目的:通过研究miR-503靶向回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元(reversion inducing cysteine rich protein with Kazal motifs,RECK)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)进展中的作用.方法:将人OSCC细胞SCC-4分为NC inhibitor组(转染miR-503 inhibitor阴性对照序列)、miR-503 inhibitor组(转染miR-503 inhibitor)、si-NC组(转染RECK siRNA阴性对照序列)、si-RECK组(转染RECK siRNA)、miR-503 inhibitor + si-NC组(共转染miR-503 inhibitor和RECK siRNA阴性对照序列)和miR-503 inhibitor + si-RECK组(共转染miR-503 inhibitor和RECK siRNA).实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-503和RECK在各组SCC-4 细胞及永生化人口腔角质形成细胞RT7 中的表达;Western blotting检测RECK蛋白的表达;TargetScan预测miR-503 的靶基因并通过双荧光素酶报告基因检测来验证miR-503 与RECK的靶向关系;CCK-8 和EdU染色检测各组细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测各转染组细胞凋亡情况.结果:相比RT7 细胞,miR-503 在SCC-4 细胞中高表达(P＜0.05),RECK则呈低表达(P＜0.05);与NC inhibitor组相比,miR-503 inhibitor组细胞中RECK mRNA及RECK蛋白的表达水平均显著升高(P＜0.05);TargetScan数据库及荧光素酶报告基因分析显示了RECK 和 miR-503 之间的靶向关系(P＜0.01),提示miR-503 可靶向抑制RECK的表达;与NC inhibitor组相比,miR-503 inhibitor组SCC-4 细胞的增殖能力、侵袭能力均显著下降(P＜0.05),而细胞的凋亡则显著增加(P＜0.01),抑制miR-503 表达降低了OSCC细胞的增殖、侵袭并加速凋亡;与si-NC组相比较,si-RECK组细胞增殖、侵袭能力均显著增加(P＜0.05),而细胞凋亡能力显著下降(P＜0.05),敲低RECK增加了OSCC细胞的增殖、侵袭并降低凋亡;与miR-503 inhibitor + si-NC组相比较,miR-503 inhibitor + si-RECK组细胞中RECK mRNA的表达水平和细胞凋亡能力均显著下降(P＜0.05),细胞增殖、侵袭能力显著增加(P＜0.05),敲低RECK可削弱miR-503 inhibitor对OSCC细胞生物学行为的抑制作用.结论:miR-503 在OSCC细胞中表达上调,抑制miR-503 可削弱其对靶基因RECK的下调,从而降低肿瘤细胞的增殖与侵袭能力,并促进细胞的凋亡.

目的:分析回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元(reversion inducing cysteine rich protein with Kazal motifs,RECK)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其与涎腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma,PA)肿瘤复发的相关性.方法:采用荧光实时定量PCR和细胞爬片方法检测15例涎腺初发型PA与19例涎腺复发型PA中RECK和MMP-9的转录与蛋白表达水平.结果:PCR结果显示:复发型PA细胞中RECK mRNA表达均显著低于初发型,而MMP-9 mRNA在复发型PA细胞中均显著高于初发型PA,结果均具有统计学差异(P<0.05).初发型与复发型PA细胞中RECK/MMP-9比值分别为15.89、0.33.RECK/MMP-9比值从15.89下降至0.33.细胞爬片发现,复发型PA细胞中RECK表达低于初发型,而MMP-9在初发型PA细胞中阳性表达低于复发型,其结果均具有统计学差异(P<0.05).初发型与复发型PA细胞中RECK/MMP-9比值分别为1.76、0.60,RECK/MMP-9比值从1.76下降至0.60.结论:RECK和MMP-9在涎腺初发型与复发型PA细胞中的表达差异显著,可能与涎腺PA的复发相关.

目的 基于生物信息学筛选结直肠癌转移相关的mRNA、miRNA及lncRNA,分析其在结直肠癌转移中的作用.方法 通过生物信息学方法筛选出与结直肠癌转移相关的mRNA、miRNA及lncRNA,采用荧光定量PCR(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测筛选出的miR-221/26a、lncRNA GAS5和回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元(RECK)mRNA在结直肠癌组织中的表达;构建lncRNA GAS5过表达和沉默细胞株验证miRNA、lncRNA和RECK相互关系.结果 软件预测结果显示miR-221/26a可以跟RECK mRNA结合,lncRNA GAS5可同时结合miR-221/26a;qPCR结果显示miR-221/26a在结直肠癌组织中的表达高于相应的癌旁组织(P<0.001、或0.05),而lncRNA GAS5在结直肠癌中表达水平降低(P<0.001);成功构建GAS5过表达和沉默细胞株后,结果显示过表达GAS5时miR-221/26a含量下降(P<0.011,或<0.05),RECK蛋白含量降低;而沉默GAS5会上调miR-221/26a含量(P<0.05),促进RECK蛋白表达.结论 miR-221/26a与lncRNA GAS5在结肠癌肿瘤组织均存在异常表达,并可能影响RECK蛋白表达进而影响结直肠癌肿瘤的转移.

胶质瘤是中枢神经系统常见的原发性肿瘤.常规治疗方法是手术切除结合放化疗,但常常预后不良.因此,迫切需要在胶质瘤中识别新的潜在靶点并开发更有效的治疗药物.丙戊酸具有组蛋白去乙酰化酶抑制剂性质,已被证实对多种肿瘤有抑制作用.现有研究证实,丙戊酸可通过调控细胞外信号调节激酶/蛋白激酶B(Akt)信号通路、Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白等信号通路,以及调节回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元、O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶、核转录因子红系2相关因子2、对氧磷酶2、Smad4、糖原合成酶激酶-3β等蛋白表达水平,进而诱导胶质瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞,降低胶质瘤细胞侵袭转移能力,增加胶质瘤细胞放化疗敏感性等多种途径发挥抗肿瘤作用.此外,丙戊酸还可通过抑制胶质瘤干细胞的生长和诱导胶质瘤干细胞的分化提高抗癌药物效果.总之,丙戊酸可通过多靶点作用方式抑制胶质瘤,有可能成为治疗胶质瘤的新型靶向药物.