和 0.61±0.10,FATP3 分别为 0.59±0.06、0.64±0.060、0.68±0.09、0.59±0.09 和0.55±0.03,ApoA1 分别为 0.58±0.04、0.83±0.11、0.92±0.19、0.71±0.04 和 0.63±0.08,5 组之间差异均有统计学意义(F=25.70、67.12、8.94、11.58,均P＜0.05);p65 的相对表达水平分别为 0.25±0.19、1.01±0.21、0.27± 0.15、0.32±0.01 和 0.22±0.11,AP1 分别为 0.11±0.09、1.12±0.36、0.08±0.02、0.03±0.00 和 0.02±0.01,JAK2分别为 0.76±0.18、1.11±0.24、0.34±0.06、0.42±0.01 和 0.35±0.04,STAT3 分别 为 0.80±0.33、1.11±0.27、0.68±0.22、0.77±0.06 和 0.68±0.19,5 组之间差异均有统计学意义(F=43.77、85.19、37.22、17.63,均P＜0.05).其中,感染对照组PPAR-γ、FATP3、ApoA1、p65、AP1、JAK2和STAT3的相对表达水平高于健康对照组,罗格列酮组和蓓萨罗丁组低于感染对照组;感染对照组RXR-α的相对表达水平低于健康对照组,高脂饮食组、罗格列酮组和蓓萨罗丁高于感染对照组(均P＜0.05).结论 建立了丰宫并殖吸虫感染大鼠肺损伤模型,药物调控PPAR-γ/RXR-α信号通路可通过抑制NF-κB和JAK/STA.T信号通路发挥抗炎作用,减轻肺损伤的严重程度.

目的 明确丰宫并殖吸虫感染后宿主(SD大鼠)Th1/Th2免疫偏移模式. 方法 自丰宫并殖吸虫流行区采集溪蟹,分离丰宫并殖吸虫后尾蚴,采用腹壁皮下注射的方法建立丰宫并殖吸虫感染大鼠动物模型,分别在0、3、7、14、28、70 d处死大鼠,取血,分离血清,采用双抗体夹心ELISA法检测Ⅰ型免疫反应(IL-1、TNF-α、INF-γ)和Ⅱ型免疫反应(IL-4、IL-5、IL13)相关细胞因子,结合肺组织病变情况,分析丰宫并殖吸虫大鼠肺吸虫病的Th1/Th2免疫偏移模式.结果 大鼠感染丰宫并殖吸虫后,血清Th1型细胞因子(IL-1、TNF-α、INF-γ)水平迅速上升,感染7d左右达到高峰,随后呈逐渐下降趋势,其中感染3d、7d与0d、14d、28 d、70 d时比较[IL-1:(3、7d) vs.(0、14、28、70 d)=(25.25±2.26、23.00±8.38) pg/ml vs.(17.34±2.76、15.89±4.44、10.34±2.90、10.82±6.05) pg/ml;IFN-γ:(3、7d) vs.(0、14、28、70 d)=(279.58±51.43、276.29±54.64) pg/ml vs.(173.64±43.36、190.74±34.10、142.57±35.10、170.56±26.53)pg/ml;TNF-α:(3、7d) vs.(0、14、28、70 d)=(49.39±8.03、54.78±13.64) pg/ml vs.(33.10±4.75、37.64±19.53、25.01±11.91、23.12±9.05) pg/ml],差异均有统计学意义(均P＜0.05).Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)呈逐渐上升趋势,14d或28 d时达到高峰,之后逐渐下降,70 d时下降至感染早期水平,其中14d、28 d与0d、3d、7d时比较[IL-4:(14、28 d)vs.(0、3、7、70 d)=(20.27±3.31、19.71±2.41) pg/ml vs.(10.77±2.58、9.90±3.62、12.92±3.65、11.72±2.42)pg/ml;IL-5:(14、28 d)vs.(0、3、7、70 d)=(18.68±2.46、19.53±2.65)pg/mL vs.(9.60±1.58、9.38±2.24、10.76±2.85、8.10±1.69) pg/ml;IL-13:(14、28 d)vs.(0、3、7、70 d)=(13.57±0.94、13.38±1.10) pg/ml vs.(6.00±1.33、7.09±1.18、8.68±2.03、7.12±0.90) pg/ml],差异均有统计学意义(均P＜0.05).肺部特征与细胞因子水平变化规律相一致. 结论 在丰宫并殖吸虫感染大鼠,Th1型及Th2型免疫反应共同存在,综合作用于宿主.早期(3d和7 d)以Ⅰ型免疫反应为主,诱导机体迅速产生大量Th1型细胞因子(IL-1、TNF-α、INF-γ);至感染中后期(14 d和28 d),机体产生Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13),Ⅱ型免疫反应逐渐取代Ⅰ型免疫反应而占主导地位;进入慢性感染阶段后(70 d),两种免疫反应达到动态平衡.上述细胞因子的变化规律与肺组织大体观察特征吻合.

