目的 从调控肝脏胆固醇代谢角度探讨基于米糠脂肪烷醇的中药复方辅助降血脂的作用机制.方法 将36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(辛伐他汀)、受试物组(中药复方高、中、低剂量组).除正常组灌胃等体积双蒸水外,其余各组脂肪乳灌胃复制SD大鼠高脂血症模型.给予相应受试物4 w后,分别检测血清和肝脏中的脂质水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变,油红O染色观察脂质沉积情况;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin9型(PCSK9)mRNA表达水平.结果 与模型组相比,受试物能明显降低高脂血症大鼠血清和肝脏中TC、TG、LDL-C水平(P＜0.01,P＜0.001);HE和油红O染色可见,受试物能减少肝脏中的脂肪蓄积,减轻肝细胞脂肪变性程度;与模型组相比,受试物能明显升高肝脏CYP7A1 mRNA的表达(P＜0.001)、降低PCSK9 mRNA的表达(P＜0.01).结论 米糠脂肪烷醇复配山楂、三七的中药复方具有降低高脂血症大鼠血脂的作用,其机制可能与调控肝脏胆固醇摄取和利用有关.

目的 探讨葱白提取物(FOB)对高脂血症(HLP)大鼠固醇调节元件结合蛋白(SREBP)2/前蛋白转化酶枯草溶菌素(PCSK)9 信号通路和线粒体功能的影响.方法 脂肪乳灌胃法构建大鼠HLP 模型并进行模型鉴定,将大鼠分为:正常组、模型组、FOB低、中、高剂量组、瑞舒伐他汀组.生化方法检测血清脂质含量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织形态变化,油红O染色观察脂质沉积情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western印迹分别检测低密度脂蛋白受体(LDLR)、PCSK9 和SREBP2 mRNA和蛋白表达水平,透射电镜观察肝组织线粒体,流式检测活性氧(ROS)及线粒体膜电位,qPCR检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体融合蛋白(mfn)1、mfn2、神经萎缩蛋白(OPA)1、线粒体动力相关蛋白(Drp)1 表达水平.结果 与模型组比较,FOB能够显著降低血脂水平,减少脂质沉积,修复肝组织损伤,升高LDLR水平,降低PCSK9 和SREBP2水平,缓解肝组织线粒体损伤,降低ROS水平,升高线粒体膜电位,升高mtDNA拷贝数、mfn1、mfn2、OPA1 水平,降低Drp1 蛋白水平.结论 FOB能够降低血脂、改善线粒体功能,其机制可能与FOB调控SREBP2/PCSK9 信号通路有关.

目的 探究药食同源中药复方(葛根、夏枯草、杜仲叶、菊花、山楂、芹菜)对两肾一夹(2 kidneys and 1 clip,2K1C)型高血压大鼠血压、肠道菌群结构和血清代谢物的调控作用.方法 2K1C型高血压大鼠随机分为模型组、氯沙坦(0.3mg/kg)组和药食同源中药复方低、中、高剂量(0.5、2.5、5.0mg/kg)组,每组7只.连续给药6周后,取眼周血,采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清相关指标;采用16S rDNA测序技术分析各组大鼠肠道菌群变化;采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝脏和肾脏组织病理变化;采用高效液相质谱检测各组大鼠血清代谢产物变化.结果 药食同源中药复方干预6周后,大鼠血压明显下降(P＜0.05、0.001),血清中总胆红素(total bilirubin,TBIL)和直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)水平显著降低(P＜0.05).16SrDNA测序结果显示,在门水平上,大鼠肠道微生物群落的主要结构由厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线杆菌门(Actinobacteria)和酸杆菌门(Acidobacteria)组成,其中与模型组比较,药食同源中药复方组拟杆菌门相对丰度升高,厚壁菌门相对丰度降低;在属水平上主要由乳酸杆菌属Lactobacillus、肠球菌属Enterococuus、布劳特氏菌属Blautia、罗姆布茨菌属Romboutsia和丁酸弧菌属Anaerostipes组成,药食同源中药复方组乳酸杆菌属相对丰度明显高于模型组.各组大鼠血清代谢产物存在明显差异,筛选得到143个差异性血清代谢产物.药食同源中药复方组血清中牛磺胆酸、L-抗坏血酸、焦谷氨酸、苯乙酰甘氨酸水平显著上调,甘氨胆酸水平显著下调.组织病理切片结果表明,药食同源中药复方干预可修复高血压造模造成的腹主动脉及肾脏结构性损伤,进一步修复腹主动脉及肾脏的功能.结论 药食同源中药复方可通过改善2KlC型高血压大鼠肠道菌群结构,调节血清代谢产物,从而发挥对高血压的治疗作用.

