近年来，异体皮来源极度匮乏，给大面积危重烧伤患者的救治带来了极大挑战。而异种猪皮虽然结构功能与人皮肤相似，但受免疫排斥反应、猪内源性反转录病毒感染等因素影响，其临床应用受到限制。随着基因编辑技术的发展，特别是成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9系统的出现，使一次实施多位点靶基因编辑成为可能，为异种猪皮治疗烧伤创面带来了广阔的应用前景。该文着重对异种猪皮移植治疗临床烧伤创面的进展、存在问题、基因修饰/编辑策略及其应用研究进行讨论。

溶瘤病毒是指能够特异性杀伤肿瘤细胞的天然病毒或经过基因工程改造后的病毒，经过瘤内注射后可以通过多重机制达到肿瘤杀伤和激活免疫的治疗效果。膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一，也是公认对免疫治疗响应性较好的"热肿瘤"。目前，世界范围内卡介苗短缺，需要探索潜在的卡介苗灌注替代药物；针对卡介苗灌注失败的患者也亟需探索新的保膀胱治疗方案。近些年，溶瘤病毒治疗非肌层浸润性膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌的基础研究和临床研究均取得许多突破，本文就溶瘤病毒的基本概念、种类特性、给药方式、近年来溶瘤病毒在膀胱癌中的基础研究进展及临床试验进展做出述评。

患者女，11岁，因患重度β型地中海贫血于2022年7月27日在深圳市儿童医院接受细胞与基因治疗（CGT）。出院后2次随访检测均发现患者的HIV-1病毒抗原及抗体筛查实验（化学发光法）结果呈阳性，2次HIV-1核酸定量试验病毒载量结果均>5 000拷贝/ml，按照《全国艾滋病检测技术规范（2020年修订版）》可判定为HIV/AIDS感染。但经深入调查与比对实验发现：该患者HIV-1核酸检测结果异常，系其CGT治疗过程中自体造血干祖细胞基因组整合的慢病毒载体片段与现用HIV-1核酸检测试剂盒检测靶位点存在交叉反应所致，提示在对接受过CGT的人群进行HIV-1核酸检测时，需根据其所用基因工程载体选择合适的、不会引起交叉反应的检测平台。同时建议设计开发专门用于HIV核酸补充试验的采用多靶点不同荧光标记的检测平台，以降低艾滋病病毒感染的假阳性诊断风险。

流感是一种严重危害人类健康的急性呼吸道传染性疾病，接种流感疫苗是预防流感最有效的措施。传统的以鸡胚为基础生产的灭活或减毒活疫苗生产周期长，且由于流感病毒不断发生抗原漂移或抗原转变，常导致生产用的疫苗株和流行株表面抗原不相匹配，造成流感疫苗有效性显著降低，因此迫切需要寻找一种快速高效的流感疫苗生产策略来克服这一局限性。近些年来基因工程技术和各种递送系统的开发使得核酸疫苗得到了很好的发展，尤其mRNA疫苗因其生产工艺简单、安全性良好等特点受到了广泛关注。因此基于mRNA的疫苗免疫策略为预防流感提供了一个新的研究方向。此文就mRNA疫苗开发中的分子设计、递送系统及在流感中的研究进行综述，为流感mRNA疫苗的研发提供参考依据。

从牛痘疫苗的发明至今，疫苗的研发经历了数个里程碑式的革新，疫苗的种类从传统灭活、减毒活疫苗发展到新型基因工程疫苗。疫苗接种显著地降低了传染性疾病的发生率和死亡率，使人类寿命明显延长。疫苗接种率是传染病预防的关键，得益于儿童免疫规划，目前全球儿童疫苗覆盖率为85%，而成人疫苗接种现况不容乐观。当前疫苗研发仍面临许多挑战，一些重大传染病如人类免疫缺陷病毒尚无有效疫苗；新型冠状病毒等新发传染病的大流行则考验着疫苗研发的速度。

目的:研究拉沙病毒（Lassa virus，LASV）密码子使用偏性及其偏性形成的影响因素，比较LASV和几种表达系统密码子使用频率，为LASV重组亚单位疫苗、mRNA疫苗、DNA疫苗等基因工程疫苗的制备筛选出最优外源表达系统。方法:使用Excel 2007、EMBOSS、CondonW1.4.2、SigmaPlot 14.0、SPSS 22.0等软件分析LASV核心蛋白（nucleoprotein，N）、包膜糖蛋白（envelope glycoproteins，G）、锌结合蛋白（zinc-binding protein，Z）、RNA聚合酶（RNA polymerase，L）蛋白共446条基因序列的密码子偏性及其影响因素，并将LASV密码子使用模式与几种不同表达系统进行比较。结果:LASV的各蛋白编码序列的各位置GC含量存在较大差异，各蛋白平均GC3含量为42.29%~59.47%，ENC均值41.73~52.81，除Z蛋白密码子偏性较强外，N、G、L三种蛋白密码子偏性较弱。4种蛋白RSCU>1的密码子共108个，约占45.76%，其中以A/U结尾占63.9%，GUU、GUG、UCU、UCA、CCU、ACA、GCU、GCA、AGA、AGG为LASV多数蛋白的高频密码子，GCA、AGA为4种蛋白共有的高频密码子。ENC-Plot、中性分析、PR2绘图分析显示，LASV的各蛋白密码子使用偏性受到不同因素影响，其主要因素是自然选择，突变是次要原因。对比分析提示人和酵母菌是LASV较合适的外源表达系统。结论:LASV 4种蛋白偏向使用A/U结尾的密码子，目前自然选择是其偏性的主要影响因素，与常用表达系统密码子偏性比较分析提示人和酵母菌是LASV疫苗制备的最优外源表达。

