目的:制备1株靶向甲型流感病毒N1亚型神经氨酸酶(neuraminidase，NA)的功能性抗体FNA1，并对其进行鉴定。方法:依据单链抗体(single-chain antibody fragment，scFv)序列信息，合成FNA1重链以及轻链可变区序列，连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ，构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FNA1。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FNA1。ELISA检测FNA1与甲型流感病毒N1亚型NA抗原的结合，流式细胞术分析FNA1与细胞膜表面表达N1亚型NA抗原的结合。通过抗体抑制NA蛋白活性试验检测抗体FNA1的体外功能活性。结果:蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FNA1。FNA1特异性识别结合N1亚型的NA抗原，且呈浓度依赖效应。FNA1能通过结合细胞膜表面表达的N1亚型NA蛋白，有效阻断细胞膜表面的NA活性，从而抑制包装的假病毒从细胞表面释放，继而抑制进一步的靶细胞感染。结论:获得1株具有体外功能活性的靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体FNA1。

γ-干扰素释放试验(IGRA)通过检测特异性抗原刺激T细胞产生的γ-干扰素来判断结核感染，弥补了PPD试验的不足，但临床中应注意其存在假阴性的情况。目前的研究显示，患者的全身状态(年龄、营养状态、等位基因和种族)，基础疾病与免疫功能(人类免疫缺陷病毒感染、糖尿病、恶性肿瘤、淋巴细胞下降)，结核的病情(病程、痰菌情况、抗结核治疗、肺部病灶范围)，检测方法及环境影响免疫功能药物的使用，吸烟等均可能造成IGRA假阴性。在实际临床工作中，需要警惕导致IGRA假阴性的各种影响因素，不可根据阴性结果轻易排除结核感染。

肺部感染已成为威胁人类健康的重大疾病,给数百万患者的身体健康造成严重威胁.黄连是典型清热药,主要活性成分包括黄连素(小檗碱)、黄连碱等,具有强效清热燥湿作用,可通过多种途径防治肺部感染.黄连及其提取物对肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感病毒、冠状病毒等多种肺部感染病原菌具有抗菌活性.黄连及其提取物还可增强抗生素的抗菌活性.黄连及其提取物可通过抑制多种炎症因子释放、阻止核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)激活、抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎症小体活化、调节T细胞免疫反应、降低粘附分子的释放、抑制磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2)的释放,降低病原菌引发的炎症反应.黄连及其提取物能降低肺部血管内皮损伤,抑制新血管形成,阻止肺纤维化,以降低肺部损伤.本研究通过文献整理,对黄连及其提取物防治肺部感染的作用机制进行了综述.

患者女,52岁,因双眼先后肿胀伴疼痛2个月余于2015年9月24日于我院眼科就诊. 患者于2015年7月无明显诱因突然出现左眼肿胀伴疼痛,8月右眼出现相似症状,门诊以"双眼眶多发肿物"收入院. 患者否认全身病史,无长期用药及遗传病史. 既往于2013年及2014年发生下肢"皮肤过敏",具体治疗不详. 眼科检查:双眼视力矫正0.8;眼压:右眼19 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),左眼15.5 mmHg;左眼外斜约15 °,左眼外转及右眼上转受限;双眼睑轻度肿胀伴下垂,平视压迫额肌后右眼上睑缘遮蔽上方角膜约5 mm,左眼上睑缘遮蔽上方角膜约4 mm(图1),无眼睑退缩、迟落现象;双眼上下睑可触及多个结节样肿物,质地中硬,边界清晰,与眼睑皮肤及眼球无粘连;双眼球突出,Hertel眼压突出度计测量(正常范围为12～14 mm):右眼22 mm,左眼25 mm;双眼结膜充血、水肿,以穹窿部为著,角膜透明,前房清,余未见明显异常;眼眶CT:双侧眶隔前眼球周围弥漫性增厚软组织影,多考虑为炎性假瘤;双眼磁共振成像( MRI):双侧上下睑内(泪腺区)异常软组织影,考虑良性病变,血管瘤及炎性假瘤可能(图2);眼部B超:双眼上方眶内低回声肿物:右眼肿物大小23 .7 mm ×22 .8 mm,左眼肿物大小22.0 mm ×17.1 mm,边界不清,内回声欠均匀,双眼眼外肌增粗,回声不均,左眼球后可见不规则形低回声区;实验室检查:抗核抗体1:32阳性;类风湿因子20.9 kU/L;血常规、自身抗体、免疫五项、甲状腺功能五项、红细胞沉降率、抗中性粒细胞胞质抗体均在正常范围,梅毒、艾滋病病毒( HIV)、γ干扰素释放结核感染T细胞斑点试验( T-Spot )均为阴性;胸部薄层CT:肺纹理增多、紊乱,见散在小斑片状、结节状高密度影,边界模糊;纵隔结构清楚,纵隔及双肺门见多发肿大淋巴结(图3);磁共振全身弥散加权成像:纵隔及双侧肺门内多发肿大淋巴结,双侧腋窝内,腹腔肠系膜根部多发小淋巴结,均考虑反应增生型淋巴结;请相关科室会诊,考虑炎性假瘤或结缔组织病可能性大,遂行左眼眶肿物部分切除术送病检,术中于左眼眶上方充分暴露肿物并取出包块,包膜较完整,表面光滑,大小1.3 cm ×1.0 cm ×0.3 cm.

