目的:探讨类视黄醇X受体(RXR)在缺氧/复氧(HR)诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECII)氧化应激反应中的调控作用.方法:随机将细胞实验分成5组:对照(C)组、HR组、HR+溶剂二甲基亚砜(DMSO)组(HD组)、HR+RXR激动剂9-顺式维甲酸(9-RA)组(RA组)和HR+RXR抑制剂HX531组(HX组).采用CCK-8法检测各组细胞活力;免疫荧光法进行AECII特异性指标表面活性物质蛋白A(SP-A)的鉴定和RXRα表达的观察;试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;透射电镜观察细胞内超微结构的变化;Western blot检测核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白水平;RT-PCR检测Nrf2的mRNA表达水平.结果:与C组相比,HR、HD、RA和HX组细胞活力均显著降低(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),MDA含量显著增高(P<0.05),Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),RXRα的免疫荧光表达显著增加(P<0.01);与HR和HX组相比,RA组细胞活力增加(P<0.05),SOD活性上升(P<0.05),MDA含量下降(P<0.05),Nrf2的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01),RXRα的免疫荧光表达显著增加(P<0.01).结论:HR可加剧大鼠AECII的氧化应激反应,RXR激动剂干预后可通过抑制氧化应激反应减轻HR引起的大鼠AECII损伤.

目的 探索通过药物调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ/视黄醛X受体α(PPAR-γ/RXR-α)对改善丰宫并殖吸虫感染所致大鼠肺损伤的作用.方法 从云南省疫源地采集溪蟹,分离丰宫并殖吸虫后尾蚴,于SD大鼠腹壁皮下注射后尾蚴(8条/鼠),感染大鼠分为高脂饮食组、罗格列酮组、蓓萨罗丁组,每组10只,分别予以高脂饮食(高脂饲料)、罗格列酮[3 mg/(kg·d)]、蓓萨罗丁[10 mg/(kg·d)]灌胃,连续给药7 d,以感染大鼠和健康大鼠分别为感染对照组和健康对照组.首次给药后28 d处死大鼠,取肺组织和心尖血液,制备肺组织切片,HE染色观察肺组织的损伤情况,并进行肺泡炎半定量评分;ELISA检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;提取肺组织总蛋白,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测肺PPAR-γ/RXR-α信号通路[PPAR-γ、RXR-α、脂肪酸转运蛋白3(FATP3)、载脂蛋白A1(ApoA1)]、核因子κB(NF-κB)信号通路[p65、激活子蛋白1(AP1)]和janus激酶(JAK)/信号传导及转录激活(STAT)信号通路(JAK2、STAT3)关键靶分子蛋白的相对表达量.多组间比较采用单因素ANOVA分析.结果 除蓓萨罗丁组2只大鼠感染失败外,其余大鼠均被感染成功,肺脏可见寄生虫囊包或在胸腔中可查见寄生虫.HE染色显示,感染对照组大鼠肺泡间隔中可见大量炎性细胞浸润,肺泡壁增厚,出现肺泡腔塌陷或闭合;高脂饮食组可见明显炎症损伤,与感染对照组相比较轻,肺泡腔充气略改善;罗格列酮组和蓓萨罗丁组肺泡间隔的炎性细胞较感染对照组明显减少,肺泡壁增厚程度明显减轻,肺泡腔充气明显改善.健康对照组、感染对照组、高脂饮食组、罗格列酮组、蓓萨罗丁组大鼠的肺泡炎半定量评分分别为(0.300±0.053)、(2.200±0.189)、(1.900±0.320)、(1.300±0.301)和(1.500± 0.112)分(F=12.033,P＜0.05).ELISA检测结果显示,健康对照组、感染对照组、高脂饮食组、罗格列酮组、蓓萨罗 丁组大鼠血清 IL-1β 水平分别为(103.23±3.37)、(111.59±20.49)、(110.13±12.95)、(89.91±14.84)和(96.34±19.03)pg/ml,TNF-α水平分别为(144.81±1.35)、(180.21±23.38)、(171.76±27.83)、(155.37±13.67)和(143.24±23.66)pg/ml,5组之间差异均有统计学意义(F=17.236、13.558,均P＜0.05);其中,感染对照组IL-1β和TNF-α水平均高于健康对照组,罗格列酮组和蓓萨罗丁组低于感染对照组(均P＜0.05).Western blotting检测结果显示,健康对照组、感染对照组、高脂饮食组、罗格列酮组、蓓萨罗丁组大鼠肺组织中,PPAR-γ的相对表达水平分别为 0.51±0.09、0.67±0.06、0.75±0.08、0.34±0.02 和 0.56±0.04,RXR-α分别为 0.89±0.05、0.15± 0.03、0.81±0.09、0.22±0.02 和 0.61±0.10,FATP3 分别为 0.59±0.06、0.64±0.060、0.68±0.09、0.59±0.09 和0.55±0.03,ApoA1 分别为 0.58±0.04、0.83±0.11、0.92±0.19、0.71±0.04 和 0.63±0.08,5 组之间差异均有统计学意义(F=25.70、67.12、8.94、11.58,均P＜0.05);p65 的相对表达水平分别为 0.25±0.19、1.01±0.21、0.27± 0.15、0.32±0.01 和 0.22±0.11,AP1 分别为 0.11±0.09、1.12±0.36、0.08±0.02、0.03±0.00 和 0.02±0.01,JAK2分别为 0.76±0.18、1.11±0.24、0.34±0.06、0.42±0.01 和 0.35±0.04,STAT3 分别 为 0.80±0.33、1.11±0.27、0.68±0.22、0.77±0.06 和 0.68±0.19,5 组之间差异均有统计学意义(F=43.77、85.19、37.22、17.63,均P＜0.05).其中,感染对照组PPAR-γ、FATP3、ApoA1、p65、AP1、JAK2和STAT3的相对表达水平高于健康对照组,罗格列酮组和蓓萨罗丁组低于感染对照组;感染对照组RXR-α的相对表达水平低于健康对照组,高脂饮食组、罗格列酮组和蓓萨罗丁高于感染对照组(均P＜0.05).结论 建立了丰宫并殖吸虫感染大鼠肺损伤模型,药物调控PPAR-γ/RXR-α信号通路可通过抑制NF-κB和JAK/STA.T信号通路发挥抗炎作用,减轻肺损伤的严重程度.

