目的:分析严重爆炸致烧伤患者在不同时间段感染病原微生物的特征，同时探讨宏基因组学第二代测序（mNGS）技术在病原微生物检测中的应用价值。方法:采用回顾性观察性研究方法。2020年6月13日—9月13日浙江大学医学院附属第二医院收治符合入选标准的23例严重爆炸致烧伤患者，其中男21例、女2例，年龄（64±5）岁，烧伤总面积（86±14）%体表总面积。统计入院时，患者的简明烧伤严重指数（ABSI）评分、修订Baux评分、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ（APACHEⅡ）评分和序贯器官衰竭（SOFA）评分。记录患者入院后≤7 d、8~20 d、21~30 d并发症及病原微生物感染来源分布情况，统计病原微生物检出情况并比较微生物培养法与mNGS检测效能的差异。统计患者入院后感染的病原微生物来源分布总体情况并比较微生物培养法与mNGS检测效能差异。对数据行McNemar和Fisher确切概率法检验。结果:入院时，患者ABSI评分、修订Baux评分、APACHE Ⅱ评分和SOFA评分分别为（12.6±2.4）、（91±22）、（26±4）和（10.3±2.3）分。入院后≤7 d，患者的并发症主要为吸入性损伤、脓毒症休克和低蛋白血症；患者感染病原微生物的来源主要为创面、血流和肺部。入院后8~20 d，患者脓毒症休克的发生率最高，吸入性损伤的发生率明显低于入院后≤7 d（ P<0.01）；病原微生物感染来源仍然以创面、肺部和血流为主，其中创面和血流感染发生率均明显低于入院后≤7 d（ P<0.01）。入院后21~30 d，患者仅有多器官功能衰竭和急性呼吸窘迫综合征存在且发生率低，吸入性损伤的发生率明显低于入院后≤7 d（ P<0.01），脓毒症休克的发生率明显低于入院后≤7 d（ P<0.01）和入院后8~20 d（ P<0.01）；仅存在较低的血流感染，创面感染发生率明显低于入院后≤7 d（ P<0.01）和入院后8~20 d（ P<0.05），肺部和血流感染发生率明显低于入院后≤7 d（ P<0.01）。入院后≤7 d，革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌为主；革兰阴性菌以肺炎克雷伯菌和嗜麦芽窄食单胞菌为主；真菌中仅含念珠菌。入院后8~20 d，革兰阳性菌仍以金黄色葡萄球菌为主，肠球菌的检出率明显低于入院后≤7 d（ P<0.01）；革兰阴性菌以铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌为主，且其检出率均明显高于入院后≤7 d（ P<0.01）；新检出了镰刀菌。入院后21~30 d，革兰阳性菌仍以金黄色葡萄球菌为主，肠球菌和芽孢杆菌的检出率明显低于入院后≤7 d（ P<0.01）；革兰阴性菌仍以铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌为主，且随呈时间依赖性增高趋势，铜绿假单胞菌检出率明显高于入院后≤7 d（ P<0.01）和入院后8~20 d（ P<0.01），鲍曼不动杆菌的检出率明显高于入院后≤7 d（ P<0.01），肺炎克雷伯菌检出率均明显低于入院后≤7 d（ P<0.01）和入院后8~20 d（ P<0.01）；念珠菌、霉菌、镰刀菌均有检出。在入院后≤7 d和入院后8~20 d，mNGS和微生物培养法检出病原微生物的一致性较高（ κ=0.659、0.596）；而在入院后21~30 d，mNGS和微生物培养法检出病原微生物的一致性为中度（ κ=0.407）。不同时间段，mNGS的病原微生物阳性检验率是基本恒定的，而微生物培养法呈时间依赖性下降。入院后，创面、血液、痰液和留置导管中共分离出506株病原微生物，以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌为主。创面标本以金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌最为多见，血液标本中以肺炎克雷伯菌多见，在痰液标本中以铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌为主，留置导管标本中以鲍曼不动杆菌最为多见。铜绿假单胞菌在创面和痰液中的检出率均分别显著高于血液（ P<0.05或 P<0.01）和留置导管（ P<0.01）。mNGS和微生物培养法检测病原微生物总体结果的一致性为中度（ κ=0.556），其中血液和留置导管标本的mNGS与微生物培养法检测病原微生物结果的一致性为高度（ κ=0.631、0.619）；而痰液和创面检测结果的一致性为中度（ κ=0.558、0.528）。 结论:该研究中的严重爆炸致烧伤患者最常见的感染是创面感染和血流感染。随入院时间的延长，患者感染的病原微生物由金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和嗜麦芽窄食单胞菌为主转为以鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌为主；mNGS检测与微生物培养法相比，表现出更高的病原微生物阳性检出率。