枯草芽孢杆菌BBs-27 从药用植物石豆兰中分离,对黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)具较强抑菌活性.为进一步掌握发酵液中抑菌成分及抑菌机制,对发酵液耐酸碱、紫外照射、酶解等特性进行研究,在此基础上,借助LC-MS技术对发酵液中脂肽类型进行鉴定,并从形态、生理和转录组 3 个层面上分析抑菌机制.结果表明,发酵液pH=6 时抑菌活性最强,pH<4 或>10 时活性明显降低.超过 10 min紫外照射活性显著降低.易被其他 3 种蛋白酶水解,但对胃蛋白酶不敏感,推测抑菌物是以脂肽类为主且包含少量蛋白质,LC-MS分析证实,抗菌肽主要是伊枯草菌素和丰原素两大类.SEM结果显示,脂肽处理下菌丝卷曲、畸形、异常膨大.脂肽对菌丝体内SOD、POD、CAT及可溶性蛋白、可溶性糖均有显著影响,5 项生理指标均与抑菌率极显著相关.以禾谷镰刀菌基因组为参照组装,样品中Q20＞96%,Q30＞91%,GC含量在 52.27%-52.87%,比对率＞78%.共筛选出 712 个DEGs,包括 393 个上调基因和 319 个下调基因.Go功能注释分类显示,712 个DEGs主要涉及到 6 个生物学过程、11 个细胞组分和 12 个分子功能.KEEG分析显示,DEGs显著富集在碳水化合物、脂、氨基酸、辅助因子和维生素代谢等途径,筛选出了重要的脂肽响应基因GAO、CHS3、MPG1、FGSG_02016、IPDH、ODC,它们通过干扰细胞壁、细胞膜、氨基酸、抗氧化酶的正常合成来影响菌体生长.该结果为进一步开发和利用安全微生物农药奠定理论基础.

目的 探讨PCSK9对小鼠肝脏脂肪变性的机制.方法 以腺相关病毒8.2(adeno-associated virus 8.2,AAV8.2)为载体构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和人源PCSK9经尾静脉转染至小鼠肝脏表达.将36只C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为空白组、GFP组和PCSK9组,每组各12只,共饲养24周.通过苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察肝脏组织形态,天狼星红染色(sirius red staining,SRS)观察肝脏纤维化程度,油红0(oil red O,ORO)染色观察肝脏脂质浸润程度.通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清PCSK9、白细胞介素(interleukin,IL)-1β,流式细胞术检测肝脏单核细胞胞内炎性细胞因子,包括IL-2、IL-4、γ-干扰素(interferon-γ,INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、颗粒酶B(granulase B,GrB).免疫组化检测肝组织巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比.Western blot法检测PCSK9干预小鼠单核-吞噬细胞白血病细胞(RAW264.7)细胞胆固醇流出蛋白、清道夫受体相关蛋白、NF-κB信号通路相关蛋白表达.结果 PCSK9组小鼠肝脏组织脂滴总量、脂肪变性、空泡化、纤维化程度明显增加或增强(P＜0.001).免疫组化检测结果显示,PCSK9组巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比显著高于GFP组及空白组(P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,PCSK9组IL-2、TNF-α在CD4+、CD8+细胞亚群百分比明显高于高脂GFP组(P＜0.05),而IL-4、INF-γ,GrB在组间各细胞群中比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot法检测结果显示,与空白组比较,PCSK9显著降低LDLR水平,升高 ATP 结合盒转运体 A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体 B(scavenger receptor B,SRB 或 CD36)、Toll样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)、磷酸化 IκBα 激酶(phosphorylated inhibit kappa B α kinase,p-IκBα)、磷酸化 p65 蛋白(phosphorylated p65,p-p65)蛋白水平(P＜0.05).结论 PCSK9介导NF-κB信号通路致小鼠肝脏脂肪代谢失衡及炎性细胞因子浸润加速了肝脏脂肪变性.

目的 观察芒果苷单钠盐对高胆固醇血症大鼠肝脂质代谢及前蛋白转化酶枯草溶菌素 9(PCSK9)/低密度脂蛋白受体(LDLR)的作用.方法 选取SD大鼠 40 只,将其按体质量随机分为对照组、模型组、阿托伐他汀钙片组、芒果苷单钠盐组,每组 10 只.除对照组外,其余各组采用高脂饲料喂养法建立高胆固醇血症模型.造模成功后,阿托伐他汀钙片组ig阿托伐他汀钙片 5 mg/kg,芒果苷单钠盐组ig 80 mg/kg芒果苷单钠盐,给药 8 周后,观察各组体质量及肝脏指数变化,生化法检测各组血脂指标[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)],肾功能、血清酶指标[肌酐(CRE)、血清尿素(UREA)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)]及肝组织游离胆固醇(FC)、总胆汁酸(TBA)的含量,苏木精-伊红染色(HE)观察大鼠肝组织形态学变化,RT-PCR检测肝组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和CD68 mRNA表达,Western blotting及RT-PCR检测肝组织中PCSK9、LDLR的蛋白及mRNA表达.结果 与模型组相比,各给药组大鼠体质量和肝脏指数明显降低(P＜0.05);血清中TC、LDL-C及CRE、UREA、CK、LDH水平显著降低,HDL-C水平显著升高(P＜0.05);肝组织中FC含量降低,TBA含量升高(P＜0.05);肝脏脂肪变性改善明显;肝组织IL-1 β、CD68 mRNA表达明显减少(P＜0.05),同时显著降低了PCSK9 的蛋白和mRNA水平,提升了LDLR的蛋白和mRNA水平(P＜0.05).结论 芒果苷单钠盐可有效调节高胆固醇血症大鼠肝胆固醇代谢,减轻高脂造成的心肾功能损害,其作用可能与调节肝脏PCSK9/LDLR信号通路的表达,改善脂质代谢紊乱相关.