患者,男,50岁,因突发左颈部肿块伴疼痛4h入院.肿块为渐进性增大,无呼吸困难,有高血压病史,无外伤、手术史.查体:气管右偏,左颈部可扪及约4 cm×3 cm搏动性肿块,无震颤.颈动脉CTA示左颈总动脉假性动脉瘤(图1).实验室检查:WBC 7.39×109/L,中性粒细胞49.9％,C反应蛋白2.32mg/L,人免疫缺陷病毒抗体(阴性),梅毒螺旋体特异性抗体(阴性),血管炎抗体谱及抗核抗体谱等均正常.急诊局麻下行左颈总假性动脉瘤覆膜支架腔内隔绝术.仰卧位局麻下穿刺右股动脉,行左颈总动脉造影(图2),见假性动脉瘤大小约3.5 cm×3 cm,动脉破口距分叉1.5 cm,直径2.5 mm,颈总动脉直径7.5mm,颈内、颈外动脉显影正常.选择Gore 9 mm×50 mm Viabahn覆膜支架(直径放大率20％),支架远端定位于颈总动脉分叉处,支架释放后造影示假性动脉瘤完全隔绝,术后予拜阿司匹林100 mg/d和波立维75 mg/d抗血小板,半年后改拜阿司匹林100 mg/d终生服用.

目的 探讨let-7b和STAT3在癫痫发生过程中的表达情况以及let-7b结合STAT3在颞叶癫痫大鼠海马胶质细胞活化中的作用.方法 采用立体定向海人酸注射建立癫痫大鼠模型(模型组,40只).假手术组注射等量的生理盐水(10只).采用腺相关病毒载体制备let-7b过表达的大鼠.以实时荧光定量PCR检测let-7b的表达.采用双荧光素酶报告基因实验鉴定let-7b与其靶基因STAT3的靶向关系.采用免疫荧光实验检测星形胶质细胞以及小胶质细胞的活化.以免疫印迹法检测Janus激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路以及相关炎症因子的表达.结果 与假手术组大鼠相比,let-7b在模型组大鼠癫痫发生的潜伏期(造模后3d和7d)的表达降低(均P＜0.01),而STAT3在大鼠癫痫发生潜伏期的表达升高(均P＜0.001).双荧光素酶报告基因实验结果表明,let-7b可结合STAT3并抑制其表达(P＜0.05).免疫荧光实验结果表明,let-7b过表达可抑制潜伏期癫痫大鼠海马CA3区的星形胶质细胞和小胶质细胞的活化(均P＜O.01).免疫印迹法实验表明,let-7b过表达可抑制p-Stat3及其下游转录因子c-Myc的表达(均P＜0.001)以及相关炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的释放(均P＜0.01).结论 Let-7b可通过结合靶基因STAT3抑制癫痫大鼠海马胶质细胞的活化、增生.

背景:大量体外细胞实验和动物实验表明,白藜芦醇不仅具有抗氧化应激、抗炎、抗病毒、抗肿瘤和延缓衰老等生理活性,还具有骨保护作用.目的:观察白藜芦醇对钛磨损颗粒诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞氧化应激水平与炎症反应的调节作用.方法:以不同浓度(0,10,20,40,80,160μmol/L)的白藜芦醇溶液干预小鼠RAW264.7巨噬细胞,培养24 h后,WST-1法检测细胞存活率,选择对细胞活性影响较小的浓度进行后续实验.将小鼠RAW264.7巨噬细胞分5组干预:对照组常规培养;钛颗粒组加入钛颗粒刺激细胞12 h;低、中、高浓度白藜芦醇组分别加入10,20,40μmol/L的白藜芦醇溶液预刺激细胞4 h,随后各组加入钛颗粒刺激细胞12 h.钛颗粒刺激12 h后,收集细胞与细胞培养上清,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,荧光定量PCR检测抗氧化应激相关酶(铜/锌超氧化物歧化酶、锰超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶)和肿瘤坏死因子 αmRNA水平,利用ELISA检测肿瘤坏死因子 α 质量浓度.结果与结论:①10,20,40μmol/L白藜芦醇对小鼠RAW264.7巨噬细胞活性无明显抑制作用,故选择此3组浓度进行后续实验;②与对照组比较,钛颗粒组细胞内活性氧水平升高(P<0.05);与钛颗粒组比较,白藜芦醇呈浓度依赖性降低细胞内活性氧水平(P<0.05);③与对照组比较,钛颗粒组锰超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶mRNA表达下降(P<0.05),谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶mRNA表达升高(P<0.05);与钛颗粒组比较,中、高浓度白藜芦醇组锰超氧化物歧化酶、铜/锌超氧化物歧化酶mRNA表达升高(P<0.05),低、中、高浓度白藜芦醇组过氧化氢酶mRNA表达升高(P<0.05);④与对照组比较,钛颗粒组肿瘤坏死因子 αmRNA水平与肿瘤坏死因子 α 的分泌均升高(P<0.05);与钛颗粒组比较,低、中、高浓度白藜芦醇呈浓度依赖性降低肿瘤坏死因子 αmRNA水平与肿瘤坏死因子 α 的分泌(P<0.05);⑤结果表明,白藜芦醇能够有效提高金属钛颗粒刺激后巨噬细胞内抗氧化应激相关酶的转录,降低细胞内氧化应激水平,减少炎症因子肿瘤坏死因子 α 的释放.

