目的:研究垫状卷柏、翠云草两种卷柏属植物对体外培养的人单核细胞白血病细胞U937细胞的增殖和凋亡的影响.方法:分别采用95％乙醇对两种植物采用冷浸和热提取两种提取方法,回收溶剂后萃取得乙酸乙酯和石油醚萃取物.采用噻唑兰比色法(MTT)检测不同浓度样品作用于U937细胞24h后的细胞增殖情况,Hoechst33342染色分析细胞形态学变化,Western Bolt检测凋亡蛋白表达情况.结果:MTT法分析表明垫状卷柏、翠云草提取物均对U937细胞的增殖抑制成剂量依赖性关系.其中垫状卷柏热提物效果最佳,其乙酸乙酯和石油醚萃取物均有良好抑制效果,乙酸乙酯萃取部位抑制作用更强;Hoechst33342染色发现随着提取物浓度升高,凋亡细胞增多;Western印记分析凋亡相关蛋白,其中Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量减少,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量减少.结论:两种卷柏均能有效抑制U937细胞增殖,并且热提总提物抑制效果优于冷漫总提物,其中垫状卷柏热提总提物的乙酸乙酯萃取层初步认为可能是垫状卷柏抗肿瘤的有效部位,其诱导U937细胞凋亡与Caspase依赖性线粒体途径相关.

目的 研究垫状卷柏提取物抗肿瘤作用及相关机制.方法 采用皮下接种H22肝癌细胞株构建小鼠H22肝癌移植瘤模型,随机分为对照组(生理盐水)、5-FU组(30 mg/kg)、垫状卷柏提取物(SP)高、低剂量组(189、63 mg/kg),连续灌胃15d.观察小鼠肿瘤生长情况,计算抑瘤率及肝、脾、胸腺指数;TUNEL法观察肿瘤组织细胞凋亡,Western blot测定凋亡相关蛋白的表达,qPCR检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA.结果 与对照组比较,SP高、低剂量组小鼠体质量及肝、脾、胸腺指数均无显著差异;SP高、低剂量组小鼠的肿瘤质量均显著降低,呈现较高抑瘤率(P＜0.01),且高剂量组与5-FU组相近;经TUNEL染色法观察,可见明显凋亡形态改变.qPCR检测表明,SP显著上调Bax mRNA的表达,下调Bcl-2 mRNA的表达.Westernblot结果显示SP处理后,Bax、cytochrome c及cleaved caspase-3,caspase-8和caspase-9的表达显著上调(P＜0.01),Bcl-2表达明显减弱,呈剂量依赖性.结论 SP有效抑制H22小鼠体内肿瘤生长,其机制与激活caspase诱导凋亡相关.

目的 研究垫状卷柏SelaginellapⅡlvinata(Hook.& Grev.)Maxim.的化学成分.方法 垫状卷柏95％乙醇提取物采用MCI、硅胶、C18柱、SephadexLH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 从中分离得到8个化合物,分别鉴定为穗花杉双黄酮(1)、黑麦草内酯(2)、丁香酸(3)、selaginpulvilin A(4)、selaginellin(5)、2,6-dihydroxy-3,4-dimethylbenzoic acid methyl ester(6)、pratensein-7-0-β-D-glucopyranoside(7)、4-ethoxy benzoic acid(8).结论 化合物2、6～8均为首次从卷柏属中分离得到.

目的:采用DNA条形码技术鉴定卷柏药材的植物来源,并测定其总酚酸含量.方法:提取DNA,通过PCR扩增,对其进行测序与报道序列比对确定药材来源.采用NaOH滴定法测定卷柏中有机酸的含量,优化福林酚比色法测定条件并测定卷柏中酚类化合物的含量.结果:药材卷柏的植物来源有两种:卷柏和垫状卷柏.卷柏中有机酸含量为0.16％,酚类化合物含量为0.11％.优化福林酚比色法测定卷柏总酚类化合物含量的最优条件为检测波长582nm,福林酚试剂的用量为反应液的2倍,福林酚试剂与12％Na2CO3溶液的体积比为1:1,最佳反应时间为2h.结论:ITS2序列作为DNA条形码可以鉴定卷柏药材植物来源,为卷柏药材的分子鉴定提供方法;建立了卷柏总酚酸的含量测定方法,为卷柏总酚酸的研究奠定基础.

该文描述了在越南发现的卷柏科一新种——越南卷柏(Selaginella pseudotamariscina X.C.Zhang&C.W.Chen).经过分子系统发育分析并与近缘种形态比较,认为该新种是卷柏属(Selaginella)同穗亚属(subg. Stachygynandrum)的一个物种,与S. digitata-S. imbricata 分支为姐妹群关系.该新种与卷柏(S.tamariscina) 和垫状卷柏(S. pulvinata) 的形态近似,其植株均为莲座状,但不同之处在于中叶对称,似披针形,上表面具1 沟槽;孢子叶穗略压扁;孢子叶和营养叶性状和排列近似,孢子叶非同形,略异形,正置,腹面孢子叶大于背面孢子叶;背面孢子叶败育,孢子囊仅见于腹面孢子叶基部.

晚期胚胎发育丰富蛋白(late embryogenesis abundant,LEA),广泛存在于生物体内,与植物抗逆性密切相关,可在干旱胁迫下保护植物细胞,减少植物损伤.垫状卷柏(Selaginella pulvinata)是一种在干旱胁迫下生存能力极强的蕨类植物,具有很强的恢复能力.为探究垫状卷柏SpLEA1基因在耐旱植物中的分子机制与表达特征,该研究以高耐旱性植物垫状卷柏为实验材料,基于转录组测序结果,采用RT-PCR技术获得SpLEA1基因cDNA序列,采用HiTail-PCR技术获得启动子序列,利用生物信息学对序列进行了分析,并采用qRT-PCR技术分析了SpLEA1基因在干旱胁迫下的表达模式.结果表明:(1)垫状卷柏SpLEA1全长为476 bp,开放阅读框(ORF)为279 bp,共编码92个氨基酸,通过在线工具预测到蛋白分子量为9491.46 Da,等电点为5.45,蛋白结构预测分析表明该蛋白为亲水性蛋白,含有10个磷酸化位点,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主.(2)预测到SpLEA1蛋白的保守结构域为Lea-5,来源于LEA1家族.基于系统发生树和遗传距离矩阵,发现垫状卷柏SpLEA1与来自鹰嘴豆(Cicer arietinum)和红车轴草(Trifolium pratense)的Lea-5蛋白同源性较高.(3)对启动子序列进行顺式作用元件的预测分析发现SpLEA1基因启动子含有5类激素响应元件和与干旱胁迫响应有关的功能元件.(4)在自然干旱处理下SpLEA1基因表达上调,并在12 h时达到峰值,在24 h干旱后进行复水处理,表达量显著下调.综上所述,SpLEA1基因在垫状卷柏中很可能参与了干旱胁迫响应机制的相关调控.该结果为进一步研究垫状卷柏SpLEA1基因在干旱胁迫下的功能及其表达调控机制提供了参考.