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)是导致人类疱疹性疾病的主要病原体，具有广泛宿主细胞类型、庞大外源基因容量等特点，因此也是一种颇具吸引力的病毒载体。HSV基因组较为庞大，对于病毒基因组的操作技术便成为关键环节。对该病毒基因组的操作先后经历了同源重组(homologous recombination),细菌人工染色体技术(bacterial artificial chromosome, BAC)和CRISPR/Cas9 (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeat/CRISPR-associated nuclease 9 )技术。同源重组具有重组效率低、产物不易纯化等缺点，而且将大型病毒基因组克隆到BAC上是一个耗时耗力的过程。近年来，CRISPR/Cas9技术因其操作简便、重复性好、成本低廉等优势而被越来越多的研究者应用于各种物种的基因工程研究工作中，对于病毒基因组的操作也随之更加精确高效。本文对CRISPR/Cas9技术在HSV基因功能、治疗HSV感染性疾病及HSV载体研究中的应用进行综述，以期对相关的研究工作提供一定参考。

评述了目前在全世界范围内被批准紧急使用的几种新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎)疫苗的安全性、免疫原性和有效性，以及疫苗研发和接种可能面临的挑战。新冠肺炎疫苗采用的技术有基于mRNA，腺病毒载体的基因工程疫苗和传统的灭活病毒疫苗。疫苗的有效性从60%~95%左右。由于疫苗急迫的开发和匆促的批准使用，疫苗的安全性、保护作用持续的时间，免疫学机制，对病毒变异株感染的保护作用等都还需要更多的研究和观察。

新冠肺炎疫情催生了新冠病毒疫苗的快速研发和应用，2020年年底以来国内外陆续有4类11款新冠疫苗已获批附条件紧急上市。上市前，这些疫苗的有效性和安全性评价都表现良好。但是疫苗上市后，在真实世界( real-world)随着接种剂次的增加，某些疫苗接种后陆续出现罕见的不良反应，引起了人们的广泛关注。在所有的不良反应中，尤以疫苗诱导的伴有血小板减少免疫性血栓最为严重。此病虽然发生几率低，但一旦发病比较危重，死亡率高。欧美国家使用的主流4款疫苗，阿斯利康黑猩猩腺病毒载体疫苗、强生人26型腺病毒载体疫苗、Moderna mRNA疫苗和辉瑞mRNA疫苗，接种后引起的伴有血小板减少免疫性血栓的报告率分别为每百万人5.7~21.7、0.9~11.5、0.9~5.6和0.4~1.9例。我国使用的4款灭活疫苗、1款人5型腺病毒载体疫苗和1款基因工程重组蛋白疫苗以及俄罗斯使用的人5型/26型腺病毒载体疫苗，到目前为止没有此病的病例报告。但随着接种剂次的增加，应密切注意和随访可能出现的、罕见的不良反应的发生。

目的:制备重组流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)三聚体蛋白疫苗并进行相关表征分析，研究重组HA三聚体在小鼠模型中的免疫原性。方法:构建稳定表达HA三聚体蛋白的CHO细胞株，通过Western blot、单向免疫扩散试验、蛋白质粒径检测和N-糖基化位点分析对重组蛋白进行定性及定量分析。根据剂量、佐剂等处理条件的不同将BALB/c小鼠分为11个组，并进行一致的免疫程序。初次免疫后56 d检测血清中和抗体效价，以评价免疫原性。结果:构建的CHO细胞株能够分泌表达HA三聚体。HA三聚体具备生物学活性能够在单向琼脂免疫扩散试验中形成沉淀环，蛋白质粒径大小约为18.79 nm，具有10个N-糖基化位点，包括高甘露糖型、复合糖型和杂合糖型；HA三聚体重组蛋白疫苗在2次免疫小鼠后，3.75 μg剂量配伍RFH01佐剂与对照组单价疫苗原液15 μg引起的中和抗体效价差异无统计学意义( P＝0.431 2， U＝36)，配伍佐剂组免疫后血清抗体效价均高于未加佐剂组，其中15 μg HA三聚体+RFH01组效价最高，为1 280。 结论:成功制备了流感病毒重组HA三聚体蛋白，其与RFH01佐剂配伍能够诱导BALB/c小鼠产生针对流感病毒的体液免疫应答，为流感病毒重组亚单位疫苗的研发提供了参考。