目的:探讨采用总有机碳分析方法(total organic carbon,TOC)测定丹七片清洁残留物的可行性.方法:丹七片主要成分为三七总皂苷,通过TOC测定三七总皂苷,计算残留物回收率.通过引入统计学的分析方法确定目标化合物的碳百分含量,并计算丹七片允许残留限度,从而制定TOC检测值接受标准和限度.结果:TOC检测的8 个擦拭样本的擦拭回收率均≥50%,RSD≤20%,符合相关规定的要求,回收率比较理想.结论:丹七片生产过程中所使用的清洁方法是有效的,TOC 分析法可广泛用于中药制剂生产中的清洁验证.

目的 分析丹七片联合氨氯地平治疗冠心病心绞痛的临床研究.方法 选择2017年8月—2019年3月在甘孜藏族自治州人民医院治疗的冠心病心绞痛患者139例,随机分为对照组(70例)和治疗组(69例).对照组口服苯磺酸氨氯地平片,1片/次,1次/d.治疗组在对照组治疗的基础上口服丹七片,4片/次,3次/d,两组患者均治疗30 d.观察两组患者临床疗效和心电图疗效,同时比较治疗前后两组患者心绞痛发作情况及血清一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和血管内皮生长因子(VEGF)水平.结果 治疗后,对照组临床有效率和心电图有效率分别为81.42％和75.71％,均明显低于治疗组的94.20％和88.41％,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组VAS评分、每周发作次数、发作持续时间均明显降低(P<0.05),且治疗后明显低于对照组(P<0.05).治疗后,两组患者ET水平明显降低(P<0.05),而NO和VEGF水平均明显升高(P<0.05),且治疗后治疗组ET、NO和VEGF改善效果明显优于对照组(P<0.05).结论 丹七片联合氨氯地平治疗冠心病心绞痛,可明显缓解患者临床症状,减轻心绞痛程度,改善血管内皮功能.

利用网络药理学方法探究丹七片治疗冠心病的活性成分和作用机制,为临床冠心病的治疗提供理论依据.采用TCMSP数据库筛选出丹七片的活性成分及其靶标;通过GeneCards数据库筛选冠心病的预测靶点;将两者靶点进行映射交集;利用STRING数据库构建蛋白互作网络图并筛选出65个核心靶点;再通过DAVID数据库进行GO(gene ontology)生物过程和KEGG信号通路富集分析,最后利用Cytoscape-3.6.2软件构建活性成分-关键靶点-作用通路网络图.通过建立过氧化氢(H202)诱导的心肌细胞H9C2损伤模型,对关键活性成分进行实验验证.网络药理学研究提示,丹七片通过槲皮素、木犀草素和丹参酮ⅡA等活性成分作用于炎症因子和细胞凋亡相关通路,改善体内促炎或抗炎失衡,保护心肌细胞,从而达到治疗冠心病的目的,证实了丹七片治疗冠心病多成分、多靶点的作用特点,为其进一步的实验研究及临床诊治提供客观依据.

目的:建立高效液相色谱法同时测定不同厂家丹七片中8个成分的含量.采用聚类分析及主成分分析(PCA)分析法不同厂家丹七片8个成分的规律.方法:采用Waters SunFire C18色谱柱(4.6 mm ×150 mm,5 μm);以乙腈(A)-0.2％磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;检测波长280 nm(丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、丹酚酸A)、203 nm(三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd);柱温30℃;进样量20μL.结果:4个厂家丹七片样品中8个成分的色谱峰均达到基线分离,丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、丹酚酸A、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的线性方程分别为 Y=11 347X+2 427.0(r=0.999 9)、Y=98 543X-12 115(r=0.999 9)、Y=25 646X-33 713(r=0.999 8)、Y=52 939X-20 994(r=0.999 8)、Y=5 762.2X+22 415(r=0.999 8)、Y=6 499.1X-21 888(r=0.999 9)、Y=4 877.5X-617.80(r=0.999 9)、Y=6 039.5X-2 993.0(r=0.999 9);平均加样回收率分别为98.3％(RSD=1.9％)、102.3％(RSD=1.3％)、100.2％(RSD=0.47％)、99.1％(RSD=1.1％)、99.1％(RSD=0.88％)、99.2％(RSD=0.86％)、99.9％(RSD=0.19％)、97.5％(RSD=2.6％);4个厂家丹七片中8个成分的含量分别为丹参素钠1.56～3.23 mg?g1、原儿茶醛0.14～0.40 mg·g-1、丹酚酸B 1.10～7.86 mg·g-1、丹酚酸A 0.37～1.56 mg·g—1、三七皂苷R1 4.79～13.12mg·g-1、人参皂苷Rg1 26.21～59.10mg? g-1、人参皂苷Rb117.61～37.05 mg? g-1、人参皂苷Rd3.80～8.50 mg·g-1.基于聚类分析与PCA分析了4个不同厂家不同批次丹七片成分,不同厂家丹七片质量不均一;结论:建立的丹七片中8个成分含量测定方法准确灵敏,稳定性和重复性好,为丹七片的质量研究提供参考.