目的 利用斑马鱼模型探讨马钱子的肝毒性机制.方法 考察马钱子对受精后4天(day post fertilization,dpf)斑马鱼幼鱼死亡率的影响.此外,通过与对照组相比,以肝脏表型和肝脏功能、生理指标为评价标准确认马钱子的肝脏毒性,并利用荧光实时定量PCR(Q-RT-PCR)技术从转录水平对肝毒性相关的基因,如超氧化物歧化酶1基因(superoxide dismutase 1,sod1)、醌氧化还原酶1基因(nad(p)h quinone oxidoreductase 1,nqo1)、线粒体解偶联蛋白2基因(uncoupling protein 2,ucp2)、谷胱甘肽S-转移酶P 2基因(glutathione s-transferase p 2,gstp2)、B细胞淋巴瘤2基因(b-cell lymphoma-2,bcl-2)、骨髓细胞白血病-1B基因(myeloid cell leukemia-1b,mcl-1b)、BCL 2关联X蛋白基因(Bcl-2 associated X,apoptosis regulator,bax-2)、BH3互动死亡激动剂基因(recombinant BH3 interacting domain death agonist,bid)、脂肪酸合酶基因(fatty acid synthase,fasn)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase,hmgcra)、成纤维细胞活化蛋白α基因(fibroblast activation protein alpha,fap)、瘦素受体基因(leptin receptor,lepr)、视黄醇结合蛋白4基因(retinol binding protein 4,rbp4)、转化生长因子基因(transforming growth factor beta 1,tgf-β1)、转化生长因子β受体2基因(transforming growth factor beta receptor 2,tgf-βr2)基因的表达水平进行评价.采用SPSS24.0进行组间单因素方差分析和Dunnett's t检验对不同处理组之间的数据进行差异分析.结果 (1)在亚致死浓度(<76.523μg/mL)暴露条件下,马钱子能够引起斑马鱼幼鱼肝脏形态发生改变、引起细胞凋亡和脂质积累.(2)低中高浓度马钱子暴露24小时,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)相比对照组降低42.5％ ～67.3％、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性降低22.1％ ～60.8％,同时丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量相比对照组增加17％ ～105％、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性相比对照组分别增加30.49％ ～34.05％、13.42％ ～15.18％.(3)实时PCR结果显示,Sod1、Bcl-2、Gstp2、Nqo1、Bid、Bax-2、Hmgcra、Mcl-1b和Tgf-βr2的表达水平受到显著影响.结论 马钱子对斑马鱼的肝毒性与氧化应激损伤和脂肪代谢失衡有关.

目的:探讨视黄醛X受体(RXRs)为核心的多个核受体在2,2',4,4'-四溴二苯醚(BDE-47)致神经细胞毒性中的相互作用,揭示受体介导的多溴二苯醚(PBDEs)神经毒性效应的分子机制.方法:构建人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH的RXRα基因敲除细胞株及高表达细胞株(分别命名为RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞);CCK-8法分别检测SK-N-SH(野生型)、RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞在BDE-47浓度分别为1、5、10、20、50、100、150、200μmol/L处理12、24、48、72 h时的细胞增殖率;qPCR和Western blot法分别检测上述3种细胞中RXRα、TRα、TRβ、PPARα、PPARγ的mRNA和蛋白表达水平.结果:在染毒时间分别为12、24、48、72 h时,不同浓度BDE-47作用下3种细胞的增殖率比较,差异有统计学意义(P<0.05).BDE-47对RXR/KO-SK-N-SH细胞的IC50是野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞的1/2.BDE-47处理3种细胞后,RXRα的mRNA和蛋白表达水平在野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞中显著升高,SK-N-SH细胞和RXR/OE-SK-N-SH细胞中TRα和PPARα的表达升高,此两种受体在RXR/KO-SK-N-SH细胞中表达降低.在本实验所采用的BDE-47处理浓度下,TRβ和PPARγ表达在3种细胞中均无明显变化.结论:RXRα在提高SK-N-SH细胞生存能力中发挥重要作用.RXRα可以介导TRα和PPARα的表达,而BDE-47并未激活或者抑制SK-N-SH细胞TRβ和PPARγ的表达.说明BDE-47对于SK-N-SH细胞的毒性主要是通过激活RXRα,进一步诱导TRα和PPARα的表达而介导的.

