目的:利用分子分型及基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对现有的荚膜组织胞浆菌( Histoplasma capsulatum)和球孢子菌属( Coccidioides sp.)复核鉴定并聚类分析。 方法:通过多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)对10株荚膜组织胞浆菌进行系统发育分析；利用特异性片段( Coi区)明确7株球孢子菌的种归属；MALDI-TOF MS技术建立荚膜组织胞浆菌和球孢子菌的MALDI-TOF MS自建数据库，并从蛋白质指纹图谱角度对两类真菌进行同源性分析。 结果:通过MLST分析，可以将10株荚膜组织胞浆菌分为3个进化支：欧洲型(Eurasia clade)、澳洲型(Australia clade)和北美2型(North American class 2 clade)，且质谱聚类分析亦将10株荚膜组织胞浆菌分为3个簇；利用特异性片段( Coi区)鉴定7株球孢子菌为波萨达斯球孢子菌，同时MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱同源性分析将其归为两个簇。两类真菌MALDI-TOF MS建库后验证符合率为100%。 结论:分子鉴定后所有球孢子菌明确为波萨达斯球孢子菌，与美国流行情况一致；国内分离的荚膜组织胞浆菌归于欧洲型、北美2型和澳洲型这3个型别；MALDI-TOF MS建库数据可靠且质谱同源性分析可作为分子分型的补充，成为荚膜组织胞浆菌和波萨达斯球孢子菌鉴定和溯源的另一手段。

目的 制备人源copine-8(CPNE8)蛋白的多克隆抗体.方法 反转录PCR扩增HBE人支气管上皮细胞的CPNE8基因(编码CPNE8蛋白)并克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中,所得的重组载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白.谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析纯化目的蛋白并基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF)鉴定.以纯化的CPNE8蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法检测抗体的效价和特异性.结果 成功构建了pGEX-4T-1-CPNE8表达载体,重组CPNE8蛋白在大肠杆菌中高效表达.ELISA检测结果显示抗体的效价达1∶64 000;此多克隆抗体可经Western blot特异性识别原核表达的CPNE8蛋白,并可适合免疫组织化学技术检测该蛋白在人正常肺组织和肺癌组织中的分布.结论 成功制备具有较好结合特异性的CPNE8蛋白多克隆抗体.

目的 应用弱阳离子磁珠-飞行时间质谱-ClinProt系统联合筛选乳腺肿瘤患者与健康对照女性血清中的差异蛋白,建立乳腺癌诊断模型,并初步探究该模型诊断乳腺肿瘤的临床应用价值.方法 采用弱阳离子交换磁珠吸附提取血清标本(乳腺癌120例,健康对照40例)中的表达蛋白质/多肽,应用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪捕获血清蛋白谱图,利用ClinProt v3.0软件分析质谱图信息,找到2组间具有明显差异蛋白质/多肽,建立乳腺癌诊断模型,并选择乳腺癌和健康对照标本各20例进行双盲验证.同时检测纳入标本血清中癌胚抗原(CEA)和癌抗原153 (CA153)的含量,探究该模型对乳腺癌血清学诊断的临床价值.结果 比对病例组和对照组的蛋白质谱图,得到35个具有明显差异的蛋白峰(P＜0.05),其中7个在乳腺癌中表达上调,28个表达下调.根据遗传算法选取Mass 1 569、3 934、5 750、7 765建立乳腺癌诊断模型,该模型诊断乳腺癌和健康女性的灵敏性为95.0％,特异性为92.5％.双盲验证结果显示灵敏性为85.0％,特异性为90％.该模型对乳腺癌的诊断效能高于CEA和CA153的联合诊断.结论 应用液体芯片-飞行时间质谱技术-ClinProt系统能够检测乳腺癌血清中的差异蛋白,同时能够建立灵敏性、特异性均较好的乳腺癌诊断模型,为乳腺癌诊断开拓了新的途径.