目的 分析山东省不同人群眼部分离病原菌的构成及耐药情况,为临床抗微生物药物选择提供参考依据.方法 本研究为回顾性分析,收集山东省儿童微生物组学研究中心儿童细菌&真菌耐药监测研究协作网成员单位(52 家三级医院,7 家二级医院)于 2017 年 1 月至 2022 年 12 月上报的 731 株来自眼部感染患者的病原菌,来源部位包括结膜囊分泌物、睑缘分泌物、泪囊分泌物、角膜刮片及玻璃体穿刺,采用质谱系统、全自动微生物鉴定系统、API系统等对分离菌种进行鉴定,美国临床和实验室标准化协会推荐的药敏试验方法进行药敏试验及药敏结果判读,利用 WHONET 5.6 软件对数据进行整理分析,SPSS 21.0 软件对细菌耐药性差异进行统计分析.结果 ①分离病原菌以革兰阳性菌为主(70.2%),其中葡萄球菌属居于首位,儿童以金黄色葡萄球菌感染为主,成年人和老年人以表皮葡萄球菌为主;革兰阴性菌以铜绿假单胞菌为主.真菌感染主要发生于成年男性,以镰刀菌属为主;②革兰阳性菌对万古霉素、利奈唑胺耐药率为 0,利福平 2.0%,氯霉素 4.3%,庆大霉素 9.2%,莫西沙星10.6%,左氧氟沙星 33.2%,红霉素 77.6%.葡萄球菌对青霉素G耐药率高于链球菌,表皮葡萄球菌对利福平、奎奴普丁/达福普汀、莫西沙星、四环素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明耐药率高于金黄色葡萄球菌;缓症链球菌对左氧氟沙星耐药率高于肺炎链球菌;③革兰阴性菌对阿米卡星耐药率 1.7%,妥布霉素 8.0%,左氧氟沙星11.1%,庆大霉素 11.2%,氯霉素 18.2%,铜绿假单胞菌耐药率普遍偏低.结论 ①葡萄球菌是感染性眼病主要致病菌;②革兰阳性菌对红霉素、青霉素普遍耐药;革兰阴性菌耐药率控制良好.临床对于眼部革兰阳性菌感染,除了考虑万古霉素等终极药物外,也可使用利福平治疗;对于革兰阴性菌感染,可考虑使用阿米卡星治疗;③要重视并监测不同年龄段人群眼部病原菌种类的分布及变化趋势,根据药物敏感结果规范合理使用抗生素,并重新评价眼科临床已较少使用的抗生素价值.

为探究百里香属三种百里香植物挥发油的化学成分及其抑菌和抗癌作用,采用水蒸气蒸馏法分别提取柠檬百里香、百里香和法国百里香中的挥发油,并对其化学成分进行分析,共检测出50种化合物,其中百里香酚含量最高37.61％,柠檬醛11.44％、顺式香叶醇10.25％、石竹素5.74％、异百里酚甲醚12.45％.采用滤纸片抑菌法和平板涂布法检测三种挥发油的抑菌活性,确定柠檬百里香挥发油的抑菌效果最好,最小抑菌/杀菌浓度强弱依次为大肠杆菌(Escherichia coli)＞燕麦镰刀菌(Fusarium avenaceum)＞金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus).CCK-8 法测定三种百里香挥发油对肝癌细胞HepG2的毒性,结果表明柠檬百里香挥发油对肝癌细胞的抑制作用最强,其IC50值为18.32 μg/mL.该研究结果可为百里香挥发油的开发利用提供理论依据.

[背景]黏细菌是一类具有多细胞群体行为特征的高等原核生物,其对植物病原真菌和细菌的捕食特性使其在植物病害防治方面具有重要的应用潜力.[目的]探究乌鲁木齐天山大峡谷原始森林可培养黏细菌的多样性并分析其抗菌活性,为发掘黏细菌生防菌株奠定基础.[方法]以天山大峡谷原始森林采集的土样和腐木为分离材料,采用兔粪诱导法和被捕食菌诱导法从中分离纯化黏细菌菌株,结合形态学观察、生理生化测定和 16S rRNA基因序列分析确定其分类地位,并以6 种植物病原真菌[大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、尖孢镰刀菌萎蔫专化型(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)、拟轮枝链孢霉(Fusarium verticillioides)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)、细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)]和 1 种植物病原细菌[梨火疫病菌(Erwinia amylovora)]为靶标菌,通过平板对峙法和菌苔捕食法测定其抗菌活性.[结果]从采集的样品中分离出 70 株菌株,经纯化后获得 36 株黏细菌纯培养物.经鉴定隶属于 4 个属,黏球菌属(Myxococcus)30 株、孢囊杆菌属(Cystobacter)3 株、珊瑚球菌属(Corallococcus)2 株和原囊菌属(Archangium)1 株.抗菌活性分析显示,本研究获得的 36 株黏细菌至少对 2 种植物病原真菌有抗菌活性,表现出广谱的抗真菌活性,初步筛选出一株菌株NSE37-1 兼具广谱和高效抗真菌活性;供试的 15 株黏细菌对梨火疫病菌均具有捕食活性,初步筛选出一株对梨火疫病菌具有较强捕食能力的黏细菌菌株NSE25.[结论]天山大峡谷可培养黏细菌资源比较丰富,黏球菌属是该地区可培养黏细菌菌群中的优势菌.分离纯化出的黏细菌菌株均表现出广谱的抗植物病原菌活性,具有进一步研究和开发的潜在价值.

