目的:探讨去整合素样金属蛋白酶8(A disintegrin and metalloproteinase 8,ADAM8)对结肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制.方法:通过TCGA数据库分析ADAM8在结肠癌癌组织和正常组织中的表达水平.采用荧光定量PCR检测ADAM8在结肠癌细胞(CaCO-2、HCT8、HT29、HCT116、SW620、LOVO)中的相对表达.通过慢病毒稳转构建过表达ADAM8的结肠癌细胞系.通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测 ADAM8 的表达水平.通过CCK-8实验和集落克隆实验检测过表达ADAM8对结肠癌细胞体外增殖能力的影响.通过Transwell实验和划痕实验检测过表达ADAM8对结肠癌细胞体外迁移能力的影响.Western blot法检测EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin和E-cadherin以及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白STAT3和p-STAT3的相对表达水平.结果:与正常组织相比,ADAM8在结肠癌癌组织中表达升高(P＜0.001);ADAM8在结肠癌细胞HCT116和LOVO中相对表达量较低(P＜0.05);CCK-8实验和集落克隆实验结果显示过表达ADAM8促进了结肠癌细胞增殖能力(P＜0.05);Transwell和划痕实验结果显示过表达ADAM8促进了结肠癌细胞迁移能力(P＜0.001);Western blot结果显示过表达ADAM8能够下调EMT相关蛋白E-cadherin表达,上调Snail、N-cadherin和Vimentin表达并激活STAT3信号通路(P＜0.05).结论:ADAM8可通过激活STAT3信号通路促进结肠癌细胞的增殖和迁移,提示ADAM8可能是结肠癌治疗的潜在靶点.

目的:配对盒基因6(paired box gene 6,PAX6)主要在胚胎发育中发挥调控作用,其异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关,在不同肿瘤中可发挥促癌或抑癌的作用.本研究旨在观察过表达PAX6对肝癌细胞生长及自然杀伤(natural killer,NK)细胞对肝癌细胞杀伤能力的影响及其分子机制.方法:采用ELISA技术检测68例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者和10例健康人外周血的PAX6、可溶性主要组织相容性复合体I类样蛋白A(soluble major histocompatibility complex class I-like protein A,sMICA)和可溶性UL16结合蛋白2(soluble UL16 binding protein 2,sULBP2)的表达水平;体外培养肝癌细胞HepG2和LM3及人正常肝细胞LO2,将PAX6过表达质粒(PAX6-OE)和空载体(NC)转入HepG2和LM3细胞中构建稳定细胞株,分别采用real-time PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光等方法检测HepG2和LM3细胞中PAX6的表达水平;在HepG2和LM3细胞中过表达PAX6,采用CCK-8法和细胞划痕实验检测细胞生长和迁移能力,ELISA法检测其上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、去整合素样金属蛋白酶10(disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)的蛋白质表达水平;采用流式细胞术检测NK细胞对2种肝癌细胞的杀伤能力.结果:与健康人相比较,HCC患者血清中PAX6表达水平显著降低(P=0.002),而sMICA和sULBP2的表达水平显著增高(P=0.004和P<0.001).Real-time PCR、蛋白质印迹法结果显示:与正常肝细胞LO2相比,HepG2和LM3细胞PAX6的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05).免疫荧光结果亦可见肝癌细胞HepG2和LM3中PAX6的表达均低于正常肝细胞LO2.与NC组比较,PAX6-OE组肝癌细胞HepG2和LM3的增殖及迁移能力下降(均P<0.05);PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞中MMP2、MMP9、ADAM10的蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05),且PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平均显著低于NC组(均P<0.05).流式细胞术显示:与NC组比较,PAX6-OE组NK细胞对HepG2和LM3细胞的杀伤率显著增高(均P<0.05).结论:PAX6在HCC患者血清及肝癌细胞系中表达降低,过表达PAX6可抑制肝癌细胞生长,增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效率,其机制与PAX6抑制金属蛋白酶的表达、降低sMICA和sULBP2的分泌水平有关.

目的 探讨含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的去整合素样金属蛋白酶(ADAMTS)18基因对人骨肉瘤细胞增殖与迁移作用及其机制.方法 将ADAMTS18过表达载体和空载体分别转染143B和U-20S人骨肉瘤细胞,细胞计数试剂盒(CCK)-8和Tr-answell小室实验研究过表达ADAMTS18基因对143B和U-20S细胞增殖和迁移作用,蛋白质Western印迹实验检测ADAMTS18和蛋白激酶B(AKT)蛋白表达水平.结果 与空载体转染细胞株比较,过表达ADAMTS18基因可显著抑制143B和U-20S细胞增殖和迁移能力,并下调143B和U-20S细胞AKT蛋白水平.结论 ADAMTS18经下调AKT通路活性而抑制人骨肉瘤细胞恶性表型.

[目的]检测结肠癌组织中去整合素样金属蛋白酶8 (ADAM8) 基因表达以及患者外周血中ADAM8蛋白表达的变化, 探讨了其相关的临床意义.[方法]收集2017年2月～2018年10月我院普外科治疗的结肠癌患者82例, 另取我院体检中心健康体检者30例作为正常健康对照.ELISA法检测外周血中ADAM8蛋白表达水平.荧光定量PCR检测ADAM8基因表达水平.[结果]结肠癌患者癌组织中ADAM8基因的2-△△Ct值为0.38±0.09, 显著高于癌旁组织的0.16±0.04 (P<0.01) .结肠癌患者外周血ADAM8蛋白表达水平为 (22.35±5.14) μg/L, 显著高于对照组的 (8.07±0.15) μg/L (P<0.01) .结肠癌患者癌组织中ADAM8基因2-△△Ct值和蛋白表达水平在肿瘤大小≥5 cm患者为 (0.44±0.12) 和 (25.24±5.65) μg/L, 显著高于<5 cm患者的 (0.31±0.06) 和 (18.32±4.52) μg/L (P<0.05), 在Ⅲ、Ⅳ期患者为 (0.43±0.11) 和 (25.50±5.76) μg/L, 显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者的 (0.32±0.07) 和 (19.16±4.63) μg/L (P<0.05), 在淋巴结有转移患者为 (0.45±0.14) 和 (25.20±5.83) μg/L, 显著高于无转移患者的 (0.25±0.04) 和 (16.86±4.45) μg/L (P<0.01) .[结论]结肠癌患者肿瘤组织和外周血中ADAM8高表达, 高表达的ADAM8可能参与了结肠癌的发生、侵袭和转移过程.