目的 对1例急性感染性腹膜炎继发毗邻颗粒链菌败血症患者进行菌种鉴定及临床资料分析.方法 采用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术、全自动微生物鉴定系统(Vitek 2 compact)、16S rRNA序列分析技术及API20 Strep结合细菌的菌体形态及生长特征等多种方法对1例毗邻颗粒链菌败血症患者进行菌种鉴定,并对临床资料进行分析.结果 MALDI-TOF-MS技术、Vitek 2 compact及16S rRNA均鉴定为毗邻颗粒链菌,可信度均为98％以上.而API20 Strep则出现没有可信的鉴定结果.结合菌落形态、生长特点及临床特征,最终鉴定为毗邻颗粒链菌.结论 毗邻颗粒链菌为兼性厌氧菌,具有形态多形性、染色可变性及生化特性的非典型性、在普通培养基上生长不良等特点,临床表现与大多数病原体引起的败血症无明显差异,常规方法鉴定困难.本研究结果表示MALDI-TOF-MS技术、Vitek 2 compact及16S rRNA三种方法均可将对毗邻颗粒连菌准确,而MALDI-TOF-MS技术对毗邻颗粒链菌的鉴定具有简便、快速、准确等特点.

为了阐明外源 H2 S对高盐胁迫下黄瓜蛋白质表达的影响,以盐敏感型黄瓜栽培种‘春夏秋王’为材料,通过双向电泳(2-DE)技术分离叶片总蛋白质,采用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)技术对差异表达蛋白质进行质谱鉴定,并利用 NCBI及 SwissProt 数据库检索进行差异表达蛋白质功能注释和代谢通路分析.结果表明:(1)共检测到约 2 490 个蛋白质,其中蛋白质表达差异在 1.5 倍以上且差异显著(P＜0.05)的有45 个,其中有24 个蛋白质表达上调,21 个蛋白质表达下调.(2)成功鉴定蛋白质26 个,这些蛋白质参与了光合作用(26.92%)、蛋白质代谢(23.08%)、能量与碳水化合物代谢(11.54%)、氨基酸生物合成(11.54%)、细胞结构相关蛋白(7.69%)、抗氧化作用(3.85%)、信号转导(3.85%)及未知功能蛋白(11.54%).(3)GO 注释表明差异表达的蛋白质分子功能主要以蛋白质结合与水解酶活性为主,生物学过程涉及应激反应、有机物代谢过程、胁迫响应和细胞分化等,细胞组成集中分布在细胞部分和一些胞内细胞器.KEGG代谢通路分析表明,差异表达蛋白质主要参与了肌动蛋白细胞骨架调控、细胞凋亡、碳代谢和光和调控等代谢途径.研究表明,外源 H2 S诱导了高盐胁迫下黄瓜叶片蛋白质的差异表达,为后续探索外源 H2 S对黄瓜的抗盐分子机制研究提供了理论依据.

目的:对注射用胸腺法新中与胸腺法新主峰较难分离的杂质结构进行鉴定并测定7家企业样品中杂质的含量.方法:结合使用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)和二维-超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(2D-UPLC-Q-TOF)测定杂质分子量并对结构进行鉴定,同时采用与合成的杂质对照品通过保留时间比对进行结构确认,并且通过HPLC方法对杂质含量进行测定.结果:测得胸腺法新主峰前后5个杂质分别为3个异构体杂质([D-Ser1]-胸腺法新、[D-Asp15]-胸腺法新、[D-Asn28]-胸腺法新)、1个缺失肽杂质([Des-Ala3]-胸腺法新)和1个水解杂质([Asp28]-胸腺法新),杂质含量为0.1％～1.0％.结论:使用两种质谱技术对杂质结构进行鉴定,结果可靠,本研究为完善质量标准以及制定合理的杂质限度提供了依据.

目的 了解福建省4个地区军团菌的基因特征与分布情况.方法 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对2013-2020年分离自福建省4个城市的32株9个血清型(Lp1、Lp3、Lp4、Lp5、Lp6、Lp7、Lp8、Lp9、L.micdadei)军团菌进行鉴定,结合多位点串联重复序列分析(MLVA)检测分析其中8个位点(lpsm1,lpsm3,lpsm13,lpsm17,lpsm19,lpsm33,lpsm34,lpsm35)对其中的13株Lp1进行分型.结果 32株军团菌均可通过MAL-DI-TOF MS检测到属种水平,鉴定分值平均值为2.04±0.16;通过蛋白聚类可以分为A、B、C3个群;对其中的13株Lp1菌株进行MLVA分型,菌株间相似度为40.9％～87.5％,按照100％的相似水平可分为13个MLVA型,无优势MLVA型.Lp12013-25(7号菌)和Lp12013-14(9号菌)在MALDI-TOF MS和MLVA两种聚类均显示亲缘关系较近,并与其他菌株均存在差异.结论 MALDI-TOF MS技术可应用于军团菌的快速鉴定,但MALDI-TOF MS与MLVA用于军团菌的分子分型并不完全一致,可联合应用分析军团菌的群体遗传关系.