阿尔茨海默病(AD)是最常见的痴呆类型,其病因尚未明确.近年来,AD的"微生物感染假说"备受关注,多种微生物感染与AD的发生相关.单纯疱疹病毒1型的DNA存在于AD患者的大脑中,并与淀粉样斑块共定位;细胞内单纯疱疹病毒感染不仅可引起几种淀粉样蛋白前体蛋白片段的产生,还可导致糖原合成酶激酶-3的激活和淀粉样蛋白的积累.人体胃肠道含有庞大的微生物群,肠道菌群的细菌产物进入大脑后会引起炎症并促进Aβ的蓄积.慢性牙周炎患者发生AD的风险升高,牙龈卟啉单胞菌也在AD患者的大脑中被检测出,且小鼠的慢性牙周病原体感染会引起与AD一致的病理改变.幽门螺杆菌感染也与痴呆的发生有关,一些基础研究从基因和分子水平探究其致病机制,发现Hp可通过增强γ-分泌酶的活性直接促进Aβ的产生和释放,并通过中断突触功能诱导认知障碍.螺旋体感染与AD的发生相关,从AD患者的脑组织中可培养出伯氏疏螺旋体;感染螺旋体的原代细胞内出现了Aβ沉积.另在AD患者的脑脊液中发现了真菌DNA、蛋白质,并在AD患者的大脑中检测到真菌细胞.

[目的]探讨重组腺病毒介导的人TK-1和TIMP-1基因过表达对大鼠心肌梗死后的左室(LV)功能、炎症因子表达的影响及其机制.[方法]通过结扎Sprague-Dawley雄性大鼠冠脉左前降支诱导心肌梗死模型.观察假手术组(10只)、生理盐水组(13只)、对照病毒组(13只)、TK-1组(13只)、TIMP-1组(13只)、联合基因组(13只)的大鼠术后的心功能参数改变、心肌梗死面积、及各组大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、核因子-κB(NF-κB)和巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)的表达水平.[结果]与假手术组相比,对照病毒组大鼠的各项心功能参数(左室舒张期内径LVIDd、左室收缩期内径LVIDs、短轴缩短率FS、射血分数EF)差(P<0.01),心肌梗死面积大(P<0.01),心肌细胞凋亡指数高(P<0.01),各炎症因子(NF-κB、MIF、MMP-2、MMP-9)的表达水平上升(P<0.01).与对照病毒组相比,单基因组或联合基因组的心功能改善明显;心肌梗死的面积明显减少;心肌细胞凋亡指数显著下降;炎症因子的表达明显下降.相比于单基因组,联合基因组各项指标改善更显著.[结论]hTK-1或hTIMP-1单基因过表达可改善大鼠心肌梗死后的心功能,抑制炎症因子表达与心肌细胞凋亡,联合基因过表达(hTK-1和hTIMP-1)呈协同效应、改善更显著,可能的机制为hTK-1或hTIMP-1均可部分抑制MIF/NF-κB/MMP-2/9炎症信号通路.

早在20多年前,α-突触核蛋白被发现是路易小体的主要成分,其被认为是帕金森病的致病因子.此后,α-突触核蛋白不仅是帕金森病的一个标志,而且还可以导致神经元功能障碍和死亡.传递假说认为,一个神经元中初始产生的病理性α-突触核蛋白可能被另一个易损害的神经元释放和摄取,从而启动受体神经元中α-突触核蛋白的病理性错误折叠.近年来一些研究证据表明,在人脑中可以发现病理性的α-突触核蛋白传递.本文就病理性α-突触核蛋白在细胞间传递及相关研究进展等方面进行阐述.