目的 采用光激化学发光分析(LICA)技术建立快速定量检测人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的方法.方法 采用2株配对的HMGB1单克隆抗体(简称单抗),1株单抗包被受体微球,另1株单抗先用生物素标记,再与链霉亲合素的供体微球共同组成人HMGB1的LICA检测方法,进而优化反应体系并对方法的各项性能指标进行评价.分别测定普通肺炎患者(35例)和重症肺炎患者(25例)血清HMGB1的浓度,并与健康体检者(35名)进行比较.结果 建立的HMGB1HCA检测方法的灵敏度为0.1μL,线性测量范围为0.1～1 000 μg/L;批内和批间精密度分别为1.74％～ 2.92％和1.93％～3.73％,均低于5％;回收率范围为94.53％～ 106.37％,平均回收率为99.74％;与酶联免疫吸附测定方法有良好的相关性(r=0.888 2);与HMGB2和HMGB3重组抗原无明显交叉反应,特异性良好.普通肺炎患者和重症肺炎患者血清HMGB1的质量浓度分别为(6.76±3.13)和(19.69±9.04) μg/L,均高于健康体检者[(1.49±0.74) μg/L;t值:-5.447和-5.186,均P＜0.01],普通和重症肺炎患者间差异亦有统计学意义(t=-3.500,P＜0.01).结论 LICA法检测HMGB1灵敏度高、特异性强、结果可靠,且具有均相、快速、免清洗等特点,有良好的临床应用前景.

目的 基于光激化学发光技术平台初步建立血清催乳素(PRL)的分析方法,并评估其性能指标.方法 将发光纳米微球和生物素分别标记于一对人PRL单抗,两者与血清中待检PRL、链霉亲合素标记的感光微球(通用感光溶液)在均相条件下形成双抗体夹心的检测体系,对该检测体系的性能指标和相关性进行评价.结果 本方法的批内变异系数和日间变异系数分别为4.60％和5.25％;功能灵敏度为2.48μIU/mL,可报告范围为2.48～4240μIU/mL;回收试验加入浓度为42.2、424、4240μIU/mL PRL标准品时的回收率为96.25％～102.93％;胆红素<20 mg/dL、血红蛋白<200 mg/dL、三酰甘油<3000 mg/dL、生物素<20 ng/mL时,均无干扰现象发生;该方法与贝克曼Unicel Dxi 800 Access 2增强化学发光酶免疫分析法具有良好的相关性.结论 光激化学发光法检测血清PRL的方法具有良好的分析性能,可满足临床诊断需求.

呼吸道或蚊媒传染病可通过气溶胶或蚊类传播,容易导致疫情蔓延,甚至出现疫情暴发,如2009年的全球甲流疫情和广东省2014年的登革热疫情.当传染病疫情大面积暴发时,负责病原体检测的实验室往往需要能承担大样本检测的技术方法及配套设备.本文综述分析了近20年来发展的病原体检测技术,重点讨论能适应大样本筛检的方法并提出建议,供病原体检测实验室参考.

目的:建立一种基于光激化学发光分析(LiCA)技术定性检测血清CMV-IgM抗体的新方法.方法:利用CMV抗原包被的发光微球,生物素标记的鼠抗人IgM抗体以及链霉亲和素包被的感光微球共同构成完整的分析体系,优化反应缓冲液、抗原抗体工作浓度和待检血清稀释比例,并进行方法学评价和临床结果比对.结果:本方法的批内和批间变异系数为5.3％～6.1％和6.9％～9.8％,均小于10％;ROC曲线分析显示,曲线下面积为0.997,灵敏度为100％,特异度为98.9％;在100例血清样本的检测中,本方法与LIAISON检测结果符合率为95.0％.结论:成功建立了LiCA间接法反应模式定性检测CMV-IgM抗体的方法.该检测方法操作简单、快速、灵敏度高,有潜在的临床应用前景.

目的 建立一种腺病毒IgM抗体的均相光激化学发光免疫快速检测方法(AlphaLISA).方法 通过筛选小鼠抗人IgM单克隆抗体标记受体微球、链霉亲和素偶联供体微球和生物素化腺病毒抗原的最适比例,构建腺病毒IgM抗体均相AlphaLISA快速检测体系;采用呼吸道感染样品对该检测体系进行评价,并与间接免疫荧光方法比较.结果与结论 该法重复性较好,批内和批间变异系数均小于5％,与间接免疫荧光方法相比总符合率为87.21％,且不与其他常见呼吸道病原体的IgM抗体发生交叉反应.该法用于腺病毒IgM抗体的快速检测,可为早期确诊腺病毒感染提供可行方案.

目的 建立乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定性测定的快速连续监测法.方法 摸索均相光激化学发光免疫分析技术检测HBsAg的反应时间条件,建立短时连续检测程序.使用分类回归树(CART)算法,根据10个组合分类变量建立阴阳性判断规则,同时根据阴性、阳性样本重叠区域,建立可疑判断规则.对连续监测法进行检出限验证,并比较连续监测法和第1次读数的阴性复检率.结果 确定均相光激化学发光免疫分析技术检测HBsAg的2次温育时间分别为9 min、4 min,之后每分钟检测1次,连续3次,总反应时间为15 min.采用CART决策树建立了判断规则,在该规则下,样本验证阴性符合率为100％,阳性符合率为97.5％.训练样本风险指数为0.02,验证样本风险指数为0.011,均小于0.05.连续监测法在0.1 IU/mL时检出限验证符合要求.连续监测法的阴性复检率为2.55％,第1次读数方案的阴性复检率为7.64％,两者差异有统计学意义(χ2=4.215,P=0.04).结论 连续监测法在满足定性准确性和低复检率要求下可缩短反应时间.