研究从白花前胡中分离具有良好生物活性的菌株,为挖掘新的菌种资源和先导化合物提供基础.采用组织块分离法分离内生真菌,使用麦芽汁培养基进行菌株液体发酵,发酵液经乙酸乙酯萃取并浓缩后获得发酵粗提物.采用管碟法测定粗提物对金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希氏菌 4 种细菌,以及禾谷镰刀菌、大丽轮枝菌、灰葡萄孢霉和白色念珠菌 4 种真菌的抑菌活性;采用MTT法测定粗提物对人肺癌细胞A549和人乳腺癌细胞MDA-MB-231 的细胞毒活性.采用形态观察结合核糖体转录间隔区序列(rDNA-ITS)对活性最好的 1 株真菌进行菌种鉴定并对其次级代谢产物进行分离纯化和鉴定.结果共分离获得 7 株内生真菌,其中有 4 株菌bhqh-2、3、5、7 具有较好的生物活性,其粗提物对所有供试菌均具有抑制作用,对两种癌细胞的抑制率均达到95%以上.经鉴定,bhqh-2菌株为棒曲霉菌株,从其发酵粗提物中分离纯化得到 6 个已知化合物.总之,白花前胡内生真菌的部分菌株表现出较好的生物活性,为其内生菌生物活性及代谢产物的研究提供依据.

枯草芽孢杆菌BBs-27 从药用植物石豆兰中分离,对黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)具较强抑菌活性.为进一步掌握发酵液中抑菌成分及抑菌机制,对发酵液耐酸碱、紫外照射、酶解等特性进行研究,在此基础上,借助LC-MS技术对发酵液中脂肽类型进行鉴定,并从形态、生理和转录组 3 个层面上分析抑菌机制.结果表明,发酵液pH=6 时抑菌活性最强,pH<4 或>10 时活性明显降低.超过 10 min紫外照射活性显著降低.易被其他 3 种蛋白酶水解,但对胃蛋白酶不敏感,推测抑菌物是以脂肽类为主且包含少量蛋白质,LC-MS分析证实,抗菌肽主要是伊枯草菌素和丰原素两大类.SEM结果显示,脂肽处理下菌丝卷曲、畸形、异常膨大.脂肽对菌丝体内SOD、POD、CAT及可溶性蛋白、可溶性糖均有显著影响,5 项生理指标均与抑菌率极显著相关.以禾谷镰刀菌基因组为参照组装,样品中Q20＞96%,Q30＞91%,GC含量在 52.27%-52.87%,比对率＞78%.共筛选出 712 个DEGs,包括 393 个上调基因和 319 个下调基因.Go功能注释分类显示,712 个DEGs主要涉及到 6 个生物学过程、11 个细胞组分和 12 个分子功能.KEEG分析显示,DEGs显著富集在碳水化合物、脂、氨基酸、辅助因子和维生素代谢等途径,筛选出了重要的脂肽响应基因GAO、CHS3、MPG1、FGSG_02016、IPDH、ODC,它们通过干扰细胞壁、细胞膜、氨基酸、抗氧化酶的正常合成来影响菌体生长.该结果为进一步开发和利用安全微生物农药奠定理论基础.