目的:探讨丹七片对阿霉素诱导心肌损伤(DIMI)的保护作用及调控机制.方法:18只DIMI小鼠随机分成模型组、丹七片组和普伐他汀组,每组6只,另取6只C57BL/6小鼠作为正常对照组.丹七片组和普伐他汀组分别予1.5g/kg丹七片和40mg/kg普伐他汀混悬液灌胃,模型组和正常对照组予蒸馏水灌胃,连续干预4周.超声和HE检测心功能,电镜和GFP-mRFP-LC3腺病毒转染检测自噬通量,Western blot检测自噬相关蛋白的表达.结果:与模型组比较,丹七片组显著提高DIMI小鼠的射血分数(EF)和左室短轴缩短率(FS)(P＜0.01,P＜0.05);HE染色显示,丹七片有效改善心肌细胞排列紊乱和心肌纤维溶解的情况;电镜结果提示,丹七片组显著减少自噬溶酶体的累积.体外GFP-mRFP-LC3荧光结果表明,丹七片通过减少自噬溶酶体的累积和促进自噬体的形成恢复阿霉素阻断的自噬流;此外,丹七片组显著上调Beclin1和LAMP1(P＜0.05),下调p-mTOR和p-ULK1(P＜0.05),促进TFEB人核(P＜0.01);联合mTOR激动剂MHY1485后,丹七片的调控作用均消失.结论:丹七片通过mTOR-ULK1/TFEB通路分阶段调控自噬保护DIMI.

目的:探讨丹七片对缺血性心脏病大鼠模型能量代谢的调节作用.方法:通过结扎左前降支冠状动脉建立缺血性心脏大鼠模型,将48只大鼠分为假手术组、模型组、丹七片组和曲美他嗪组,每组12只.丹七片组大鼠以500.0 mg/kg的剂量灌胃丹七片溶液,曲美他嗪组大鼠以6.0 mg/kg的剂量灌胃曲美他嗪溶液,其他组大鼠灌胃生理盐水.治疗1个月后评价各组大鼠的心脏功能、心肌组织和细胞病理改变、心肌ATP水平及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路及其下游分子表达水平.结果:超声心动图显示,与模型组比较,丹七片组大鼠的LVIDs和LVIDd分别减少了26.35％和20.73％,而EF和FS分别增加了31.61％和42.82％,差异有统计学意义(P<0.05).HE染色结果显示,丹七片组的心肌细胞排列较为整齐,细胞水肿减轻,细胞间隙减小,炎性细胞减少.与模型组比较,丹七片组大鼠的心肌ATP水平显著增加(P<0.05).免疫组织化学染色结果显示,与模型组比较,丹七片组大鼠PGC-1α的阳性染色评分显著升高(P<0.05).Western Blot-ting结果显示,与模型组比较,丹七片组大鼠的AMPK、SIRT1、PGC-1α、MFN1、MFN2和SOD2蛋白表达均显著升高(P<0.05).结论:丹七片可以在缺血性心脏病大鼠模型中发挥心脏保护功能,并上调ATP的产生.丹七片可激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路及其下游分子,改善能量代谢并还调节线粒体的生物合成,从而改善大鼠心脏功能并防止心肌损伤.

目的 探究丹七片(DQP)基于神经酰胺通路抗心肌脂毒性的药效及机制研究.方法 利用冠状动脉左前降支结扎术制备心肌梗死后心力衰竭动物模型,分为假手术组、模型组、丹七片组、辛伐他汀组.利用超声、血生化、病理切片染色、蛋白免疫印迹法(Western Blot)和酶联免疫吸附(ELISA)法等技术进行相应指标的检测.结果 与模型组比较,丹七片组左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)升高(P<0.01或P<0.001),而左室收缩末期内径(LVESD)和左室舒张末期内径(LVEDD)降低(P<0.05或P<0.01).苏木精-伊红(HE)和Masson染色显示,丹七片能够减轻小鼠心肌损伤的程度,改善病理结构变化.血清检测结果提示丹七片可以有效降低心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(P<0.05)、肌钙蛋白I(P<0.001)的表达,进而减轻心脏损伤程度.此外,丹七片干预后可明显下调单链丝氨酸棕榈酰转移酶长链1(SPTLC1)及SPT长链2(SPTLC2)蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),并明显降低心肌组织内神经酰胺含量(P<0.001).结论 丹七片可能通过调控从头合成途径关键限速酶单链丝氨酸棕榈酰转移酶来降低心力衰竭小鼠心肌神经酰胺水平,从而改善小鼠心功能,减轻心肌损伤.