目的 通过检测蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关因子的表达,探讨丰宫并殖吸虫感染大鼠是否可导致肺组织细胞发生自噬.方法 40只SD大鼠随机分为健康对照组,感染后3、7、14 d组,每组10只,感染组每鼠腹壁皮下注射6条丰宫并殖吸虫后尾蚴,分别在感染后3、7、14 d取各组大鼠血清和肺组织,ELISA检测血清中IL-1、IL-6水平.取肺组织用于透射电镜观察自噬体,HE染色观察肺组织病理学改变,蛋白质免疫印迹(Western blotting)和免疫组化检测Akt、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、程序性死亡受体-1(Beclin 1)及微管相关蛋白轻链3(LC3 Ⅱ)相关因子的蛋白表达.采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析.结果 ELISA检测结果显示,感染后3、7、14 d组血清中IL-1水平分别为(1 558.0±123.6)、(1 511.0±213.1)和(1 448.0±176.8)pg/ml,均高于对照组的(1 222.0±112.8)pg/ml(P＜0.05);感染后3、7d 组 IL-6水平分别为(1 481.0±197.9)、(1 423.0±210.0)pg/ml,均高于对照组的(1 221.0±138.9)pg/ml(P＜0.05).透射电镜观察在不同的感染阶段,肺组织中线粒体均出现自噬现象.大鼠组织肺病理学检测结果显示,各感染组细胞排列紊乱,肺泡结构遭到不同程度的破坏.各感染组Akt蛋白表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);感染后3、7 d组磷酸化蛋白激酶B(p-Aktser473)蛋白表达水平为(1.288±0.109)、(1.619±0.132),均高于对照组(0.733±0.135)(P＜0.01);感染后3、7、14 d组磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTORser2448)蛋白表达水平分别为(1.574±0.278)、(2.384±0.125)和(1.808±0.121),均高于对照组(1.260±0.087)(P＜0.05);感染后3d 组 mTOR、Beclin 1 蛋白表达水平分别为(1.714±0.217)和(2.736±0.333),均高于对照组(1.345±0.067)和(1.974±0.225)(P＜0.01);感染后 14 d 组 LC3 Ⅱ 蛋白表达(1.938±0.191)高于对照组(1.401±0.200)(P＜0.01).免疫组化分析结果显示,对照组肺组织细胞呈蓝色,阳性呈棕黄色,各因子阳性定位于细胞膜和细胞浆.各感染组Akt、mTOR与对照组相比,肺组织细胞中棕黄色显色不明显,A450值与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);感染后3、7、14 d组p-Aktser473、p-mTORser2448及Beclin 1与对照组相比,棕黄色显色加深明显,A450值分别为(0.104±0.010)、(0.143±0.022)、(0.088±0.013),(0.100±0.007)、(0.151±0.006)、(0.120±0.012)和(0.129±0.005)、(0.047±0.004)、(0.050±0.005),均高于相应对照组(0.032±0.001)、(0.065±0.002)和(0.031±0.001)(P＜0.05);感染后3、14 d 组 LC3 Ⅱ 与对照组比较棕黄色明显加深,A450值分别为(0.056±0.006)、(0.120±0.007),均高于对照组(0.042±0.004)(P＜0.05).结论 丰宫并殖吸虫感染大鼠所致的肺损伤,炎症反应可诱导肺组织细胞发生自噬,该自噬作用可通过检测Akt/mTOR信号通路相关因子的表达来初步实现.