目的:明确头花蓼内生真菌Gibberella intermedia抗菌活性成分,了解活性成分对临床耐药菌的逆转作用.方法:采用体外抗菌活性导向法及现代分离技术对头花蓼内生真菌G.intermedia的发酵物进行活性物质分离,并利用现代MS和NMR等波谱技术鉴定其化合物结构.采用96孔板法测试单体化合物对临床耐药菌的抗菌作用以筛选出活性成分,并在无抗菌作用的浓度下评估活性成分最低抑菌浓度(MIC)的影响,了解其逆转耐药菌的作用.结果:从头花蓼内生真菌G.intermedia的活性组分中分离得到6个化合物,分别为镰刀菌酸(1),吲哚-3-乙酸(2),对羟基苯乙酸(3),原儿茶酸(4),邻羟基苯乙酸(5)和对羟基苯甲醛(6).化合物2～6均为从真菌G.intermedia代谢物中首次分离.化合物1对多重耐药大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和奇异变形杆菌的MIC分别为31.3,125,62.5 mg·L-1.且化合物1具有逆转其耐药性的作用,在其1/8 MIC的浓度下,能使左氧氟沙星和环丙沙星对临床耐药大肠埃希菌的MIC分别降低4倍和2倍;在其1/4 MIC的浓度下,能使左氧氟沙星和环丙沙星对耐药菌奇异变形杆菌的MIC分别降低了2倍和4倍,且对临床耐药金黄色葡萄球菌的MIC值均降低了2倍.结论:镰刀菌酸为头花蓼内生真菌G.intermedia抗耐药菌主要活性成分,并对多重耐药菌大肠埃希菌、奇异变形杆菌和金黄色葡萄球菌具有逆转耐药性作用.该研究为治疗多重耐药菌尿路感染和提高喹诺酮类抗生素在尿路感染中的疗效奠定了基础.

目的 对鱼腥草内生真菌J3菌株进行菌种鉴定; 研究J3菌株菌丝和发酵液粗提物的抑菌活性.方法 提取J3菌株基因组DNA,应用PCR技术获得ITS区扩增产物,经测序得到ITS序列,结合菌落形态、孢子形态对J3菌株进行鉴定; 依次用乙酸乙酯和水饱和正丁醇分别对J3菌株菌丝和发酵液进行提取,并应用纸片扩散法研究粗提物对大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和粪肠球菌的抑菌活性.结果J3菌株的分生孢子为镰刀形; 在系统进化树中J3菌株也与Fusarium oxysporum菌株聚在一类,因此结合形态学特征和ITS区序列,鉴定内生真菌J3菌株为尖孢镰刀菌; 发酵液和菌丝的乙酸乙酯粗提物和水饱和正丁醇粗提物对粪肠球菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,但是对大肠埃希氏菌和铜绿假单胞菌无明显抑菌效果.结论 鱼腥草内生真菌J3菌株能够产生具有抑菌活性的代谢产物,值得进一步研究.

目的 鉴定犬真菌微生物群(真菌区系),并进行药敏分析,为犬致病性真菌防控提供科学依据.方法 在中国的北京地区,共有55只没有疾病史的犬被取样.用真菌培养、PCR,基因克隆和测序技术,进行犬的真菌检测和鉴定.对所有真菌分离株进行药敏分析.结果 分离获得29株真菌,形态和分子鉴定确证这些真菌为黄曲霉、杂色曲霉、日本曲霉、卷枝毛霉、总状毛霉、多变根毛霉、壳青霉、产黄青霉、厚皮马拉塞霉菌、球毛壳霉、黄色蠕形霉、多喙茎点霉、尖孢镰刀菌、枝状枝孢菌、尖孢枝孢、极细枝孢霉、类星形毛孢子菌、阿萨希毛孢子菌、光滑念珠菌、库德里阿兹威毕赤酵母和东方伊萨酵母.结果表明,犬真菌种类比较丰富,获得真菌12属21种,曲霉属、毛霉属和枝孢菌属真菌在这些致病真菌中占主导地位.药敏分析结果显示:这些真菌对制霉菌素、咪康唑、沃尔康唑、特比萘芬和氟胞嘧啶等已经产生了耐药性.结论 联合使用真菌培养、PCR,基因克隆和测序技术能有效分析犬真菌.犬的真菌大多为人兽共患病病原体.研究结果为我国犬真菌监测提供参考数据,为致病性真菌的侵袭防制提供有效工具.

目的 探讨云南野生土荆芥挥发油的化学成分及对细菌和真菌的抑菌作用.方法 用水蒸气蒸馏的方法提取土荆芥的挥发油,GC-MS法测定挥发油的化学成分;用抑菌圈法和抑制菌丝生长速率法研究土荆芥地上部分挥发油对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌和大肠杆菌5种细菌及对尖孢炭疽菌、多主棒孢霉、尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌和可可葡萄座腔菌5种真菌的抑制作用.结果 从土荆芥挥发油中共检测出34种化合物,其中相对含量较高的有:α-松油烯(35.21％)、甲酸松油酯(33.82％)和对聚伞花素(18.46％)等;土荆芥挥发油对枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度均为15 μl/ml,对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌没有抑菌作用;对尖孢炭疽菌、多主棒孢霉、尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌和可可葡萄座腔菌的EC50分别为40.83 μl/ml、3.17μl/ml、2.85 μl/ml、2.33 μ1/ml、1.35 μl/ml.结论 云南野生土荆芥挥发油的主要成分为α-松油烯、甲酸松油酯和对聚伞花素;挥发油对5种细菌中的3种细菌有抑菌活性,对5种真菌均有不同程度的抑菌活性.