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人扁桃体隐窝上皮细胞的分离、原代培养与鉴定
编辑人员丨2023/8/6
目的:建立高效、稳定的人扁桃体隐窝上皮细胞原代培养方法.方法:收集80例3～5岁儿童手术切除的扁桃体组织,分别采用组织块贴壁法和Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25％胰蛋白酶-EDTA消化法提取扁桃体隐窝上皮细胞并比较两种方法的提取效果;应用无血清角化细胞培养基进行细胞纯化及原代培养;用相差显微镜观察细胞形态和生长特点、免疫细胞化学染色及免疫荧光技术鉴定细胞来源.结果:Ⅱ型中性蛋白酶联合消化法在分离扁桃体隐窝上皮细胞成功率、细胞密度以及细胞融合时间方面均高于组织块贴壁法(P＜0.05),细胞接种后第2天开始贴壁,外观呈现多边形,岛状生长,培养12d左右,细胞连成单层,呈现铺路石样生长.免疫细胞化学染色显示广谱角蛋白表达阳性,波形蛋白阴性;免疫荧光攀定角蛋白8/18染色阳性.结论:应用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25％胰蛋白酶-EDTA消化法以及无血清角化细胞培养基可建立高效稳定的人扁桃体隐窝上皮细胞原代分离方法和体外培养体系.
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编辑人员丨2023/8/6
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猪伪狂犬病综合诊断及分离毒株gE和TK基因遗传变异分析
编辑人员丨2023/8/6
2012年以来,许多使用gE基因缺失活疫苗免疫过的猪场广泛性出现伪狂犬病毒(PRV)感染,gE抗体阳性率不断升高,伪狂犬典型病例不断增加.2018年3月鲁南地区几个种猪场先后发生疑似伪狂犬病疫情,怀孕母猪流产、产死胎和木乃伊胎,仔猪出现神经症状且死亡率高.通过对病死猪及死胚剖检进行初步诊断,取病料进一步进行病理组织学诊断及病毒分离鉴定.结果 显示,病死猪均可见病毒性脑炎、肝细胞变性坏死及淋巴组织坏死等病理变化,在病变的神经元、肝细胞、扁桃体隐窝上皮细胞等细胞核内见红染包涵体.对分离到的4株PRV进行了gE和TK基因的序列测定及遗传变异分析发现,4株PRV的gE和TK核苷酸序列的同源性分别为98.8％～99.3％和98.9％～99.6％与国内流行毒株其核苷酸序列的同源性分别99.1％～99.7％和98.6％～99.8％,与匈牙利和美国等流行毒株核苷酸序列的同源性分别为97.3％～97.8％和98.8％～99.5％,表明4株分离株高度同源,与国内PRV变异株处在同一分支,而与匈牙利和美国等毒株遗传距离较远.传统疫苗对PRV变异毒株不能提供有效保护,给猪场伪狂犬病的防控和净化工作带来了新的挑战.
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编辑人员丨2023/8/6