目的 体外实验探讨细胞色素P4504X1(CYP4X1)在炎性环境下的表达情况及其分子机制.方法 人胶质瘤细胞系U251细胞分别给予细菌脂多糖(LPS)联用Toll样受体4(TLR4)抑制剂CLI-095或髓样分化因子(MyD88)的抑制剂ST 2825处理24 h,采用qRT-PCR法检测U251细胞CYP4X1和过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)的表达;采用U251细胞瞬时转染人源PPARγ/核受体视黄醛X受体α(RXRα)表达质粒,双荧光素酶分析实验和染色质免疫共沉淀实验在转录水平上分析PPARγ调控CYP4X1表达的分子机制.结果 qRT-PCR结果显示,与空白对照相比,LPS(0.1、1μg/ml)呈剂量依赖性下调CYP4X1(下调38.60％、59.90％,均P<0.05)和PPARγ(下调25.17％、44.44％,均P<0.05)的表达;与单用LPS相比,CLI-095与ST 2825均下调了LPS对CYP4X1和PPARγ表达的抑制作用(均P<0.05).U251细胞瞬时转染实验显示,与空载组相比,转染组CYP4X1表达上调6.62倍(P<0.05);双荧光素酶分析实验显示,与空载组相比,转染组荧光强度明显上调9.63倍(P<0.05).染色质免疫共沉淀分析实验显示,与对照组相比,LPS抑制了PPARγ蛋白与CYP4X1启动子的结合,下调65.77％(P<0.05).结论 在U251细胞内LPS通过TLR4/MyD88信号通路抑制了PPARγ与CYP4X1启动子上过氧化物酶体增殖物反应元件的结合,进而在转录水平上抑制了CYP4X1的表达.

目的:全氟辛酸(perfluorooctanoic acid,PFOA)能引起动物体脂代谢紊乱,影响脂肪酸的分解与合成,过氧化物酶体增殖剂激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,Ppar)在此过程中发挥极其重要的作用.本研究旨在探讨PFOA对Sprague Dawley(SD)大鼠肝脂质代谢紊乱及其相关蛋白表达的影响.方法:将40只雄性SD大鼠随机分成对照组(注射双蒸水)、低剂量组[PFOA剂量为1.25 mg/(kg·d)]、中剂量组[PFOA剂量为5.00 mg/(kg·d)],高剂量组[PFOA剂量为20.00 mg/(kg·d)],每组10只.正常饮食,采用PFOA经口灌胃14 d,每日观察、称重、记录.经口灌胃后,采血、处死大鼠、迅速剥离其肝脏.取部分肝组织固定于4％多聚甲醛后进行糖原过碘酸希夫(periodic acid-schiff,PAS)染色;检测血清以及肝组织中HDLC、LDLC、TG、TC的含量及相关酶的活性;蛋白质印迹法检测环磷腺苷效应元件结合蛋白(cyclic adenosine monophosphate-response element binding protein,Cbp)、类氨基酸合成酵母同源物通用调控蛋白2(general control of amino acid synthesis 5-like 2,Gcn5L2)、Pparγ、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)和人类视黄醇X受体α2(retinoid X receptor alpha 2,Rxrα2)的表达水平.结果:PFOA暴露14 d后,与对照组相比,中、高剂量组的SD大鼠肝细胞的胞质及胞核内PAS染色阳性颗粒明显减少.与对照组相比,低、中剂量组血清中LDLC、TC含量显著降低(均P<0.05),高剂量组中LDLC、TC含量升高,但差异无统计学意义(均P>0.05),HDLC、TG差异均无统计学意义(均P>0.05);低、中、高剂量组血清中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)的活性显著升高(均P<0.05);高剂量组中ALT/谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)比值显著升高(P<0.05);LDH、TG差异均无统计学意义(均P<0.05).与对照组相比,高剂量组肝组织中的HDLC含量明显降低(P<0.05);低、中、高剂量组肝组织中的TC含量明显升高(均P<0.05),LDLC、TG差异均无统计学意义(均P<0.05);中、高剂量组肝组织中的AKP活性明显升高(均P<0.05),LDH、ALT、ALT/AST比值差异均无统计学意义(均P>0.05).与对照组相比,高剂量组肝组织中Pparγ、Cbp、Rxrα2的蛋白质表达水平均明显下调(均P<0.05);Sirt1的蛋白质表达则明显上调(均P<0.05).结论:PFOA暴露可导致SD大鼠肝脂质代谢紊乱以及糖原减少,这可能与PFOA激活Sirt1的表达、抑制Pparγ的表达,从而影响脂肪酸正常代谢及促进糖酵解有关.