表面活性素(surfactin)、伊枯草菌素(iturin)和丰原素(fengycin)是一类主要由革兰阳性芽胞杆菌通过非核糖体合成途径产生的抗菌肽,一般是由1个β-羟基脂肪酸与7~10个氨基酸肽链以酰胺键连接而成的环肽,具有抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤等生物活性,具有良好的医疗应用前景.目前,人们对这3种新型抗菌肽在医药领域中的研究进展所知甚少,故本文对其发现历史、结构特点、作用机制、生物合成和应用价值进行阐述,为后续研究提供借鉴.

解淀粉芽胞杆菌是芽胞杆菌属的一个种,在生长过程中可以向胞外分泌多种抑菌活性物质.按照胞外抑菌活性物质合成方式的不同分为两大类,一类是通过核糖体途径合成的核糖体类细菌素、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶等抑菌物质;另一类是通过非核糖体途径合成的细菌素、表面活性素、芬荠素、伊枯草菌素等脂肽类物质.这些代谢产物种类丰富、广谱抑菌、抗逆性强,可应用于农业、食品工业和环境保护等.本文对解淀粉芽胞杆菌抑菌活性物质的研究及应用现状进行综述,为深入研究和全面开发解淀粉芽胞杆菌抑菌活性物质提供充足的理论依据.

[目的]利用荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜技术初步探讨解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloquefaciens)B 15菌株发酵液中的抑菌混合物质伊枯草菌素A(iturin A)和芬芥素(fengycin)对葡萄灰霉病病原菌灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的抑菌机理.[方法]采用琼脂稀释法讨论解淀粉芽孢杆菌B15发酵液对灰葡萄孢的抑菌活性.利用台盼蓝(trypan blue)染色、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)、双氢罗丹明123 (DHR123)、钙离子探针fluo-3/am和Annexin V-PI探针染色来观察解淀粉芽孢杆菌B15发酵液对灰葡萄孢细胞膜和菌丝形态、细胞核、活性氧、钙离子和磷脂酰丝氨酸层的影响.[结果]抑菌活性实验发现解淀粉芽孢杆菌B15发酵液对灰葡萄孢具有良好抑菌效果.荧光显微镜台盼蓝染色观察发现,经B15发酵液处理过的灰葡萄孢出现菌丝畸形、菌丝体粗大、尖端肿胀并被染成蓝色和明显的液泡化现象.同时未在处理组中观察到细胞内容物泄漏,说明处理组菌丝细胞膜未发生破损.该结果表明在此次试验中,B15发酵液中的抑菌有效物质不以破损细胞膜的方式直接导致灰葡萄孢的死亡.激光共聚焦显微镜观察结果发现,处理组的灰葡萄孢菌丝出现典型的细胞凋亡现象、染色质固缩、细胞核裂解、磷脂酰丝氨酸层外翻、活性氧和钙离子积累.[结论]该实验表明解淀粉芽孢杆菌B15发酵液以诱导细胞凋亡的形式来抑制灰葡萄孢菌丝的生长.

建立一种快速、高效测定游离氨基酸含量的异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生高效液相色谱法,并利用此方法分析检测iturin A发酵过程中游离氨基酸的动态变化.以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,采用Venusil-AA(4.6 mm×250 mm,5μm)氨基酸分析专用柱,并优化HPLC检测色谱条件.结果表明:梯度洗脱程序、流动相pH值、色谱柱温对分析时间、色谱峰分离及峰型具有重要影响.当最优色谱条件为:流动相A为0.1 mol/L无水乙酸钠缓冲溶液(pH6.4±0.1)-乙腈(66∶5),流动相B为乙腈-水(4∶1),流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,色谱柱温40℃,梯度程序洗脱,35 min内可完全分离16种氨基酸,且各氨基酸在一定浓度范围内线性关系良好(R2均大于0.9986),加标回收率在83.84％-108.02％之间,RSD值均小于2.77％.该方法耗时短、操作简便、准确可靠,具有良好的精密度和稳定性.通过此方法研究分析伊枯草菌素A发酵过程中各游离氨基酸含量变化规律,发现其氨基酸浓度变化规律大致分为三类.