探讨左归丸促进缺血性脑卒中小鼠神经组织修复和功能恢复作用及其机制.雄性C57BL/6J小鼠随机分为 5 组:假手术组、模型组、左归丸低剂量组(3.5 g·kg-1)、左归丸中剂量组(7 g·kg-1)、左归丸高剂量组(14 g·kg-1),每组 15 只.采用光化学栓塞法建立缺血性脑卒中模型.分别于造模前和给药第 7、14、21、28 天进行行为学检测.在造模 3 d后进行 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,给药 28 d后进行影像学T2 加权成像(T2-weighted imaging,T2WI)检测、扩散加权成像(diffusion-weighted imaging,DWI)检测,评估模型损伤情况.苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察脑皮质区组织学情况.通过免疫荧光和免疫蛋白印迹观察轴突标记蛋白(myelin basic protein,MBP)、轴突生长相关蛋白 43(growth-associated protein 43,GAP43)、细胞内在活力相关通路哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及其下游磷酸化S6 核糖体蛋白(phosphorylated s6 ribosomal protein,p-S6)以及机制相关蛋白骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、胰岛素样生长因子 1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)的相对表达量.左归丸治疗组对缺血性脑卒中小鼠神经功能的损伤有一定的恢复作用,TTC染色显示感觉运动皮质区出现白色梗死灶,T2WI影像学上观察到感觉运动皮质区坏死,形成囊腔;脑组织损伤较轻、瘢痕较少、毛细血管增多,神经元轴突较模型组增多、神经元活力较强.与模型组相比,左归丸治疗组GAP43、OPN、IGF-1、mTOR蛋白表达明显增多.综上,左归丸能促进缺血性脑梗死小鼠神经功能恢复,促进轴突生长,其机制可能与激活OPN/IGF-1/mTOR信号轴有关.

目的 探讨小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶3(SENP3)在光化学栓塞法缺血性脑卒中小鼠小胶质细胞中的表达变化,以及与光化学法栓塞缺血性脑卒中疾病进展的关系.方法 实验小鼠分对照组、缺血性脑卒中1d组和缺血性脑卒中7 d组(每组3只),应用Western blotting检测各组纹状体诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(ARG-1)和SENP3的表达和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平;应用免疫荧光双标法检测小鼠纹状体小胶质细胞中iNOS和ARG-1的表达.结果 与对照组相比,缺血性脑卒中1 d组SENP3的表达与JNK的磷酸化水平均显著上升,同时M1型小胶质细胞的标志物iNOS的表达水平显著上升;缺血性脑卒中7 d组M2型小胶质细胞的标记物ARG-1的表达显著增高.纹状体小胶质细胞特异性抗体1(Iba1)与iNOS、Iba1与ARG-1的免疫荧光双标结果与免疫印迹结果一致.结论 光化学栓塞法缺血性脑卒中早期,小胶质细胞SENP3表达增加,进而影响JNK磷酸化的水平和小胶质细胞的极化,促进大脑炎症反应,参与缺血性脑卒中的疾病进展.

背景:大鼠光化学栓塞模型可以良好地模拟缺血性卒中,具有损伤脑区特异性、高重复性及低死亡率等优势,但光源的选择及玫瑰红注射浓度等多个条件都会影响造模的结果,需要后期进行细致的评估来确定造模的成功.目的:建立稳定、不易自发恢复的大鼠缺血性脑卒中模型,并探究卒中区域的病理变化及大鼠行为学变化.方法:雄性Wistar大鼠52只随机被分为假手术组6只、光化学栓塞组46只.光化学栓塞组取18只分别于大鼠股静脉注射20,40及80 mg/kg玫瑰红制作光化学栓塞模型,筛选出造模最佳的玫瑰红浓度;再对剩余28只大鼠进行光化学栓塞造模手术;假手术组大鼠不进行激光器定点照射及不注射玫瑰红染料.术后1d利用TTC染色揭示在不同玫瑰红浓度注射下梗死范围的变化;对大鼠光化学栓塞后1,3,7,14 d运用NeuN染色观察梗死区域内神经元的死亡情况;Iba-1,GFAP,GLUT-1染色观察光化学栓塞后卒中区域炎症反应、胶质瘢痕及血管的变化;应用圆柱体实验及网格错误实验评价大鼠光化学栓塞后行为学的变化.结果 与结论:①80 mg/kg的玫瑰红浓度引起的卒中腔体积最大,光化学栓塞模型重复性高,动物死亡率低,7d可以形成较稳定的卒中腔;②光化学栓塞后在7d可以形成相对稳定的胶质瘢痕带,但炎症反应在1-14 d逐渐加重;③光化学栓塞减少卒中腔附近的血管面积,并在14 d趋于稳定;④光化学栓塞后大鼠出现长期的感觉及运动功能下降;⑤结果表明大鼠光化学栓塞模型稳定良好,不易自发恢复,适合缺血性脑卒中病理变化的研究.

目的 探讨在缺血环境下诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和单羧酸转运蛋白1(MCT1)与M1型促炎性小胶质细胞的关系.方法 小鼠6只,采用光化学栓塞法制作脑缺血模型;BV2细胞使用含5 mmol/L低糖培养基刺激2h.使用免疫荧光染色、Western blotting方法检测缺血小鼠大脑中小胶质细胞和低糖刺激的BV2细胞中iNOS、MCT1及精氨酸酶1(ARG1)的表达.用RNA干扰及质粒转染技术分别调控未处理BV2细胞中的MCT1表达,检测iNOS及ARG1的变化.结果 激光制作脑缺血模型成功后,缺血侧半球中iNOS和MCT1以及ARG1的表达升高(P＜0.01),且MCT1主要表达在离子钙接头蛋白分子1(Iba1)阳性和iNOS阳性的小胶质细胞中.低糖刺激BV2小胶质细胞后,iNOS和MCT1表达升高(P＜0.001),而ARG1表达降低(P＜0.01),MCT1主要表达在iNOS阳性的BV2细胞中.RNA干扰BV2细胞后,细胞中MCT1表达降低,iNOS表达下降(P＜0.01);质粒转染BV2细胞后,MCT1表达增高,iNOS表达增加(P＜0.01).但在两种情况下,ARG1表达水平均未发生明显变化.结论 在低糖环境中小胶质细胞向M1表型极化,MCT1和iNOS表达同时增高,MCT1参与iNOS的表达上调,可能处于iNOS调节通路的上游.